1、快速石蠟包埋組織切片的制備煮沸固定切片法1.固定：切取大小適宜（厚度<2mm的組織塊，盡快置入裝有58ml 10刈 性4%甲醛的試管中煮沸1min,然后已入冷水中。2脫水（1）將已經煮沸固定的組織塊取出，用刀片將其厚度修切至<1.5mni隨即置入盛有 58 ml 丙酮的試管中，煮沸 2 min ，然后將丙酮傾棄。（2）再向該試管中重新加入58 ml丙酮并煮沸2min。如此重復34次。3浸蠟：將已經丙酮脫水的組織塊由試管中取出，用吸水紙去除其表面液體， 隨即置入7580熔化的石蠟中，待組織塊下沉、 不再出現氣泡時 （約需30s） ，即可包埋。4包埋、切片和染色。（ 1）用熱鑷子將預制

2、的蠟塊表面熔化，埋入已經浸蠟的組織塊。（ 2）待埋入組織塊的蠟塊表面凝固后，即用載玻片輕壓蠟塊表面片刻，使蠟塊表面平整。（ 3）將蠟塊置入冰水中，使其變硬。（ 4）迅速切片，裱片后用吸水紙去除載玻片上的水分。（ 5）將載玻片用火焰烘干（勿距火焰太近）。（6）迅速進行HE染色。5注意事項（ 1） 為了盡量縮短制片時間， 必須預先作好有關準備工作， 備齊取材用具、試管、固定液、丙酮、酒精燈、火柴（或其他引火器） 、包埋用蠟塊、載玻片和染色試劑等，放在固定部位待用。（ 2）全部制片過程一般在2025min 內完成。（ 3）制片后剩余組織塊應作常規石蠟包埋切片染色，進一步診斷。（ 4）含脂肪較多的組織

3、，須經多次丙酮處理。（ 5） 用于組織固定、 脫水、 透明的試劑和浸蠟用的石蠟應及時過濾、 更換。（ 6）丙酮、乙醇、二甲苯等為易燃物，進行上述各項流程時，2m距離內不得存在明火。加溫脫水和浸蠟過程必須應用隔水溫箱，不得使用干烤箱操作。超聲波快速處理儀石蠟切片法（參照有關廠商的說明書操作）。四、冷凍組織切片的制備應用恒冷箱切片機制備切片： 是目前最適用方法。 恒冷箱切片機種類較多，應嚴格按有關廠商的說明書操作。用于切片的標本必須未曾固定。應用開放式冷凍切片機制備切片1二氧化碳制冷切片（ 1）將組織塊放在冷凍臺上，滴加OCTE羥甲基纖維素液于組織塊周圍（將 組織塊包埋） ，使固定在切片機上的切片

4、刀接近組織塊表面。（ 2）間斷開放液態二氧化碳桶的開關，噴凍組織塊和切片刀，使組織塊凍結和切片刀制冷。（ 3）迅速移動切片刀進行切片：先將組織塊修平，然后調節厚度至812小m處進行切片。（ 4）用毛筆將切片展開，貼附于載玻片上，稍干后，置于冷凍切片固定液中固定1min,隨即進行HE染色。也可用毛筆將切片托入水中，再用玻璃彎針將 切片移至染色皿中進行染色。（ 5）組織塊也可先在4%H生甲醛中煮沸固定1min,水洗后再行冷凍切片。2半導體致冷切片（ 1）切片刀與持刀器之間要間隔一層云母片或硬紙片。將冷刀致冷器粘在刀面上。（ 2）將組織冷凍臺安裝在半導體切片機上。（ 3）將冷凍臺和切片刀致冷器上的導

5、線連接在控制臺直流電源上（注意：正負電極不可接反） 。（ 4）連接致冷器的冷卻水管并開始放水，然后開啟電源；冷卻水管中的水流量不宜過大，在使用過程不得斷水。（ 5）調整冷凍溫度調節器，至切片刀和冷凍臺呈現霜凍。（ 6） 將新鮮組織塊或已固定的組織放在冷凍臺中央， 滴加水或OCT， 或用水調成糊狀的甲基纖維素于組織塊周圍（將組織塊包埋） 。（ 7）待組織塊冷凍適當后，進行切片。（ 8）對于未經固定的新鮮組織，用毛筆將制作滿意的切片展平，立即裱貼于蓋玻片或載玻片上， 待冷凍的切片剛要融化時， 立即將其置于冷凍切片固定液中固定1min。 對于已經固定的組織塊， 可用毛筆將制作滿意的切片托入水中， 再

6、用玻璃彎針將切片移至染色皿中進行染色。（ 9）切片完畢后，先關閉電源，再關閉冷卻水，待冰霜融化后擦干機器，加罩。3甲醇致冷切片（按有關廠商的儀器說明書操作） 。4氯乙烷致冷切片（ 1）將新鮮的或已經固定的組織塊置于支持器中央，加少許水或OCT。（ 2）連續噴射氯乙烷于組織塊上，待組織塊凍結后，改為間歇噴射，使凍結適度，立即切片。使用氯乙烷時應注意防火、防爆。（ 3）進行組織切片的裱貼、固定和染色（與上述方法相同） 。注意事項1制作冷凍切片所需的試劑和設備等應處于隨時可供使用狀態。2 切取的組織塊大小適宜 （厚度<2mm） ， 并盡快置于冷凍組織切片機上制備切片。3調節冷凍程度，試切合適時

7、便迅速切片。冷凍不足無法切片，冷凍過度切片易碎。4冷凍切片固定液（ 1）乙醚 - 乙醇液無水乙醚 1 份95%乙醇1 份（ 2）乙醇 - 冰醋酸液95%乙醇100ml冰醋酸35滴五、脫鈣方法骨和其他鈣化組織， 通常需要脫去鈣鹽后進行切片。 骨組織脫鈣前需先行固定。常規脫鈣法：1 .將骨組織鋸成薄片（約1x1x0.3cm）。2 . 在AF中或4%中性甲醛中固定 612h。3 將骨片置于5%硝酸（急需時可置于37溫箱）中脫鈣，至用針輕刺可入時為止，約需1224h （小塊骨組織脫鈣僅需23h）,其間可更新脫鈣液23 次。4 流水沖洗12h。5 移入5%甲明礬液，24h。6 流水沖洗23h。7 按常規

8、脫水。8石蠟包埋。電解脫鈣法：將骨片置于裝有8%硝酸和10%甲酸混合液的電泳槽（有蓋的方形玻璃標本缸或燒杯）內的陽極處，6V直流電源下持續電解30min3h,至用針輕刺可入時 為止。骨髓組織脫鈣：可浸泡于苦味酸乙醇飽和液（占 85%、甲醛（占10%和冰醋酸（占5%）的混合液中（同時進行固定和脫鈣）。注意事項1骨片等脫鈣組織的厚度適宜。2脫鈣組織與脫鈣液的體積比>1:30 。3脫鈣過程中應不時搖動，多次更換脫鈣液。4脫鈣時間不可過長。5微波處理可加速脫鈣過程。6脫鈣后的組織必須用流水充分沖洗。7用于包埋的石蠟硬度適中（不要過軟或過硬）。六、蘇木素伊紅（HB染色HE染色是應用最廣泛的組織病理

9、學常規染色技術。染色程序1.石蠟切片HE染色（常規HE染色）（1）二甲苯 I 5 10min（2）二甲苯H 5 10min(3)無水乙醇I 13min(4)無水乙醇H 13min(5) 95%醇 I 1 3min(6) 95%>H 1 3min(7) 7) 80%乙醇1min(8) 8)蒸餾水 1min(9) 蘇木素液染色510min(10) 10)流水洗去蘇木素液1min(11) 1%fc酸-乙醇13s(12)稍水洗12s(13)返藍(用溫水或1%t水等)510s(14)流水沖洗12min(15)蒸儲水洗12min(16) 0.5%R紅液染色13min(17)蒸儲水稍洗12s(18)

10、80%醇 1 2s(19) 95%>1 2 3min(20) 95%>H 2 3min(21)無水乙醇I 35min(22)無水乙醇H 35min(23)石炭酸-二甲苯35min(24)二甲苯 I 3 5min(25)二甲苯 H 3 5min(26)二甲苯田35min( 27)中性樹膠封固注：(12)和(13)項可省去，但(14)的沖水時間需延長至1015min。(23)項可用無水乙醇代替；北方地區可省略。2.冰凍切片HE染色(1)冰凍切片固定1030s(2)稍水洗12s(3)蘇木素液染色(60 C) 3060s(4)流水洗去蘇木素液510s(5) 1%鹽酸-乙醇13s(6)稍水洗

11、12min(7)返藍(用溫水或19氮水等)510s(8)流水沖洗1530s(9) 0.5%紅液染色12min(10)蒸儲水稍洗12min(11) 80%醇 1 2min(12) 95%醇 1 2min(13)無水乙醇I 12min(14)無水乙醇H 12min(15)石炭酸-二甲苯23min(16)二甲苯 I 2 3min(17)二甲苯 H 2 3min( 18)中性樹膠封固注：(7)和(8)項可省去，但(9)的沖水時間需延長至1015min (細 胞核顯示更清晰)。(15)項可用無水乙醇代替；北方地區可省略。染色結果：細胞核呈藍色，細胞漿、肌纖維、膠原纖維和紅細胞呈不同程度的紅色。鈣鹽和細菌

12、可呈藍色或紫藍色。染色注意事項1切片染色前，應徹底脫蠟。2用含有升汞液體固定的組織，其切片染色前應先脫去汞鹽：( 1)石蠟切片脫蠟至水洗( 2) Lugol 液 20min( 3)流水沖洗5min( 4) 95%乙醇10min（ 5）水洗 1min（ 6） 5%次亞硫酸鈉水溶液5min（ 7）流水沖洗5min（ 8）顯微鏡觀察除汞滿意后，轉入 HE染色3脫除福爾馬林色素（必要時）：（ 1）石蠟切片脫蠟至水洗（ 2） 1%NaOH（1m歸 80%J亨（99ml）混合液 10min（ 3）流水沖洗5min（ 4）轉入HE染色4.嚴格執行HE染色流程，用顯微鏡控制細胞核的蘇木素染色質量。HE染片應著色鮮艷，紅、藍分明，對比清晰。5載玻片自二甲苯中取出后，應立即用潔凈、光亮的蓋玻片和稠度適宜的中性樹膠濕封載玻片。 封蓋處內無氣泡， 外無溢膠。 封片時必須進行操作人員和 局部環境的二甲苯污染防護。不應將組織切片烤干或風干后再行封片。6必須在載玻片的一端牢貼標簽。標簽上應印有病理科所在的醫院名稱。標簽上應清楚顯示有關的病理號及其亞號； 標簽上的病理號應準確無誤， 無涂改。7制片完成后，技術人員應對切片與其相應的病理學檢查記錄單或取材工作記錄單認真進行核對；確認無誤后，將制備好的