1、2021/5/71氣相色譜質譜法測定水發(fā)食品中氣相色譜質譜法測定水發(fā)食品中的甲醛的甲醛 返回2021/5/721 1引言引言 甲醛常用作消毒劑，防腐劑等，它是一種原生質毒物,接觸后即發(fā)生皮膚和粘膜強烈刺激作用，對人體細胞功能損害較大,甚至可能致癌。同時對記憶力，注意力等神經(jīng)行為功能也有影響。次硫酸氫鈉甲醛俗稱吊白塊或雕白粉,分子式為NaHSO2CH2O2H2O ,可釋放出甲醛。甲醛和吊白塊能改善食品的感觀性狀,具有漂白、防腐的作用。近年來不法商販為獲利,將吊白塊或甲醛作為防腐劑加入到水發(fā)食品中。國際上把甲醛列為能引起癌癥的物質。返回上一張下一張結束放映2021/5/73返回上一張下一張結束放映

2、 目前測定甲醛的經(jīng)典方法是分光光度法,該法簡單、快速，但易受酚、SO2以及其它醛、胺的干擾,容易造成假陽性。GC 法由于甲醛分子太小,直接進GC 分析時出峰太快,且在FID 檢測器無響應;LC 法也因甲醛極性太大而與溶劑峰同時流出,而且在紫外無吸收無法檢測。因此食品中甲醛的測定一般先將甲醛衍生,再用GC 或LC 法進行測定,但仍因食品基體復雜而常受到干擾,也易造成假陽性結果。 2021/5/74返回上一張下一張結束放映 本研究采用選擇性離子檢測(SIM) 對水發(fā)食品中甲醛進行GCMS 測定,消除了食品中復雜基體的干擾,提高了選擇性和準確度,該法目前未見報道。同時,對樣品提取方法作了改進,直接超

3、聲提取而無需將甲醛蒸餾出來,簡化前處理過程,縮短分析時間,較已有方法簡便快速,適應性廣。2021/5/75返回上一張下一張結束放映 2 2 原原 理理 2,4-二硝基苯肼（2，4-DNPH）作甲醛的捕集劑,可與甲醛反應,脫去一分子水,形成2,4-二硝基苯腙，此反應是不可逆的,反應式如下: 2021/5/76返回上一張下一張結束放映 3 3實驗部分實驗部分3.1 3.1 儀器與試劑儀器與試劑 GCMS2010 氣相色譜/質譜聯(lián)用儀(日本島津公司) ，超聲波發(fā)生器。 甲醛標準溶液:取含量為36 %38 %的甲醛(A.R) ,標定其準確濃度后,用水配制成1 g/ l 標準儲備液,置于冰箱內可保存三個

4、月,使用時再逐級稀釋成所需濃度。 衍生試劑:稱取1.0 g 2 ,4-二硝基苯肼(2 ,4-dinitrophenyldrazine ,DNPH ,分析純,中國醫(yī)藥集團上海試劑公司),加120ml濃HCL,配制成2g/l的衍生試劑,置于棕色瓶中,此溶液可保存三個月。二氯甲烷、鹽酸均為分析純。2021/5/77返回上一張下一張結束放映 3.2 3.2 樣品提取樣品提取 取適量購自海產(chǎn)品市場的水發(fā)蝦仁,粉碎后,稱取5. 0 g (精確至0.1mg),加水溶解定容至50ml,密封。超聲波振蕩提取20min,離心取上層清液備用。 3.3 3.3 衍生衍生 取20ml液體樣品或固體樣品提取液,加2mlD

5、NPH衍生試劑,混合均勻,避光衍生6h。標準溶液與樣品同時進行衍生。衍生產(chǎn)物2 ,4-二硝基苯腙用2ml二氯甲烷萃取。 2021/5/78返回上一張下一張結束放映 3.4 3.4 GCMSGCMS測定測定 色譜柱: DB-5(30m0.25mm0. 33m) 彈性石英毛細管柱,16010/min240(5min) 。載氣(He),柱前壓40KPa,分流比101,溶劑延遲2min,進樣量為1l 。 EI離子源,電子能量70eV ,離子源溫度200,電子倍增器電壓2300V,GCMS接口溫度250,選擇離子檢測(SIM)m/z 79、210。甲醛標樣衍生物的氣相色譜質譜總離子流圖見圖1。2021/

6、5/79返回上一張下一張結束放映 圖1 甲醛衍生物的總離子流色譜圖1：總離子流 2：m/z=79.00 3:m/z=210.00 213(t)(Inten)2021/5/710返回上一張下一張結束放映 4 4 結果與討論結果與討論 4.1 4.1 超生波提取時間的選擇超生波提取時間的選擇 選擇一定含量的樣品在超聲波振蕩器中進行樣品的提取，實驗了提取時間分別為10min15min20min 30min40min對測定結果的影響。實驗表明，當提取時間超過20min時測定的峰面積變化不大。因此，我們選擇超生波提取時間為20min。 2021/5/7119、 人的價值，在招收誘惑的一瞬間被決定。202

7、2-3-42022-3-4Friday, March 04, 202210、低頭要有勇氣，抬頭要有低氣。2022-3-42022-3-42022-3-43/4/2022 10:56:03 PM11、人總是珍惜為得到。2022-3-42022-3-42022-3-4Mar-224-Mar-2212、人亂于心，不寬余請。2022-3-42022-3-42022-3-4Friday, March 04, 202213、生氣是拿別人做錯的事來懲罰自己。2022-3-42022-3-42022-3-42022-3-43/4/202214、抱最大的希望，作最大的努力。2022年3月4日星期五2022-3-

8、42022-3-42022-3-415、一個人炫耀什么，說明他內心缺少什么。2022年3月2022-3-42022-3-42022-3-43/4/202216、業(yè)余生活要有意義，不要越軌。2022-3-42022-3-4March 4, 202217、一個人即使已登上頂峰，也仍要自強不息。2022-3-42022-3-42022-3-42022-3-42021/5/712返回上一張下一張結束放映 4 4.2 2衍生條件的優(yōu)化衍生條件的優(yōu)化 4 4.2.1 2.1 衍生劑用量的影響衍生劑用量的影響衍生劑DNPH 用量過大會吸附于色譜柱上,對色譜柱造成損傷；DNPH 用量過小將導致甲醛衍生不完全。

9、實驗了DNPH用量為1.0ml、2.0ml、3.0ml、4.0ml、5.0 ml 對測定結果的影響。結果表明,DNPH 用量在1.05.0 ml范圍內測定結果基本不變。為保證衍生反應進行完全,實驗選定DNPH用量為2.0ml。 2021/5/713返回上一張下一張結束放映 4 4.2.2 2.2 衍生時間的影響衍生時間的影響甲醛與2 2 ,4-二硝基苯肼的衍生反應速度較慢,衍生時間對測定結果影響很大。考察了衍生時間從0h、1h、2h、4h、6h、14 h 對測定結果的影響。結果表明,甲醛衍生物的峰面積隨著衍生時間的增加而增大,6 h 后趨于穩(wěn)定,實驗選擇衍生時間為6 h。2021/5/714返

10、回上一張下一張結束放映 4.34.3測定方法及檢測離子的選擇測定方法及檢測離子的選擇 由于食品基體復雜,用GC或HPLC法測定干擾較大,容易產(chǎn)生假陽性結果。通常需過層析柱再洗脫凈化,操作繁瑣,回收率較低。故選用GCMS選擇離子檢測方式(SIM),可消除雜質的干擾,避免產(chǎn)生假陽性,選擇性明顯提高,靈敏度也比全掃描模式提高兩個數(shù)量級。衍生產(chǎn)物2 ,4-二硝基苯腙的質譜圖見圖2 2021/5/715返回上一張下一張結束放映 從圖可見,2 ,4-二硝基苯腙的碎片離子豐度最大的峰為m/z 63 ,其次為m/z 79 ,分子離子峰為m/z 210。依據(jù)選擇離子的原則,應盡量選擇質荷比在高端的離子,以減少干

11、擾;同時應選擇豐度較大的離子,以提高靈敏度。綜合考慮以上兩個因素,選擇m/z 79 和m/z 210 為檢測離子,完全消除了雜質峰的干擾,保證了測定的準確性和靈敏度 25.050.075.0100.0125.0150.0175.0200.0m/z0.02.55.07.510.0Inten.(x100)79633051282103977891804212261371061526656118N NHNOONOO2021/5/716返回上一張下一張結束放映 4.44.4線性范圍、線性方程與檢出限線性范圍、線性方程與檢出限 取甲醛標準儲備液逐級稀釋成0.2mg/l、0.5mg/l、 1.0mg/l、2

12、.0mg/l、5.0mg/l、10mg/l、25mg/l、50mg/l 的系列標準溶液,進行GCMS-SIM分析。以A和C作定量工作曲線,線性方程為A=-848.6+1.148105C C, r為0.9996,在0.250mg/l的濃度范圍內線性關系良好。最低檢測濃度為0.1mg/l(S/N = 3),以取樣量5.0g計,本法對樣品的檢出限為0.1mg/kg。通常,甲醛或吊白塊作為食品添加劑在食品中的加入量遠高于10mg/kg才有防腐效果。國家規(guī)定啤酒中甲醛的含量不得超過2mg/l,故此方法檢出限完全滿足食品分析的要求。2021/5/717返回上一張下一張結束放映 4.5 4.5 方法的精密度和回收率方法的精密度和回收率 取5mg/l甲醛標準溶液20ml各6份,按實驗方法衍生、萃取、上機測定,考察方法的精密度,得到其相對標準偏差為1.67 %。表明本法具有良好的重復性。 準確稱取水發(fā)蝦仁樣品5.0g,分別加入20、40、40不同含量的吊白塊,按實驗方法測定樣品回收率。樣品編號樣品量(g)原含量(mg/L)加入量(mg/L)測得量(mg/L)回收率(%)1 5.0125 15.8 20 34.3 92.5 2 5.0352 20.6 40 62.1 101.2 35.102517.64056