1、.論著.不同方法檢測新型冠狀病毒血清抗體與凝血功能的結果探討于超，楊少明，王術，張家軍rangeof2.001-4.000,Amongthe4IgMpositivesamples,theSCOratiorangedfrom1.001to1.500于超，楊少明，王術，張家軍rangeof2.001-4.000,Amongthe4IgMpositivesamples,theSCOratiorangedfrom1.001to1.500通訊作者(營口市中心醫院呼吸內科，營口,115000)摘要：目的通過對新型冠狀病毒(SARS-CoV-2)免疫球蛋白IgM和IgG的檢測，對比核酸檢測的確診結果，并檢測

2、其部分凝血功能。方法收集了2020年4月13口至2020年4月16口營口地區接收的515例調查對象的檢測血樣，對標本以膠體金免疫層析法及磁微粒化學發光法進行(SARS-CoV-2)血清抗體IgM和IgG進行檢測，得出結果，結合核酸檢測結果，對比兩種方法的特異度，評估其應用于大規模人群篩檢的可行性。并檢測其部分凝血功能。結果515例調查對象核酸檢測結果均為陰性，抗體檢測結果分別為膠體金免疫層析法：IgG特異度9961%(2515),IgM特異度99.03%(5515),雙陽性特異度9981%(1515);磁微粒化學發光法：IgG特異度95.34%(24515),IgM特異度99.22%(4515

3、),雙陽性特異度100%(0515).磁微粒化學發光法檢測【gG陽性的24例標本中，結果sco比值分布于1.0011.500的標本12例(50%),分布于1.5012.000的標本5例(20.83%),介于20014.000的標本4例(16.67%),大于4.001的標本3例(125%);IgM結果陽性的4例標本中，sco比值分布于1.001L500的標本0例(0%),介于1.5012.000的標本1例(25%),大于2001的標本3例(75%).顯示凝血功能活化，結論1,單一方法血清抗體檢測受試劑質量及其他亞種冠狀病毒抗體的影響，導致假陽性率較高，不適用于人群初篩，2,磁微粒化學發光法檢測I

4、gG抗體假陽性率較高，可以通過調整其判讀標準可能降低假陽性率，3.血消抗體檢測具有操作方便，節約成本的優點，采用不同方法聯合檢測血清抗體，進行大規模的人群篩檢是提高效率的重要方法之一。凝血功能活化可作為治療、預后的參考。關鍵詞：新型冠狀病毒，新型冠狀病毒肺炎，化學發光法，膠體金免疫層析發，免疫球蛋白。中圖分類號R446.1文獻標志碼A文章編號1009-6213(2020)06-0903-04StudyontheResultsofDifferentMethodsfortheDetectionofSars-Cov-2SerumAntibodyYUChao,YANGShao-ming,WANGShu

5、,ZHANGJia-jun*(DepartmentofRespiratoryMedicine,TheCentralHospitalofYingkou,Yingkou,115000,China)Abstract:ObjectiveTodetectnovelcoronavirus(SARS-CoV-2)immunoglobulinIgMandIgG,pa)nntherestsirif'nucleididrficction,explorethecharacter!stiesofdifferentdetectionmethods,anditwpthefeasiilibytandcostfola

6、rge-scalescreeningbydifferentmethods.Methods515totalofbloodmpleswerecoleltedfromYi即koufromApril13,2020toApril16,2020TheserumantibodyIgMofsars-0v-2wasdefectedbycolloida1go'dimmunochromatographyandmagneticparticlechemiluminescenceAnd4Gdetection,gettheresults,combinedwiththenucleicaciddetectionresu

7、Its,comparethespecificityoftheiromethods,evaluatethefeasibilityofitsappjeationinlarge-scalepopulationscrewing,ResultsThenucleicacidtestresultsof515caseswereallnegative.Theresultsofantibodydetectionwerecolloidalgoldimmunochromatography:IgGspecificity99.61%(2/515),IgMspecificity99.03%(5I515),doublepos

8、itivespecificity99.81%(1515);magneticparticlechemiluminescence:IgGspecificity95.34%(24515),IgMspecificity99.22%(4/515),doublepositivespecificity100%(0/515).Amongthe24IgGpositivesamplesdetectedbymagneticparticlechemiluminescencemethod,12(50%)sampleswerefoundwithS/COratiointherangeof1.001-1.500,5(20.8

9、3%)intherangeof1.501-2.000,and4(1667%)in(he(0%),from1.501to2.000(25%),andfrom2.001to2.001(75%).Conclusion1.Thesinglemethodofserumantibodydetectionisaffectedbyreagentqualityandothersubspeciesofcoronavirusantibody,resultinginahighfalse-positiverate,whichisnotsuitableforthepreliminaryscreeningofthepopu

10、lation.2.ThefalsepositiverateofIgGantibodydetectedbymagneticparticlechemiluminescencemethodishigh,whichcanbereducedbyadjustingitsinterpretationstandard.3.Thedetectionofserumantibodyhasrheadvantagesofconvenientoperationandcostsaving.Itisoneoftheimportantmethodstoimprovetheefficiencybyusingdifferentme

11、thodstodetectscrumantibodyandlarge-scalepopulationscreening.Keywords:Novelcoronavirus,NovelcoronavirusPneumonia,Chemiluminescence,Colloidalgo：dImrnunochromatography,Immunoglobulin新型冠狀病毒(SARS-CoV-2)是人畜共患的正單鏈RNA病毒，有包膜，屬冠狀病毒。該科分為。、B、R了四個屬,SARS-CoV-2屬于6族，被列為第7類冠狀病毒，可引起新型冠狀病毒肺炎(COVID-19)1,嚴重者可導致死亡。COVID-

12、19主耍通過呼吸道飛沫和密切接觸傳播，無癥狀感染者及SARS-CoV-2患者均為傳染源，且人群普遍易感故早發小岫早皿"效控制皿°心"關淀。目前，明確的確診標準包括：1.實時熒光RT-PCR檢測新型冠狀病毒核酸陽性；2.病毒基因測序，與已知的的新型冠狀病毒高度同源；3.血清新型冠狀病毒特異性IgG抗規和IgM抗體陽性；血清新型冠狀病毒特異性IgG抗體由陰性轉為陽性或恢復期較急，|生期4倍以卜升高"L研究表明，冠狄州Si至少餉碼'種炫構夜白包拈勃夾安白spikeprotein.S坂白).小包B5精賞白(envekipeprotein.E白白>、

13、膜近線白(membranepTO-tein.Mifil3)以及核衣殼ifi臼N2HA).抗體檢測的將異性主耍與抗隙位點.的迭肝有關,N步白和S策在是COVID-19憐測的主要抗煉位點.利用體待異性堵合的晾理.W通過抗嗯檢測抗體的存在【5】，共果用的核洌方$去主妥有膠體金法和化學發光法.就止到6月4幾全球輸診韌例己超過六百萬例，對全球各國的政治，經濟等方力面面產生了尸或的影響.我國夜情控刮己經進入內反彈的階段.從武漢開始，各個城市開始道行大規模的人群播檢，本文詁含抗體校測詁果，對于大埋模人群券檢的使用方注進行討論.1資料與方法1.1標本來源收集2020年4月13日至2020年4JJ16日營口地區

14、接收的515例調查對象的515份血清標本。1.2試劑膠體金免疫層析法為新型冠狀病毒2019-nCoV抗體檢測試劑盒(英諾特生物技術有限公司)，磁微粒化學發光法為新型冠狀病毒(2019-nCoV)IgM抗體檢測試劑盒(奧博賽斯生物科技有限公司)及新型冠狀病毒(2019-nCoV)IgG抗體檢測試劑盒(奧博賽斯生物科技有限公司)。1 3統計學處理采用SPSS210統計軟件，計數資料用(%)表示，用軟小檢驗，計量資料用"礦表示，用，檢驗，P<0.05示差異有統計學意義，2結果2 1515例調查對象不同檢測方法抗體陽性結果(表1)515例調查對象均進行了核酸檢測，結果均為陰性，抗體檢測

15、結果分別為膠體金免疫層析法：IgG陽性2例，特異度9961%(2I515),IgM陽性5例，特異度9903%(5515),其中包括IgG及IgM均陽性1例，性特異度99.81%(1/515);磁微粒化學發光法：IgG陽性24例，特異度95.34%(241515),IgM陽性4例,特異度99.22%(4/515),無IgG及IgM均陽性對象，雙陽性特異度100%(0/515)0兩種方法均出現陽性結果的調查對象0例。表1515例調查對象不同檢測方法抗體陽性結果膠體金免疫層析法磁微粒化學發光法IgGIgM雙陽IgGIgM雙陽例數1412440特異度(%)99.619903998195.3499221

16、00'2磁微粒化學發光法檢測IgG抗體與IgM抗體陽性對象及結果(表2)其中IgG陽性的24例標本中,結果sl'co比值分布于1.001L500的標本12例(50%),分布于1.501、2.000的標本5例(20.83%),介于20014.000的標本4例(16.67%),大于4.001的標本3例(12.5%);IgM結果陽性的4例標本中,s/co比值分布于1.0011.500的標木0例(0%),介于1,5012.000的標本1例(25%),大于2.001的標本3例(75%).表2磁微粒化學發光法檢測IgG抗體與IgM抗體陽性對象及結果IgG標本編號37465789115sco

17、值1.4921.1765.3463.1551.1442.741標本編號148154163216261275sco值1.7811.5831.6931.3471.2281.303標本編號281332333356359373sco值1.9381.2641.1091.7143.7171.454標本編號379400419423494515sco值1.0531.2791.0314.3212.0773.316IgM標本編號74155190238sco值24.0771.8643.1563.8441調查對象凝血功能相關指標篩檢結果及例數(表3)本研充同時對調查結果的凝血功能進行了篩查，包括部分凝血活酶時間(aP

18、TT)，凝血酶原時間(PT),國際標準化比值(INR)及纖維蛋白原(Fbg),檢測采用sysmexCA-1500全自動血凝儀器進行檢驗,國內有報導證實了不同一起的測定結果具有較好的相關，性12.結果顯示.所有禎黃對皺;血功能均存在源戳傾向.表3調查對象凝血功能相關指標篩檢結果及例數aPTTPTEbgINR結果范圍n結果范圍n結果范圍n結果范圍n>37.00s0313.00s034.00g'L300>12002300-37.00s515900-13.00s5152.00-4.00gL2150.80-1.20215W23.00s0W9.00s0W2.00gL0WO803003討

19、論2種不同方法進行的抗體檢測，特異度均在95%以上，另有國內研究表明，對46例新型冠狀病毒肺炎確診病例進行抗體檢測，IgG及IgM均陰性患者為0例，由此可見，將血清抗體結果作為COVID-19感染診斷的重要輔助手段是切實可行的。但兩種方法均存在較多的假陽性結果，其原因可能由于目前批準的抗體（IgG及IgM）檢測試劑盒多為應急審批，未經過嚴格的特異性（與其他冠狀病毒的交叉反應）測試，也未經過臨床驗證;此外,類風濕因子、嗜異性抗體、補體以及外源性干擾等因素也可能造成試驗結果的假陽，性5J.另有大M研究表毗不同神冠狀向毒Nfits濱H存任免疫交板應.11冠狀病毒的N溯形賀1*1的免疫交又反應不僅弁在

20、亞磷內，也#在于不同亞劇何，WitCOVID19抗體檢溺可受It他沖類抵狀麻存的彩響.可能死有一定的停串性率6.蜂上所建，單一萬法杭體校Ml的段III性率較高，W能受檢Ml試制本身性質及其他亞種冠狀心毒抗修的影響.故將某一單一方法用于無徒狀人制的大艦模都檢.用機次眼方法的姑果作為N定株準，訶能造或較多的狀判,從而增加疾病篩查及管控的負擔。值得一提的是，膠體金免疫層析法檢測的IgG抗體，IgM抗體檢測及磁微粒化學發光法檢測的IgM抗體檢測結果的特異度均在99%以上，而磁微粒化學發光法檢測的IgG抗體陽性標本數遠高于其他項目，且由表2可見，其s/co比值小于1.5的標本占陽性結果的50,小于2.0

21、00的標本占70.83%o而同一標本采用膠體免疫層析法檢測IgG抗體結果提示陰性。針對這一結果，推測可能的原因1.調查對象確實存在IgG抗體陽性，但膠體金層析法提示其結果均為陰性，故考慮其中存在部分或大量假陽性標本，2.假陽性標本可能由于不同批號試劑本身及操作上的差別所致，由于本文中的標本均未用同種方法復測，故其結果暫不能斷言。3.對于磁微粒化學發光法結果判讀的標準，本文中陽性判讀標準為s/co比值大于1.000,但表2可見大部分IgG抗體陽性的標本，其sico比值均相對較小，sco比值大于2.()01的僅7例(29.17%),大于4.001的標本3例(12.5%)。如調整陽性判讀值為大于2.

22、001或4.001,則其特異度分別提升為98.64%及9961%。所以，本文建議可以通過調整判定標準，從而降低假陽性率，提高特異度。本文結果中的515例標本，分別均采用2種檢查方法，其中存在單一方法陽性的標本，但兩種方法陽性的標本之間無相互重疊。由此可見不同方法對于血清抗體的檢測，可以有效的排除假陽性標本。調查對象經呼吸道咽拭子核酸檢測確證均無COVID-19感染，也證實了這一設想。此外，血清抗體檢測相比呼吸道咽拭子抗體檢測，具有標本采集易標準化，操作簡便，節約時間，且檢測快速等優點。那么，可以將兩種不同方法聯合檢測血清抗體，作為人群COVID-19感染的篩查手段，從而有效控制人群大規模篩檢的成本。參考文獻WORLDHEALTHORGANIZATION.ClinicalmanagementofsevereacuterespiratoryinfectionwhenMiddleEastrespiratorysyndromecoronavirus(MERS-CoV)infectionissuspected:interimguidanceJ.2015.1 中華預防醫學會新型冠狀