1、HCV不同標志物檢測結果比較分析李華龍潤鄉楊蓉蔣蕊鞠董承紅易紅昆白慈珠謝忠平摘要目的分析丙型肝炎病毒抗原、抗體及核酸標志物實驗室檢測結果之間的關聯性。方法用丙型肝炎病毒抗體(HCV-Ab).丙型肝炎病毒核酸(HCV-RNA)擴增(PCR)熒光定斌、丙型肝炎病毒核心抗原(HCV-CAg)及丙型肝炎病毒抗原(HCV-Ag)檢測試劑食，分別檢測血清或血漿樣品中的HCV-Ab、HCV-RNA、HCV-CAg和HCV-Ag丙型肝炎病毒4種標志物，對檢測結果之間的關聯性進行分析。結果在1551份血清或血漿樣品中，共檢出HCV-Ab陽性樣品565份(36.43%)、HCV-Ag(游離抗原)陽性樣品48份(3

2、.09%)JiCV-RNA陽性樣品317份(20.44%)JICV-CAg陽性樣品25份(1.61%),HCV-Ab及HCV-RNA檢出率明顯高于抗原檢出率(P0.01),其陽性樣品檢出率按高低順序依次為HCV-Ab、HCV-RNAJiCV-Ag和HCV-CAg。結論4種標志物的檢測可以聯合運用，能有效降低HCV-Ab檢測帶來的漏檢風險。關鍵詞丙型肝炎病毒標志物HCV-AbHCV-RNAHCV-CAgHCV-AgComparativeStudyontheResultsDetectedbyDifTerentMarkersofHepatitisCVirus,liHua,longRunxiang,Y

3、angRang,etal.InstituteofMedicalBiology,PekingUnionMedicalCollege,ChineseAcademyofMedicalScience,Yunnan6501J8,ChinaAbstractObjectiveToanalyzetherelevanceofresultsdetectedbyHCV-CAg,HCV-Ab,HCV-RNAasmarkers.MethodsTheenzymeimmunoassaykitswereusedtomeasurethelevelofHCV-Ab,HCV-RNA,HCV-CAgandHCV-Aginserumo

4、rplasmasamples,andthecorrelationamongthemwasevaluatedbystatisticanalysis.ResultsThepositiveofHCV-Ab,HCV-RNA,HCV-CAgandHCV-Agwere565,317,48,25amongthe1551clinicalserumandplasmasamples,respectively.ThedetectionrateofHCV一AbandHCV-RNAwasobviouslyhigherthanHCV-CAg(PHCV-RNAHCV-CAgHCV-Ag.ConclusionTheunite

5、dapplicationofdifferentfourmarkerscanreducetheundetectedprobabilityefficiently.KeywordsHepatitisCvirus；Marker；HCV-Ab；HCV-RNA；HCV-CAg；HCV-Ag丙型病毒性肝炎是由丙型肝炎病毒（hepatitisCvirus,HCV）感染引起的重要的世界性傳染病之一，在中國人群的感染率達3.2%,其中50%-85%感染者發展為慢性丙型肝炎,10%-30%發展為肝硬化，肝硬化患者中約3%10%可演變為肝細胞癌。HCV初發感染往往比較隱匿，僅有約20%30%的感染者呈急性肝炎表現,所

6、以選擇快速、靈敏、特異的檢測方法檢出HCV十分重要1）。本研究應用HCV核心抗原試劑盒、HCV游離抗原試劑盒、丙型肝炎病毒（HCV）抗體檢測試劑盒（ELISA）及HCV核酸擴增（PCR）熒光定量檢測試劑盒，對1551份血清或血漿臨床樣品檢測內型肝炎病毒不同的標志物，現將結果報道如下。材料與方法1.材料：（】）血清或血漿標本來源：云南省第一人民醫基金項目：國家島技術發展計劃（863”項目）基金資助項目（2007AA02Z400）；云南省聯合資助項目計劃（2OO8GAOO8）作者簞位：650118昆明，中國醫學科學院北京協和醫學院醫學生物學研究所/云南省重大傳染病疫苗研究重點實驗室通訊作者：謝忠平

7、，電子信箱:XZP218院、昆明醫學院第一附屬人民醫院及云南省血液中心3個單位的血清或血漿樣品。（2）丙型肝炎病毒核酸擴增（PCR）熒光定量檢測試劑：深圳匹基生物工程有限公司生產，批號20080702o（3）丙型肝炎病毒核心抗原診斷試劑盒（酶聯免疫法）：國內某公司上市產品，批號20091101。（4）丙型肝炎病毒抗體檢測試劑盒（ELISA）：上?？迫A生物工程有限公司生產，批號200908011。（5）丙型肝炎病毒游離抗原檢測試劑盒（EL1SA）：中國醫學科學院醫學生物學研究所生產。2.方法：（1）丙型肝炎病毒核酸擴增（PCR）熒光定信檢測：采用丙型肝炎病毒核酸擴增（PCR）熒光定信檢測試劑，按

8、試劑盒說明書進行熒光定成檢測。（2）內型肝炎病毒核心抗原檢測：按試劑盒說明書進行ELISA檢測HCV-Ags（3）丙型肝炎病毒抗體檢測：按試劑盒說明書進行ELISA檢測HCV-Ab。（4）丙型肝炎病毒游離抗原檢測：包被HCV多表位復合抗原的多克隆抗體酶標板，先加入樣品緩沖液50凹1,待檢樣品50,371孵育2h,洗板5次后，加酶結合物100微升/孔，37T孵育lh。洗板5次后，加TMB顯色液,室溫顯色15min,于450nm波長檢測0D值。結果1.HCV不同標志物檢測結果分析：在1551份血清或血漿樣品中，共檢出HCV-Ab陽性樣品565份、HCV-Ag陽性樣品48份、HCV-RNA陽性樣品3

9、17份.HCV-CAg陽性25樣品。其中，HCV-Ab陽性樣品（陽性率36.43%）檢出率高于HCV-Ag陽性樣品（陽性率3.09%次2=543.422,P=0.000）、HCV-CAg陽性樣品（陽性率1.61%,*2=610.320,P=0.000）及HCV-RNA陽性樣品（陽性率20.445%,/=97.437,P=0.000）,2種試劑檢出率皆顯示差異有統計學意義;HCV-Ag陽性樣品檢出率（3.09%）高于HCV-CAg陽性樣品（1.61%）,2種試劑檢出率顯示差異有統計學意義（?=7.421,?=0.006）；HCV-RNA陽性樣品（20.44%）檢出率高于HCV-Ag陽性樣品（3.

10、09%）,2種試劑盒檢出率顯示差異有統計學意義（V=224.687,P=0.000）；HCV-RNA陽性樣品（20.44%）檢出率高于HCV-CAg陽性樣品（1.61%）,2種試劑檢出率顯示差異有統計學意義（X=280.203,P=0.000,表1）01HCV抗原檢測試劑盒臨床研究1551份樣品結果分析部分樣品多個指標均為陽性，所以各指標項下數據和大于所檢測樣品總數分析指標HCV-AbUCV-ArHCVCArHCV-RNA全陰性合計陽性陽性陽性陽性樣品數5654S253179841551百分率（%）36.433.091.6120.4463.442.HCV-Ab指標相關性檢測結果分析：在565份

11、HCV-Ab陽性樣品中，檢出48份HCV-Ag（游離抗原）陽性樣品，檢出率為8.50%；檢出23份HCV核心抗原（HCV-CAg）陽性樣品，檢出率為4.07%；檢出317份HCV-RNA陽性樣品，檢出率為56.11%。在984份全陰性樣品中，檢出2份HCV核心抗原（HCV-CAg）陽性樣品.檢出率為0.20%；但未檢出HCV抗原及HCV-RNA（表2）。以上結果說明：HCV-RNA、HCV-Ag及HCV-CAg在HCV-Ab陽性樣品中的檢出率明顯高于HCV-Ab陰性樣品,具有明顯的關聯性。衰2HCV抗原檢測試劑盒臨床研究不同性質樣品結果分析樣品特性HCV-Ag陽性HCV-CAg陽性HCV-RN

12、A陽性樣品數樣品數百分率（%）樣品數百分率（%）樣品數百分率（%）HCV-Ab陽性488.50234.0731756.11565HCV-Ab陰性0020.2000984合計483.09251.6131720.4415513.兩種HCV抗原檢測試劑檢測結果分析：在317份HCV-Ab及HCV-RNA雙陽性的樣品中，HCV抗原檢測試劑檢出34份HCV游離抗原陽性樣品（陽性率10.73%）,HCV核心抗原檢測試劑檢出23份HCV核心抗原陽性樣品（陽性率7.26%）,HCV抗原檢測試劑檢出率高于HCV核心抗原檢測試劑，但2種試劑檢出率顯示差異無統計學意義（*2=2.333,P=0.1267）O在248

13、份HCV-Ab陽性、但HCV-RNA陰性的樣品中，HCV抗原檢測試劑檢出14份HCV游離抗原陽性樣品（陽性率5.65%）,HCV核心抗原檢測試劑未檢出陽性樣品（陽性率0）,2種試劑檢出率有明顯差異（尸=14.407,P=0.0001）。在984份HCV-Ab及HCV-RNA雙陰性的樣品中，HCV抗原檢測試劑未檢出陽性樣品（陽性率0）,HCV核心抗原檢測試劑檢出2份HCV核心抗原陽性樣品（陽性率0.20%）,2種試劑檢出率無明顯差異（校正比？=0.501,2=0.479,表3）。表32種HCV抗原檢測試劑對不同樣品檢測結果分析檢測試劑HCV-Ab陽性HCV-Ab陽性HCV-Ab陰性土HCV-Ab

14、陽性HCV-RNAPHftHCV-RNA陰性HCV-RNA陰性（ns565）（r=317）（n=248）（n=986）陽性數百分率（%）陽性數百分率（%）陽性數百分率（%）陽性數白分率（%）HCV-Ag檢測HCV-CAg檢測3410.73145.65488.5000237.2600234.0720.20統計分析V=2.333,P=0.127x2=14.407,P=0.000x2=9.393=0.002校正x2=0.501,P=0.4794.HCV-Ab與HCV-RNA檢測結果關聯性分析:將本次所有樣品HCV-RNA（熒光定覺PCR）與HCV-Ab（ELISA）檢測結果進行分析，若以HCV-RN

15、A結果為金標準，則與用于HCV-Ab（ELISA）檢測結果一致性84.01%、靈敏度100.00%、特異度79.90%、陽性預測值56.11%、陰性預測值100.00%oHCV-Ab（ELISA）檢出率（36.43%）明顯高于核酸檢出率（20.44%）。二者之間差異經配對檢驗有顯著性（/=248.0,P=0.0000）；對兩種檢測結果進行關聯度分析，兩種檢測結果明顯相關，其=0.6696（/=6919,P=0.0000）。若以HCV-Ab結果為金標準，則與HCV-RNA（熒光定敏PCR）檢測結果一致性、靈敏度、特異度、陽性預測值及陰性預測值分別為84.01%、56.11%J00.00%J00.

16、00%及79.90%。此結果提示，由于檢測原理及檢測的病毒標志物不同，熒光定鼠PCR與ELISA法檢測結果之間存在一定的差異，并不能完全吻合而取代，也許更重要的是相互補充（表4）。表4HCV-Ab與HCV-RNA檢測結果分析HCV-Ab（批簽發產品）HCV-RNA（金標準）合計陽性陰性陽性317248565(36.43%)陰性0986986合計317(20.44%)12341551討論HCV感染的實驗室檢查是內型肝炎診斷的重要依據，所以檢測方法的選擇非常重要。HCV感染通常是持續性的終生感染，抗體檢測是一個非常有效的方法，但由于存在“窗口期”及“靜默感染”，此期檢測不到相應的抗體，所以仍然有輸

17、血后丙肝的發生6）。國外資料報道ELISA法檢測HCV核心抗原比檢測HCV抗體縮短窗口期平均58.2天，僅比RT-PCR檢測HCV-RNA多0.243.33天，而抗體出現則比檢測到HCV-RNA晚28140天。反轉錄多聚酶鏈反應（RT-PCR）是一個很敏感的方法。HCV-RNA可以在暴露后的12周被檢出。另外，在一些HCV感染后恢復期的人群中，抗HCV可能會逐漸降低到檢測限之下，或免疫功能低下的HCV感染者，抗HCV會持續陰性，這時，HCV-RNA的檢測是感染的唯一證據。故使用RT-PCR技術檢測HCV-RNA是判斷感染最有效的方法。但其技術復雜、條件要求較高，不易在多數實驗室推廣。HCV抗原

18、（HCV-Ag）包括核心抗原（HCV-CAg）、NS5、NS3及NS4等，是HCV感染者體內出現的早期感染標志，其消長趨勢與HCV-RNA有明顯的一致性，具有早期診斷的重要價值。HCV-Ag或HCV-CAg的檢測有助于評價HCV在細胞中的表達情況。ELISA法較PCR法簡便、快速，其方法簡單、影響因素少、重復性好。因此，在不具備RNA檢測條件的實驗室開展HCV-CAg檢測或HCV-Ag檢測是很好的篩查方法。本研究在1551份血清或血漿樣品中，共檢出HCV-Ab陽性樣品565份（陽性率為36.43%）、HCV-RNA陽性樣品317份（陽性率為20.445%）,2種試劑檢出率顯示差異有統計學意義（

19、x2=97.437,?=0.000）。HCV-RNA較HCV-Ab檢出率低，原因是由于本實驗采集的樣品部分為特殊樣品，且在HCV的3種標志物中，RNA不穩定，而核酸的穩定性較抗體差，導致在進行RT-PCR檢測時，樣品的檢出率降低t，0J，o在317份HCV-Ab和HCV-RNA雙陽性樣品及984份HCV-Ab.和HCV-RNA雙陰性樣品，HCV-Ag及HCV-CAg2種標志物檢測結果檢出率差異皆無統計學意義，由此說明HCV-Ag檢測與HCV-CAg檢測結果有高度的相關性。但在565份HCV-Ab陽性樣品中檢出48份HCV-Ag（檢出率為8.50%）,23份HCV-CAg（檢出率為4.07%）,

20、2種試劑檢出率有明顯差異（*2=9.393,P=0.0022）；在248份HCV-Ab陽性、但HCV-RNA陰性的樣品中，未檢測出HCV-CAg陽性樣品，而HCV抗原檢測試劑檢出14份，陽性率達5.65%,2種試劑檢出率有明顯差異（P=0.000）o可能是因為HCV-Ag檢測試劑所使用的抗體為HCV多表位復合抗原的多克隆抗體，除C表位外，尚有NS3、NS5等多個表位，相對于HCV核心抗原的單克隆而言，捕獲能力強、檢測靈敏度提高。綜合比較分析，HCV的抗原、抗體及核酸標志物之間是相互關聯的，任何單一標志物的檢測均存在漏檢風險，HCV-CAg試劑與HCV-Ag試劑可作為HCV-Ab檢測的補充試劑，

21、可聯合應用于臨床檢測及血源篩選，但其靈敏度有待提高m：。參考文獻1付涌水.丙型肝炎病毒感染的流行病學J.中國輸血雜志，2009,22（11）:873-875物朝國，陳川.丙型肝炎病毒感染的實驗室檢測及臨床應用J.國外醫學臨床生物化學與檢驗學分冊，2004,25（4）：379-3812 KrajdenM.ShivjiR,GunadatmK,etal.Evaluationofthecoreantigenassayasasecond-linesupplementaltestfordiagnosisofactivehepatitisCvirusinfectionJ.JClinMicrobiol,200

22、4,42（9）：4054-4059LegrerTJ,RiggertJ,SimsonG,elal.TestingofindividualblooddonationsforHCVRNAreducestheresidualriskoftransfusion-transmittedHCVinfectionJ.Trannfusion,2000,40(10):192-1973 WidellA,MoinegrenV,PieksmaF,al.DetectionofhepatitisCoreantigeninserumorplasmaasamarkerofhepatitisCviraemiaintheserol

23、ogicalwindow-phaseJ.TransfusionMed,2002,12(2)：107-113IcardiGtAnsaldiF.BruzwneBM,etal.NovelapproachtoreducethehepatitisCvirus(HCV)windowperiodclinicalevaluationofanewen-lyme-1inkedimmunosorbentassayforHCVcoreantigenJ.JClinMicrobiol,2001,39(9)：3110-31144 LapercheS,LeMarrecN,SimonN,etal.AnewHCVcoreanti

24、genassaybasedondisassociationofimmunecomplexes:analternativetomolecularbiologyinthediagnosisofearlyHCVinfectionJ.Trans-fusin.2003,43(7)：958-962BuschMP,KleinmanSH,JacksonB,etal.Nucleicacidamplifies*tiontestingofblooddonorsfortransfusion-tranmittedinfectiousdiseasesJ,Transfusion.2000,40(2)；143-1595 Al

25、terHJ,SeefTLB.Recovery,persistence,andsequelaeinhepatitisCvirusinfection:aperspectiveonlong-termoutcome:J.SeminLiverDis.2000,20(1)：17-3510龍洞鄉，李華，崔萍芳，等.丙型肝炎病毒3種標志物的檢定性J.中國生物制品學雜志,2009,22(5):468-469H劉長利，任芙若，呂秋霜，等.不同處理和保存條件下體外HCVRNA隱定性研究J.中國實驗血液學雜志,2006,14(6)：1238-124312劉杰平.張賀平.丙股病毒核心抗原與丙肝病毒抗體檢測的相關性J.海

26、南醫學,2008,19(10):152-153(收稿：2011-10-15)(修回：2011-10-20)足踝部腱鞘巨細胞瘤的臨床分型、分期與治療張宇栗向東王殊郭征李靖范宏斌劉軍朱偉軍摘要目的總結足踝部腱鞘巨細胞痛臨床特點與治療、預后之間的關系，建立一種能指導診斷、治療、預測預后的臨床分型、分期方法。方法回顧性分析1984-2009年期間21例足踝部酸鞘巨細胞痛住院患者的臨床資料及隨訪結果，據此對足踝部腱鞘巨細胞瘤進行臨床分型、分期。結果21例患者以男性居多，患者平均年齡為38.0歲，腫擒好發于右足(71.4%)以及滑膜關節周圍(81.0%),半數以上患者以無痛性腫物為主要癥狀(61.9%),

27、X線檢查對關節受腫瘤侵犯的檢出率低(66.7%),但MRI非常敏感(100%),病理檢查提示大部分腫瘤細胞增生活躍(52.4%)o根據腫瘤的生物學行為可將其分為兩型；A型位于足踝部腱鞘周圍；B型位于足踝部大關節周圍。其中B型又劃分為I期：局限于包膜內；II期：突破包膜局部浸潤；ID期：彌漫侵襲并進入關節腔。21例病例中A型4例，B型17例(I期6例，口期9例，皿期2例)。對A型和B型I期患者行邊緣切除,Bin期給予灶內切除和術后放療，DI期在擴大切除的基礎上輔以放療。對所有病例經過平均119.6個月的隨訪，僅I例B型皿期患者于術后9月復發并惡性變，其余患者功能恢復滿意。結論足踝部的!精巨細胞瘤包含生物學行為特點不同的兩種亞型，根據臨床資料對腫瘤進行分型、分期，可以很好地指導治療和改善預后。關鍵詞腱鞘巨細胞痛足踝臨床分型與分期手術治療輔助治療ClassificationandTreatmentofGiantCellTumorofTendonSheathiatheFootandAnkle.ZhangYu,LiXiangdong,WangZhen,Guozheng,IaJing,FanHongbin,LiuJun,ZhuWeijun.InstituteofOrthopedicSurgery,