1、    基膜蛋白在腺樣囊性癌中表達的免疫組化研究          摘要目的:研究基膜蛋白在涎腺腺樣囊性癌(ACC)中的表達特征,并探討其與ACC細胞分化程度及預后的關系。方法:選取經病理證實為ACC的101例病例,進行臨床病理資料分析及隨訪。然后選取其中30例進行基膜蛋白的免疫組織化學標記。結果:ACC實體型及含有該成分的混合型ACC患者預后較差,發生轉移或(和)復發的比例較高,且ACC局部復發比遠處轉移更為多見。ACC基膜的存在部位及陽性表達程度與其類型有關,陽

2、性程度以篩狀型表達最高,管狀型次之,實體型最差。此外,篩狀型ACC中,有轉移或(和)復發的病例陽性表達低。4種基膜蛋白中,纖維粘連蛋白在各類型ACC中的表達均較差。結論:基膜蛋白的陽性表達程度與ACC的惡性程度呈負相關。基膜蛋白可作為評估患者預后的依據之一。在參與組成基膜的物質中,基膜粘連蛋白可能是腫瘤實質細胞與基膜膠原粘附的主要物質。關鍵詞基膜基膜蛋白腺樣囊性癌預后免疫組織化學Immunohistochemical Study of Basement Membrane Proteins Expression in Adenoid Cystic Carcinoma of Salivary Gl

3、andsTian Zhen, Wang Ying, Zhang WeiguoDepartment of Oral Pathology, School of Stomatology, Shanghai Second Medical UniversityAbstractObjective: To investigate the expression of the basement membrane proteins in adenoid cystic carcinoma (ACC) of the salivary glands and discuss the relationship betwee

4、n the expression of the proteins and the differentiation as well the prognosis of ACC. Methods: 101 patients which were confirmed pathologically were collected and made a follow-up, and 30 cases of them were selected to detect the basement membrane proteins (type collagen, fibronectin, laminin and h

5、eparan sulfate proteoglycan) by the means of immunohistochemistry. Results: The cribriform pattern of ACC had a more favorable prognosis than the solid pattern which had a lower rates of metastasis of/and recurrence. The positive locations and the degrees of the four proteins varied with the histolo

6、gical patterns of ACC. The cribriform pattern had the strongest positive expression and the solid pattern the weakest. In addition, the staining of fibronectin were weaker in all three patterns of ACC. Conclusion: The degree of the positive expression of the four proteins has a negative relation to

7、the differentiation of the tumor cells. The lower degree of differentiation the tumor cells are, the weaker positive signals they express. Of the four substances in the basement membrane, laminin is the main material which adhere the parenchymal cell to the collagen in basement membrane of the tumor

8、. Basement membrane proteins could be regarded as one of the basis to evaluate the prognosis of ACC.Key words:basement membranebasement membrane proteinadenoid cystic carcinoma基膜(basement membrane,BM)是上皮基底面與深部結締組織間的薄層細胞間質結構。主要由型膠原(type collagen, C)、特異性的蛋白多糖如硫酸肝素蛋白多糖(heparan sulfate proteoglycan,HSPG

9、)和粘連糖蛋白如纖維粘連蛋白(fibronectin,FN)、基膜粘連蛋白(laminin,LN)等物質所組成1。基膜是上皮細胞依附和生長的重要基礎,也是上皮細胞分化和結構維持的必要物質。在腫瘤組織中,分化較好的腫瘤細胞可以產生并形成其實質細胞周圍的BM,這種腫瘤細胞所形成的BM與該腫瘤的局部浸潤和遠處轉移有著十分密切的關系1,2,而腫瘤的局部浸潤和轉移正是影響腫瘤患者預后的重要因素之一。本文用免疫組織化學方法,研究基膜蛋白在發生于涎腺組織的腫瘤腺樣囊性癌(adenoid cystic carcinoma,ACC)中的表達特征,并探討其與ACC細胞的分化程度及患者預后的可能關系。1材料和方法標

10、本來自于上海第九人民醫院口腔病理科19891995年病理診斷為ACC的病例,共101例。按WHO(1991年)的涎腺腫瘤分類標準,將ACC分成三種基本類型:篩狀型、管狀型和實體型。上述兩種或兩種以上類型同時出現在同一病例者為混合型。按以上標準復片重新分類并進行臨床隨訪。101例中篩狀型38例,管狀型13例,實體型7例,混合型43例。同時,按腫瘤的不同類型及有否轉移或(和)復發為標準選取30例病例,其中篩狀型13例(有轉移或(和)復發的5例,無瘤生存大于2年的8例),管狀型10例,實體型7例,采用LSAB法進行基膜蛋白(C,FN,HSPG,LN)的免疫組織化學標記。以正常腺體組織作對照。2結果2

11、.1臨床病理分類和隨訪101例ACC分類及臨床隨訪結果見表1。在隨訪的病例中,ACC篩狀型、管狀型、實體型和混合型病例中分別有9例、5例、4例和16例有轉移或(和)復發,分別占有隨訪資料病例數的45%、71.4%、100%和51.6%;同時,ACC混合型中含有實體型成分的有6例,全部發生轉移或(和)復發,占有隨訪資料病例數的100%。表明ACC實體型及含有該成分的混合型ACC發生復發或(和)轉移的比例較高,患者的預后較差。此外,在發生轉移或(和)復發的34例病例中,局部復發和遠處轉移的病例數分別為19例和12例,分別占所有有轉移或(和)復發病例總數的55.9%和35.3%,兩者之間有顯著性差異

12、(P<0.01)。表明ACC患者發生局部復發比遠處轉移更為常見。表1101例ACC分類及隨訪結果(例)類型n復發轉移復發伴轉移無瘤生存>2年失隨訪篩狀型388011118管狀型1313126實體型740003混合型436911512(含實體成分)(7)(1)(5)(0)(0)(1)總計101191232.2免疫組織化學 正常腺體的4種基膜蛋白陽性表達均為腺泡外周有深棕色陽性物質環繞。ACC基膜的存在部位與ACC的基本類型有著十分密切的關系。ACC篩狀型的BM位于篩孔內層和細胞團塊外周。管狀型的BM位于小腺管和小條索結構外周。實體型的BM位于上皮細胞團塊外周,在上皮細胞團內有細顆粒樣

13、的基膜蛋白陽性物質。同時,基膜蛋白的表達程度隨著ACC的不同類型而表現不同。30例各型ACC基膜蛋白(C,FN,LN和HSPG)的免疫組織化學標記的陽性表達程度結果見表2。表230例各型ACC基膜蛋白的免疫組織化學標記結果(例)類型nHSPGFNLNC總計+±+±+±+±+(%)±(%)篩狀型無轉移、復發87108627120(62.5)12(37.5)有轉移或(和)復發53214323210(50.0)10(50.0)合計131031129410330(57.7)22(42.3)管狀型1073010192810(25.0)30(75.0)實體

14、型7070707070(0.0)28(100.0)注:+ 表示基膜蛋白的陽性表達率50%± 表示基膜蛋白的陽性表達率<50%或完全不表達 表2結果顯示:ACC篩狀型、管狀型和實體型基膜蛋白的陽性表達率大于或等于50%的病例分別占各型進行免疫組織化學標記病例總數的57.7%、25%和0%。三者之間有顯著性差異(P<0.01)。這表明:ACC的不同基本類型其基膜蛋白的陽性表達程度以篩狀型最高,管狀型次之,實體型最差;同時,ACC篩狀型中(由于ACC管狀型和實體型缺乏足夠的臨床隨訪資料,因此筆者只對ACC篩狀型作討論)有轉移或(和)復發的病例和預后較好的病例(無瘤生存大于2年)

15、基膜蛋白的陽性表達率大于或等于50%的病例分別占進行標記的篩狀型病例總數的50%和62.5%,兩者之間有顯著性差異(P<0.01)。表明:在篩狀型ACC中,伴轉移或(和)復發的病例其基膜蛋白的陽性表達率比預后較好的病例低。此外,在13例ACC篩狀型病例中,HSPG、LN和C的陽性表達率大于或等于50%的分別有10例、9例和10例,而FN則只有1例;在10例ACC管狀型病例中,三者的陽性表達率大于或等于50%的分別有7例、1例和2例,FN的表達率則均在50%以下或完全不表達。表明:4種基膜蛋白在ACC篩狀型和管狀型同一病例中的表達也存在著差異,但盡管如此,無論在上述何種類型ACC,FN的表

16、達均較差。3討論ACC的臨床病理分型與腫瘤的預后有著一定的關系。Conley等4觀察406例ACC病例的臨床資料,發現ACC的預后實體型要差于其它類型;首次術后510年內局部復發的病例占所有有轉移或(和)復發的病例的74%。作者所觀察的101例發生于涎腺組織的ACC病例的臨床病理資料分析結果也表明:ACC實體型及含有實體型成分的混合型的惡性程度較高;臨床上,腫瘤的局部復發比遠處轉移更為多見。與Conley等4的觀察結果基本一致。在影響腫瘤患者預后的眾多因素中,腫瘤細胞的分化程度是較為重要的因素之一。Perzin指出:實體型ACC預后差與該類型腫瘤細胞分化程度差有一定的關系4;Caselitz等

17、5在研究24例ACC后發現實體型ACC的腫瘤細胞較其它類型的腫瘤細胞有更明顯的異型性,核分裂象多見,有變性和壞死。Kannan等6和Harada等7在研究口腔粘膜上皮性腫瘤的基膜蛋白的表達中發現,細胞分化較好的病損,C和LN的陽性表達率要明顯比分化差的病損高,并指出:基膜蛋白的表達程度與腫瘤細胞的分化程度密切相關。由此作者推測認為,不同類型的ACC對于基膜蛋白的表達程度不同是因其實質細胞的分化程度不同而異。本研究結果顯示:基膜蛋白的表達程度以篩狀型最高,管狀型次之,實體型最差。這表明:ACC實體型的腫瘤實質細胞分化程度比篩狀型、管狀型差。在正常組織中,大多數組織的實質細胞可以分泌蛋白并形成BM

18、,將實質和間質分隔開來;在腫瘤組織中,分化較好的腫瘤細胞周圍的BM可由腫瘤實質細胞產生。很多研究3,5表明:ACC的篩孔內和玻璃樣變間質是由腫瘤實質細胞中的肌上皮細胞分泌形成的;Cheng等8用免疫熒光等方法證明ACC的BM是由腫瘤實質細胞分泌形成的,并指出:ACC中的實質細胞總是試與BM相接觸,并向BM豐富區域,如神經浸潤3。由此作者認為:實質細胞分化程度較好的篩狀型ACC,其分泌和合成較多的基膜蛋白,一旦BM在腫瘤細胞外周形成之后,細胞向周圍BM豐富區域浸潤的能力會有所減弱;而實體型ACC的腫瘤實質細胞分化程度較差,分泌形成的BM較少,其細胞周圍缺乏BM的包圍,因此,向周圍BM豐富區域,如

19、神經等組織的浸潤性增強,由此賦于實體型ACC具有較強的局部浸潤性。這也可能是其惡性程度較高更深一層的原因之一。生物化學的研究表明:至少有5種物質參與BM的組成,它們是C、HSPG、LN、FN和entactin。C分子彼此交錯相連,構成BM的支架;HSPG屬蛋白多糖,是組成BM的重要物質,它與跨BM的物質轉運密切有關;LN和FN屬粘連糖蛋白,LN是BM中的主要粘連糖蛋白,可在細胞和C之間起著介導上皮細胞和C相粘連的作用;而FN在新生的BM中短暫地存在,在成熟的BM中則消失,它的作用是介導基膜成分在上皮細胞與BM間的沉積1,9。作者的免疫組織化學研究結果顯示:FN在ACC篩狀型和管狀型的表達均較差

20、。這可能與上述原因有關。因此作者認為,在ACC中,LN是腫瘤實質細胞與BM膠原粘附的主要物質。此外,免疫組織化學結果還顯示:在篩狀型ACC中,伴轉移或(和)復發的病例其基膜蛋白的陽性表達程度比預后較好的病例低。由此可見,即使在篩狀型ACC中,各病例腫瘤實質細胞的分化程度也存在著差異,患者的預后也因此會有所不同。因此,臨床上單從ACC的類型來判定ACC患者的預后是不夠的。本研究表明:基膜蛋白的表達程度與腫瘤細胞的分化程度密切有關。因此,若能夠對ACC患者進行基膜蛋白的陽性表達率的檢測,將會更有利于對ACC患者的預后進行客觀評估。本研究系衛生部基金資助項目(編號 96-2-293)作者單位:上海第

21、二醫科大學口腔醫學院口腔病理學教研室200011參考文獻1李玉瑞主編.細胞外間質的生物化學及研究方法.北京:人民衛生出版社,1988:671022Liotta LA. Tumor invasion and metastasis: role of the extracellular matrix. Cancer Res, 1986,46(1):183Cheng J, Saku T, Okabe H, et al. Basement membranes in adenoid cystic carcinoma: an immunohistochemical study. Cancer, 1992,69(11):263126404Conley J, Casler JD. Adenoid Cystic Carcinoma of the Head and Neck. Saint Louis: Mosby CV Company, 1988:195Caselitz J, Schulze I, Seifert G. Adenoid cystic carcinoma of the salivary glands: an immunohistochemical study. J Oral Pathol, 1986, 15(6):3083186Kannan S,