1、精選文檔纖維素降解菌的分別和篩選1.試驗目的：1.把握纖維素降解菌的的分別和篩選的方法 2.學會會培育基的制備 3.再次了解菌落的形態2.試驗原理： 從美術樓后面樹林中取適量的土壤，用無菌水將得到的樣品經適當稀釋, 在28下培育1d，稀釋10-6、10-7、10-8 三個濃度，分別接種于鑒別培育基中培育, 每組3個平行，在37下培育2-3 d，然后進行初篩，重復以上步驟，直至獲得純的菌株。最終鏡檢。3.試驗方法：1. 取樣先從樹林中取10g土壤(1015cm深)。用滅菌的塑料袋盛裝。 2饑餓培育 秤取10g土壤，置于250ml的裝有90ml無菌水的錐形瓶中，搖勻，在37下培育1d。3.梯度稀釋

2、所需儀器：試管（8支）、洗耳球、移液管。需要先經高壓蒸氣滅菌的儀器：試管（每只內裝9ml蒸餾水）、移液管。用移液管從饑餓培育土壤液中吸取1ml土壤懸液加入盛有9ml無菌水的試管中充分混勻。然后用移液管從今試管中吸取1ml加入另一盛有9ml無菌水的試管中，混合均勻，以此類推制成10-1,10-2,10-3, 10-1,10-2,10-310-4,10-5,10-6,10-7,10-8不同稀釋度的土壤溶液。4.選擇培育剛果紅培育基的制備所需要的儀器有：500ml錐形瓶、天平、藥匙、玻璃棒、電爐、搖床、稱量紙等。(NH4)2SO4 2gMgSO4 0.25gKH2PO4 1g明礬 2g纖維素鈉 1.

3、88g剛果紅 2g瓊脂 18g蒸餾水 1000ml 按上表比例配制150ml選擇培育基。在500ml錐形瓶中裝入150ml培育基，用2層紗布加棉花做成瓶塞，將瓶口塞緊，再在瓶塞外包裹兩層報紙，用線繩扎緊，在121下高壓蒸汽滅菌20min。滅菌后，倒9個滅菌平板，凝固后待用。涂布平板將上述已倒培育基的9個平板底面分別用記號筆寫上10-6、10-7、10-8 3種稀釋度（每個稀釋度劃3個平板）。然后用移液管分別由10-6、10-7,10-8三管土壤稀釋液中各吸取0.2ml對號放入已寫好稀釋度的平板中，用無菌涂布器在培育基表面輕輕地涂布均勻，室溫下靜置510min，使菌液吸附進培育基。38倒置培育2

4、-3d，至菌落長出，產生纖維素酶的菌落四周將會消滅透亮圈。菌落形態觀看劃線分別PDA培育基的制備方法馬鈴薯 200g纖維素（cmc）若干克瓊脂 15-20g蒸餾水 1000ml馬鈴薯去皮，切成塊煮沸半小時，然后紗布過濾，再加瓊脂，溶化后不足水至1000ml。121滅菌30min.按以上比例配置50ml培育基，分別倒入3個滅菌的平板當中，待凝固后，從以上涂布的9個平板當中取出1個菌落四周的透亮圈比較大的平板。用接種環挑取菌落在平板培育基上進行梯度劃線。連續做3個平行，置于38下培育。重復以上步驟,進行連續3次純化培育。直至獲得純的菌株。斜面培育選取透亮圈大且降解力量強的菌株以待劃線時使用。如上面制備PDA培育基，將其倒入1支滅菌試管里，每管約倒入1/3的培育基，傾斜置放，30min之后，帶其凝固，用接菌環挑去少量菌落劃線培育，做3個平行。置于38下，培育2-3d。直至長出菌落。5.鏡檢所需儀器或試劑：菌種的平板培育物、番紅、顯微鏡、酒精燈、載玻片、接種針、雙層瓶（內裝香柏油和二甲苯）、擦鏡紙、蒸餾水等