1、廣東輕工職業(yè)技術(shù)學(xué)院畢 業(yè) 論 文題 目： 西洋菜中葉綠素提取工藝研究 系 別： 食品與生物工程系 專 業(yè)： 食品營(yíng)養(yǎng)與檢驗(yàn) 班 級(jí)： 食檢081 姓 名： 指導(dǎo)教師： 魏強(qiáng)華 完成時(shí)間： 2011年4月3日 目 錄目錄3摘要4第一章 前言.51.1 概述.51.2 研究意義和研究?jī)?nèi)容.6第二章 西洋菜中葉綠素提取的預(yù)備試驗(yàn).72.1 確定取樣量及稀釋度.72.1.1 試驗(yàn)材料、儀器、試劑和方法.72.1.2 結(jié)果與分析.72.2 提取溶劑的選擇.82.3 西洋菜中不同部位葉綠素含量測(cè)定.102.4 在不同預(yù)處理中葉綠素含量的變化.11第三章 西洋菜中葉綠素提取的單因素試驗(yàn)133.1 試驗(yàn)材料

2、、試劑和儀器.133.2試驗(yàn)方法133.3試驗(yàn)結(jié)果與分析13 3.3.1 最佳提取時(shí)間的選擇13 3.3.2 最佳提取溫度的確定14 3.3.3 提取次數(shù)的確定.153.3.4 最佳料液比的確定163.3.5 不同干燥時(shí)間對(duì)葉綠素含量的影響173.4 結(jié)論.18第四章 西洋菜中葉綠素提取的正交試驗(yàn)194.1 試驗(yàn)材料、試劑和儀器.194.2 試驗(yàn)方法.194.3 試驗(yàn)結(jié)果與分析.19第五章 超聲波輔助提取葉綠素工藝研究225.1 超聲波處理時(shí)間的確實(shí).22 5.1.1 試驗(yàn)材料、試劑和儀器22 5.1.2 試驗(yàn)步驟22 5.1.3 結(jié)果與分析225.2 超聲前后葉綠素的差異.23第六章 總結(jié)2

3、5參考文獻(xiàn).26致謝.27摘要本研究針西洋菜進(jìn)行葉綠素提取的試驗(yàn)，采用乙醇提取法提取葉綠素，通過單因素試驗(yàn)和正交試驗(yàn)，獲得最佳的提取次數(shù)、提取時(shí)間、料液比等。經(jīng)研究得出西洋菜中葉綠素提取最優(yōu)工藝為：提取次數(shù)為3次、每次提取時(shí)間為40min、提取的料液比為1:5。最后做了超聲波輔助提取試驗(yàn)，結(jié)果是它不能提高葉綠素的提取率。（之前是30min，現(xiàn)在40min到底多少呢？）關(guān)鍵詞：西洋菜；葉綠素；單因素試驗(yàn)；正交試驗(yàn)；超聲波。第一章 前言1.1 概述葉綠素（Chlorophyll）是高等植物進(jìn)行光合作用的重要物質(zhì)，結(jié)構(gòu)為一個(gè)鎂和四個(gè)吡咯環(huán)上的氮結(jié)合以卟啉為骨架的綠色色素的總稱。早在1818年，Ber

4、zelius 就開始了對(duì)葉綠素的研究。1933 年美國(guó)以有機(jī)溶劑法為基礎(chǔ)，開始工業(yè)生產(chǎn)葉綠素，此方法延用至今。目前，葉綠素及其各種衍生物的定性定量分析已經(jīng)應(yīng)用于各個(gè)領(lǐng)域，植物學(xué)中用來研究葉綠素的種類和結(jié)構(gòu)進(jìn)行植物分類，海洋學(xué)中用來分析海洋中浮游植物的細(xì)胞豐度從而對(duì)海洋赤潮的發(fā)生規(guī)律進(jìn)行監(jiān)測(cè)，園藝學(xué)中用來研究各種瓜果的成熟機(jī)理以及保存方法，農(nóng)學(xué)中用來研究光合作用機(jī)理，食品行業(yè)中用來分析葉綠素衍生物添加劑的含量以及食品的色澤。綠色食品近年來受到了人們廣泛關(guān)注，而存在于綠色植物中的一種獨(dú)特而重要的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)葉綠素，它的一些生理功能也開始備受重視。葉綠素的結(jié)構(gòu)和血紅素極相似，易于被人體吸收，有賦活細(xì)胞的

5、作用，在醫(yī)藥、食品和日化工業(yè)中有廣泛用途，由于葉綠素為天然品，無(wú)毒副作用，長(zhǎng)期食用安全、可靠，因此，F(xiàn)AO/WHO對(duì)葉綠素每人日允許攝入量未作規(guī)定。目前，葉綠素已廣泛應(yīng)用于口香糖、硬糖、果汁、瓊脂、糕點(diǎn)等食品（但不能用于酸性或含鈣食品，否則，易產(chǎn)生沉淀），日本已將其作為綠色色素用在食品添加劑中。醫(yī)藥工業(yè)上葉綠素具有改善便秘、降低膽固醇、抗衰老、排毒消炎、脫臭、抗癌抗突變、抗貧血、保肝等功能，對(duì)皮膚組織有再生作用，可用于治療燙傷，慢性潰瘍，能抑制葡萄球菌和鏈球菌生長(zhǎng)，對(duì)齒齦炎、口臭、中耳炎等有一定療效。另外，葉綠素可以防治感冒，感冒患者可將葉綠素溶液內(nèi)服涂口唇或含漱，每日數(shù)次，1-2d 后癥狀可

6、減輕。以葉綠素為原料研制治療缺鐵性貧血的葉綠素鐵鈉鹽，提高白血球水平的葉綠素鈷鈉鹽，增強(qiáng)智力和記憶力的葉綠素鋅鈉鹽具有重要價(jià)值，由葉綠素制得的葉綠素銅鈉鹽更是生產(chǎn)治療肝炎、胃病及十二脂腸潰瘍藥物的重要原料。葉綠素銅鈉鹽還是“肝寶”膠囊劑、“胃肝綠”片、“升血寶”、“胃康U”等藥物的重要有效成分。日化工業(yè)中用作制造香皂、香水、護(hù)膚霜、香波及牙膏等產(chǎn)品。因此，葉綠素的市場(chǎng)前景非常廣闊，而降低生產(chǎn)成本、簡(jiǎn)化提取工藝、加強(qiáng)對(duì)葉綠素活性的一系列研究將對(duì)果蔬產(chǎn)業(yè)化應(yīng)用、食品科學(xué)、醫(yī)藥保健等領(lǐng)域產(chǎn)生深遠(yuǎn)影響。1.2研究意義和研究?jī)?nèi)容本研究對(duì)西洋菜中葉綠素提取進(jìn)行研究，采用乙醇提取法提取葉綠素，通過單因素試驗(yàn)

7、、正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)進(jìn)行工藝優(yōu)化，獲得最佳提取工藝條件，以期為應(yīng)用提供基礎(chǔ)。第二章 西洋菜中葉綠素提取的預(yù)備試驗(yàn)2.1 確定取樣量及稀釋度2.1.1 試驗(yàn)材料、儀器、試劑和方法（1） 材料新鮮的西洋菜（廣州市海珠區(qū)中道輕工中道菜市場(chǎng)）。（2） 儀器和試劑S22pc型可見分光光度計(jì)、電子天平、研缽、容量瓶、小漏斗、玻璃棒、移液管、剪刀、定量濾紙、吸水紙、擦鏡紙。無(wú)水乙醇，分析純。（3） 試驗(yàn)方法西洋菜用自來水沖洗干凈，分別收集莖和葉，用水沖洗， 晾干，按葉子25%，莖75%稱取一定量的樣品于燒杯中，粉碎。稱樣，加溶劑提取，靜置，過濾，定容，稀釋，測(cè)定，記錄數(shù)據(jù)，計(jì)算結(jié)果。 結(jié)果與分析（1）試驗(yàn)1：稱取

8、100g樣品，用剪刀剪碎之后放到研缽中研磨，然后分別稱10g到2個(gè)燒杯中用無(wú)水乙醇進(jìn)行提取至樣品呈白色（提取液基本無(wú)色），收集濾液，定容至100mL，用可見分光光度計(jì)分別測(cè)定波長(zhǎng)645nm和663nm處的吸光度。表1 試驗(yàn)1樣品的葉綠素含量表樣品編號(hào)12樣品質(zhì)量10.0210.03A6451.6751.678A6634.1764.180葉綠素總含量（mg/g）1.68561.6863（2）試驗(yàn)2：由試驗(yàn)1的吸光度值算出其稀釋倍數(shù)為5倍，才能控制吸光度基本在0.20.8的范圍內(nèi)。移取試驗(yàn)1的樣品處理液20mL至100mL的容量瓶中，用無(wú)水乙醇定容，搖勻后，用可見分光光度計(jì)分別測(cè)定波長(zhǎng)645nm和

9、663nm處的吸光度是否在0.20.8的范圍內(nèi)，然后確定取樣量。表2 試驗(yàn)1樣品稀釋5倍的吸光度值樣品編號(hào)1-12-1A6450.3350.337A6630.8350.858由表2可見，經(jīng)過稀釋5倍之后，樣液的吸光度值大概在0.20.8的范圍內(nèi)，所以為了節(jié)省溶劑，節(jié)省提取時(shí)間以及提取成本。我們確定了取樣量為1g經(jīng)過提取收集濾液后定容至50mL。但這樣還是可能偏高（在波長(zhǎng)663nm處的吸光度大于0.8），所以我們決定把取樣量定為0.8g樣品經(jīng)處理，提取之后，定容至50mL。但由于取樣量太少，可能存在取樣不均勻的情況，所以我們確定了把取樣量放大5倍，然后再把樣液稀釋5倍，以盡量減少取樣不均的現(xiàn)象。

10、即取4g樣品，用溶劑提取之后定容至50mL，搖勻后，再?gòu)闹形?mL樣液至10mL容量瓶定容。2.2 提取溶劑的選擇根據(jù)前人對(duì)葉綠素提取的經(jīng)驗(yàn)表明，用丙酮、乙醇、乙酸乙酯、石油醚等有機(jī)溶劑作為提取劑，葉綠素提取效果較好。本試驗(yàn)對(duì)相關(guān)影響因素進(jìn)行研究。表3 不同溶劑對(duì)葉綠素提取的影響溶劑乙酸乙酯無(wú)水乙醇石油醚丙酮樣品質(zhì)量（g）4.054.034.024.04A6450.1760.2590.0280.295A6630.4000.7020.0700.682葉綠素含量（mg/g）0.43880.67610.07030.7097圖1 溶劑與葉綠素含量之間的關(guān)系由表3和圖1可以看出，丙酮的提取率是最大的；

11、但是由于丙酮對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)的抑制、麻醉作用，屬于輕微中樞神經(jīng)抑制劑。丙酮在有氧及無(wú)氧狀態(tài)下均會(huì)迅速生物分解，但丙酮高濃度下對(duì)微生物有毒。高濃度接觸對(duì)個(gè)別人可能出現(xiàn)肝、腎和胰腺的損害。正是因?yàn)楸奈：π耘c丙酮的價(jià)錢都比乙醇相對(duì)要高，所以從比較安全的角度和經(jīng)濟(jì)實(shí)惠的角度上來說，要使用在大規(guī)模的生產(chǎn)中和應(yīng)用在食品加工中，乙醇都是屬于比較安全合適的溶劑。通過上述試驗(yàn)，確定了取樣量、稀釋倍數(shù)以及所用的提取溶劑。具體是操作步驟如下：1、 清洗：將市場(chǎng)上買回來的新鮮西洋菜，用自來水沖洗掉表面的泥沙后（盡量保持菜身的完整），放在吸水紙上，以吸去菜身表面吸附的多余水分，分別收集莖和葉。2、 研磨：將西洋菜（按

12、莖：葉=3:1）用剪刀剪碎放到研缽中，小心研磨至變成泥狀3、 稱樣：用0.01感量的電子天平，稱取4g樣品于小燒杯中4、 提取：加810mL無(wú)水乙醇（以能沒過樣品為準(zhǔn)）于樣品中，用玻璃棒攪拌均勻后放到暗處?kù)o置510min，取出后過濾到50mL容量瓶中，多次浸提、過濾至樣品組織呈白色（或浸泡液基本無(wú)色）；用無(wú)水乙醇定容，搖勻。5、 稀釋：移取2mL的樣品提取液至10mL容量瓶中，用無(wú)水乙醇定容，搖勻，靜置，盡快用可見光分光光度計(jì)測(cè)定。6、 測(cè)定：將樣品稀釋液用1cm比色皿分別在波長(zhǎng)645nm和663nm處測(cè)吸光度，記錄讀數(shù)。7、 分析數(shù)據(jù)，計(jì)算葉綠素含量葉綠素總含量（mg/g）=式中 A645樣

13、品稀釋液在波長(zhǎng)645nm時(shí)的吸光度； A663樣品稀釋液在波長(zhǎng)663nm時(shí)的吸光度； n 稀釋倍數(shù)； V 樣品溶液體積，mL； m 樣品質(zhì)量，g.2.3 西洋菜中不同部位葉綠素含量測(cè)定 （1） 試驗(yàn)儀器與試劑S22pc型可見分光光度計(jì)、電子天平、 研缽、容量瓶、小漏斗、玻璃棒、移液管、剪刀、 定量濾紙、吸水紙、擦鏡紙、無(wú)水乙醇。（2） 試驗(yàn)步驟 將西洋菜洗凈擦干，莖葉分離，整體按莖：葉=3:1的比例取樣，葉稱取0.8g，莖和整體都稱取4g，用剪刀剪碎放到研缽中，小心研磨至變成泥狀。加8mL無(wú)水乙醇提取，放入暗處10min，取出過濾到50mL容量瓶中。重復(fù)提取，至樣品組織變白。用無(wú)水乙醇定容到5

14、0mL。移取2mL樣液到10mL容量瓶中，用無(wú)水乙醇定容。將樣品稀釋液用1cm比色皿分別在波長(zhǎng)645nm和663nm處測(cè)吸光度，記錄讀數(shù)。表4 西洋菜中不同部位的葉綠素含量表莖葉整體樣品質(zhì)量（g）4.000.84.00A6450.0510.6070.220A6630.1051.5380.547葉綠素含量（mg/g）0.11747.71300.5539圖2 西洋菜中不同部位的葉綠素含量由表4和圖2可知，只取西洋菜的莖做試驗(yàn)時(shí)，葉綠素含量太低，取樣量較大，只取葉做試驗(yàn)時(shí)，葉綠素含量太高，取樣量較少，兩者都不適合做試驗(yàn)，當(dāng)取整體（即莖：葉=3:1）時(shí)，最適合做試驗(yàn)。2.4 在不同預(yù)處理中葉綠素含量的

15、變化 （1） 試驗(yàn)儀器與試劑S22pc型可見分光光度計(jì)、電爐、電子天平、 研缽、容量瓶、小漏斗、玻璃棒、移液管、剪刀、 定量濾紙、吸水紙、擦鏡紙、無(wú)水乙醇、碳酸鈣。（2） 試驗(yàn)步驟預(yù)處理：稱4份未研磨的西洋菜各4g。一份空白對(duì)照，直接研磨；一份用人水燙2min后研磨；一份用堿水燙2min后研磨；一份加堿研磨。加8mL無(wú)水乙醇提取，放入暗處10min，取出過濾到50mL容量瓶中。重復(fù)提取，至樣品組織變白。用無(wú)水乙醇定容到50mL。移取2mL樣液到10mL容量瓶中，用無(wú)水乙醇定容。將樣品稀釋液用1cm比色皿分別在波長(zhǎng)645nm和663nm處測(cè)吸光度，記錄讀數(shù)。表5不同預(yù)處理與葉綠素含量的關(guān)系表處理

16、方法空白樣品熱湯2min加堿熱湯2min加CaCO3研磨樣品質(zhì)量（g）4.084.084.094.05A6450.2200.2510.1810.233A6630.5470.6430.4670.597葉綠素含量（mg/g）0.53710.63500.45860.5821圖3 不同預(yù)處理中葉綠素含量的變化由表5和圖3可知，經(jīng)過熱燙2min處理后的樣品所提取的葉綠素含量是最高的，其次是加CaCO3研磨、空白樣品，最低是加堿熱燙2min的。所以在生產(chǎn)和加工工藝中，可以先把樣品熱燙一下，這樣提取葉綠素的效果會(huì)更好。第三章 西洋菜中葉綠素提取的單因素試驗(yàn)3.1試驗(yàn)材料、試劑和儀器新鮮的西洋菜（廣州市海珠區(qū)

17、中道輕工中道菜市場(chǎng)）；無(wú)水乙醇；可見分光光度計(jì)S22pc、電子天平、 研缽、容量瓶、小漏斗、玻璃棒、移液管、剪刀、定量濾紙、吸水紙、擦鏡紙。3.2 試驗(yàn)方法將西洋菜洗凈擦干，莖葉分離，按莖：葉=3:1的比例取樣，稱40g樣品，用剪刀剪碎放到研缽中，小心研磨至變成泥狀，待用。按各種不同方法處理樣品，過濾到50mL容量瓶中，用無(wú)水乙醇定容到50mL。移取5mL樣液到25mL容量瓶中，用無(wú)水乙醇定容。將樣品稀釋液用1cm比色皿分別在波長(zhǎng)645nm和663nm處測(cè)吸光度，記錄讀數(shù)。3.3試驗(yàn)結(jié)果與分析3.3.1 最佳提取時(shí)間的選擇稱取7份待用樣品于小燒杯中，每份的質(zhì)量為4g。各加30mL無(wú)水乙醇一次提

18、取，放入暗處，時(shí)間分別是0 min、5 min、10 min、20 min、30 min、45 min、60min。過濾，稀釋，上機(jī)檢測(cè)，記錄數(shù)據(jù)。表6提取時(shí)間與葉綠素含量的關(guān)系表提取時(shí)間（min）051020304560樣品質(zhì)量（g）4.054.064.054.004.004.084.02A6450.700.1770.1770.2050.2160.1920.180A6630.1770.4620.4720.5370.5730.4800.472葉綠素含量（mg/g）0.17550.44990.45590.52980.56110.47390.4737圖4 提取時(shí)間與葉綠素含量的關(guān)系由表6和圖4可知

19、，隨著提取時(shí)間的增加，葉綠素含量呈上升趨勢(shì)，在30min處達(dá)到最高點(diǎn)，然后呈下降趨勢(shì)，所以最佳的提取時(shí)間是30min。3.3.2 最佳提取溫度的確定稱取5份待用樣品于小燒杯中，每份的質(zhì)量為4g。各加30mL無(wú)水乙醇一次提取，提30min。溫度分別是室溫、30、40、50、60。過濾，稀釋，上機(jī)檢測(cè)，記錄數(shù)據(jù)。表7在不同溫度下葉綠素含量的變化表提取溫度（）室溫30405060樣品質(zhì)量（g）4.044.054.024.084.01A6450.2100.1940.1620.1590.162A6630.4660.4670.3990.3720.394葉綠素含量（mg/g）0.49550.47470.40

20、390.38090.4024圖5 提取溫度與葉綠素含量的關(guān)系由表7和圖5可知，在室溫環(huán)境下，所提取的葉綠素含量是最高的，隨著溫度升高，葉綠素含量愈來愈低，50時(shí)達(dá)到最低點(diǎn)，雖然60時(shí)有上升趨勢(shì)，但溫度越高，耗能越大，而且會(huì)破壞西洋菜中的葉綠素，因此，最佳的提取溫度是室溫。3.3.3 提取次數(shù)的確定稱取4g待用樣品于小燒杯中。每次加16mL無(wú)水乙醇提取，提取三次，每次提30min。三次的濾液分別過濾到3個(gè)50mL容量瓶中，用無(wú)水乙醇定容到50mL。稀釋，上機(jī)檢測(cè)，記錄數(shù)據(jù)。表8 提取次數(shù)與葉綠素含量的關(guān)系表提取次數(shù)（次）123樣品質(zhì)量（g）兩個(gè)平行樣的質(zhì)量都是4.04gA6450.5360.54

21、30.2110.2720.0600.0660.5400.2420.063A6451.0041.0020.5240.7060.1550.1811.0030.6150.168葉綠素含量（mg/g）0.23540.12200.0325圖6 提取次數(shù)與葉綠素含量的關(guān)系三次提取完后，西洋菜的組織已經(jīng)變白，那么該樣品中的葉綠素已完全或基本完全被提取出來，由表8和圖6可知，（0.2354+0.1220）/（0.2354+0.1220+0.0325）×100=91.7。即第一次和第二次提取出來的葉綠素占三次所提取的葉綠素總含量的91.7，所以，提取次數(shù)就確定為2次。3.3.4 最佳料液比的確定稱取4

22、份樣品于小燒杯中，每份的質(zhì)量為4g。分別按照西洋菜：溶劑=1:2、1:3、1:4、1:5，在室溫下提取兩次，每次30min。過濾，稀釋，上機(jī)檢測(cè)，記錄數(shù)據(jù)。表9 料液比與葉綠素含量的關(guān)系料液比1 : 21 : 31 : 41 : 5樣品質(zhì)量（g）4.014.014.024.00A6450.1470.1250.1550.142A6630.3770.3310.4120.384葉綠素含量（mg/g）0.37490.32400.40160.3730圖7 料液比與葉綠素含量的關(guān)系由表9和圖7可知，當(dāng)料液比為1:2時(shí)，所提取的葉綠素含量是0.3749，1:3時(shí)是0.3240，1:4時(shí)是0.4016，1:5

23、時(shí)是0.3730，由此可見，當(dāng)料液比為1:4時(shí)，所提取的葉綠素含量最高，所以最佳的料液比是1:4。3.3.5 不同干燥時(shí)間對(duì)葉綠素提取的影響將西洋菜洗凈擦干，莖葉分離，按莖：葉=3:1的比例取樣。稱取5份沒經(jīng)研磨的樣品于小燒杯中，每份的質(zhì)量為4g，放入60恒溫烘箱里，分別烘0 h、1 h 、3 h 、5 h 、7 h。取出，在室溫下提取兩次，每次30min。過濾，稀釋，上機(jī)檢測(cè)，記錄數(shù)據(jù)。表10 不同干燥時(shí)間與葉綠素含量的關(guān)系干燥時(shí)間（h）01357樣品質(zhì)量（g）4.014.064.034.074.03A6450.2750.2100.2110.2040.203A6630.6780.5390.5

24、420.5380.540葉綠素含量（mg/g）0.68770.52920.53590.51990.5248圖8 干燥時(shí)間與葉綠素含量的關(guān)系由表10和圖8可知，干燥時(shí)間為0min的樣品測(cè)出的葉綠素含量最高，（0.68770.5359）/0.5359=0.28，比5h的多了28，比1h、3h、7h的就多更多了，所以沒經(jīng)過干燥的樣品最適合用于提取葉綠素。3.4 結(jié)論由以上單因素試驗(yàn)結(jié)果可知，各因素最佳的水平分別是：提取時(shí)間為30min，提取溫度為室溫，提取次數(shù)為2次，料液比為1:4，干燥時(shí)間為0min。第四章 西洋菜中葉綠素提取的正交試驗(yàn)4.1 試驗(yàn)材料、試劑和儀器新鮮的西洋菜（廣州市海珠區(qū)中道輕工

25、中道菜市場(chǎng)）；無(wú)水乙醇；可見分光光度計(jì)S22pc、電子天平、 研缽、容量瓶、小漏斗、玻璃棒、移液管、剪刀、定量濾紙、吸水紙、擦鏡紙。4.2 試驗(yàn)方法將西洋菜洗凈擦干，莖葉分離，按莖：葉=3:1的比例取樣，稱40g樣品，用剪刀剪碎放到研缽中，小心研磨至變成泥狀，待用。稱9份待用樣品，各4g。按正交表的因素水平的要求處理樣品，過濾到50mL容量瓶中，用無(wú)水乙醇定容到50mL。（第7號(hào)試驗(yàn)用100mL容量瓶）移取5mL樣液到25mL容量瓶中，用無(wú)水乙醇定容。將樣品稀釋液用1cm比色皿分別在波長(zhǎng)645nm和663nm處測(cè)吸光度，記錄讀數(shù)。4.3 試驗(yàn)結(jié)果與分析（1） 制定試驗(yàn)的因數(shù)水平表表11葉綠素提

26、取的因數(shù)水平表水 平因 數(shù)提取次數(shù)A（次）提取時(shí)間B（min）料液比C11201 : 322301 : 433401 : 5（2） 西洋菜中葉綠素提取的正交試驗(yàn)表表12 西洋菜中葉綠素提取正交試驗(yàn)結(jié)果L(33)試驗(yàn)編號(hào)提取次數(shù)A（次）提取時(shí)間B（min）料液比C葉綠素含量（mg/g）11110.334621220.362531330.387342120.496552230.508862310.501873130.572383210.511393320.5505K11.08441.40341.3477總和4.2256K21.50711.38261.4095K31.63411.43961.4684

27、K10.36150.46780.4493平均值之和1.4086K20.50240.46090.4698K30.54470.47990.4895R0.18320.01900.0197優(yōu)化水平A3B3C3根據(jù)葉綠素含量，結(jié)果見表12，對(duì)葉綠素含量結(jié)果進(jìn)行極差分析，由極差（R）可知，影響因素的主次為：提取次數(shù)料液比提取時(shí)間。對(duì)表12的結(jié)果進(jìn)行分析，得到最優(yōu)組合為：A3 B3 C3 ，即提取次數(shù)3次、提取時(shí)間40min、料液比1:5。（你組中有同學(xué)做的是30min，？）（3） 畫出因素與指標(biāo)間的關(guān)系示意圖圖9 提取次數(shù)、提取時(shí)間、料液比與葉綠素含量的關(guān)系示意圖（4） 最優(yōu)配方驗(yàn)證試驗(yàn)表13 最優(yōu)配方驗(yàn)

28、證試驗(yàn)平行樣12樣品質(zhì)量（g）4.044.04A6450.2430.223A6630.6430.598葉綠素含量（mg/g）0.62500.5775葉綠素平均含量（mg/g）0.6013第五章 超聲波輔助提取葉綠素工藝研究5.1 超聲波處理時(shí)間的確實(shí)5.1.1 試驗(yàn)材料、試劑和儀器新鮮的西洋菜（廣州市海珠區(qū)中道輕工中道菜市場(chǎng)）；無(wú)水乙醇；可見分光光度計(jì)S22pc、超聲波清洗機(jī)HS6150、紫外可見分光光度計(jì)UV-2450、電子天平、 研缽、容量瓶、小漏斗、玻璃棒、移液管、剪刀、 定量濾紙、吸水紙、擦鏡紙。5.1.2 試驗(yàn)步驟將西洋菜洗凈擦干，莖葉分離，按莖：葉=3:1的比例取樣，稱40g樣品，

29、用剪刀剪碎放到研缽中，小心研磨至變成泥狀。稱取4份樣品于小燒杯中，每份的質(zhì)量為4g。各加20mL無(wú)水乙醇，放入超聲波清洗機(jī)里超聲，超聲時(shí)間分別為0 min 、5 min 、10 min、 20 min，取出放置40min，過濾到100mL容量瓶中，再進(jìn)行第二次和第三次提取，分別加20mL，最后用無(wú)水乙醇定容到100mL。移取5mL樣液到25mL容量瓶中，用無(wú)水乙醇定容。將樣品稀釋液用1cm比色皿分別在波長(zhǎng)645nm和663nm處測(cè)吸光度，記錄讀數(shù)。5.1.3 結(jié)果與分析表14 超聲波輔助提取葉綠素的研究超聲時(shí)間（min）051020樣品質(zhì)量（g）4.034.014.024.03A6450.24

30、00.1900.2010.214A6630.6050.4910.5160.541葉綠素含量（mg/g）0.60380.48650.51160.5392圖10 超聲波輔助提取時(shí)間與葉綠素含量的關(guān)系由表14和圖10可知，沒經(jīng)過超聲處理的樣品葉綠素含量是0.6038，經(jīng)過超聲處理的葉綠素含量分別為0.4865、0.5116和0.5392，很明顯，沒經(jīng)過超聲處理的葉綠素提取率更高，可能超聲后葉綠素部分被破壞了，含量減少了，所以超聲對(duì)葉綠素提取無(wú)效果。5.2 超聲前后葉綠素的差異用紫外分光光度計(jì)掃描上述4個(gè)樣品，它們的綜合譜圖見圖11。圖11 葉綠素綜合譜圖在圖11中，最高的峰是葉綠素a的峰，紅色的線代

31、表超聲處理時(shí)間為0min的樣品，淺藍(lán)色的線代表超聲處理時(shí)間為5min的樣品，淺紫色的線代表超聲處理時(shí)間為10min的樣品，淺綠色的線代表超聲處理時(shí)間為20min的樣品。它們的出峰位置都一樣，沒有偏移，所以超聲前后葉綠素本質(zhì)沒有差異，只是葉綠素的含量不一樣而已。第六章 總結(jié)經(jīng)過十多天的努力，終于完成了整個(gè)畢業(yè)論文涉及的所有試驗(yàn)。本次試驗(yàn)研究的是西洋菜中葉綠素的提取工藝。我們做了預(yù)備試驗(yàn)，確定了一個(gè)提取葉綠素的方案。西洋菜經(jīng)過熱水漂燙2min預(yù)處理后，提取葉綠素的效果會(huì)更佳，我們本次用于提取葉綠素的溶劑是無(wú)水乙醇，為什么選擇它呢，從試驗(yàn)中可以看出，丙酮的提取效果比無(wú)水乙醇好，但是，它有一定的危害性

32、，正是因?yàn)楸奈：π耘c丙酮的價(jià)錢都比乙醇相對(duì)要高，因此，從比較安全的角度和經(jīng)濟(jì)實(shí)惠的角度上來說，乙醇都是屬于比較安全合適的溶劑。然后做單因素試驗(yàn)，確定了各因素的最佳水平，提取時(shí)間為30min，提取溫度為室溫，提取次數(shù)為2次，料液比為1:4，干燥時(shí)間為0min。接著選擇提取時(shí)間、次數(shù)和料液比作因素水平表。最后做正交試驗(yàn)，得出的最優(yōu)配方是提取次數(shù)為3次，提取時(shí)間為40min，提取的料液比為1:5。做干燥時(shí)間的研究時(shí)，我們發(fā)現(xiàn)，沒經(jīng)過干燥的樣品，所提取出來的葉綠素含量比經(jīng)過干燥的都高。干燥時(shí)間達(dá)到5小時(shí)的樣品，研磨后已成粉末狀，毫無(wú)水分，非常干燥，以后有機(jī)會(huì)可以進(jìn)行干燥后處理的研究。西洋菜中葉綠素提取的最優(yōu)工藝條件確定后，我們還做了超聲波輔助提取葉綠素工藝研究。結(jié)果是沒經(jīng)超聲的樣品提取出來的葉綠素比經(jīng)過超聲的含量都高，用紫外分光光度計(jì)掃描這兩種樣品發(fā)現(xiàn)，沒有進(jìn)行超聲輔助的樣品比進(jìn)行了超聲