1、 哈爾濱商業(yè)大學中藥鑒定學大實驗（論文） 市售中藥紅花質(zhì)量評價研究 學 生 姓 名 * * * * 指 導 教 師 * * * 專 業(yè) 制藥工程 學 院 藥學院 成績：2012年 3 月 20日摘 要目的：評價市售三種紅花（分別為人民同泰藥店、紅旗藥店、海暉藥店出售）的質(zhì)量及其總黃酮含量的測定方法：1.性狀鑒別評價市售紅花的質(zhì)量2.顯微鑒別評價市售紅花的質(zhì)量3.紫外-可見分光光度法測定市售紅花中總黃酮的含量結(jié)果：1. 通過性狀鑒別、顯微組織、雜質(zhì)的檢驗，觀察到了三種紅花的性狀和組織特征。在清水中浸泡一段時間后都為水染金黃不退色，且三種紅花都有少量顆粒狀雜質(zhì)；2. 在顯微鑒別中，出現(xiàn)了明顯的組織

2、特征（花粉粒，花柱碎片，花瓣頂端細胞和分泌管碎片），還有少量的黑色雜質(zhì)；通過色，味，質(zhì)的經(jīng)驗鑒別，紅花質(zhì)量良好；3.通過紫外分光度法測定三種紅花的總黃酮含量分別是：人民同泰為0.62%，紅旗為1.4%，海暉為0.98%。結(jié)論：上述方法操作簡便、可行, 可供評價市售紅花的質(zhì)量以及總黃酮含量的測定。關(guān)鍵詞：市售紅花；總黃酮含量；紫外分光光度法。1 緒 論1.1論文主要內(nèi)容評價三種市售紅花的質(zhì)量及其總黃酮含量的測定1.2論文研究目的和意義紅花是臨床中常用的一種中藥材，由于其價格較高，市場上不法分子不顧藥材的質(zhì)量，不擇手段，造假作假。醫(yī)療機構(gòu)及中藥生產(chǎn)企業(yè)應給予注意。目前，常見的摻偽手法主要有以下四種

3、: 一是以添加細沙、滑石粉來增加其重量。二是用其他花染色后摻入紅花中。三是用一部分陳貨( 顏色暗、黑) 摻入好的紅花中，以次充好。四是摻糖( 藥材市場習稱搓糖) 。黃酮類化合物是紅花中最主要的化學成分之一。本文建立采用分光光度法測定紅花中總黃酮的含量，精密度、穩(wěn)定性良好，結(jié)果可信，為紅花中總黃酮的含量測定提供了一種簡便可行的方法，為紅花的質(zhì)量控制提供了評價手段。1.3 紅花概述 紅花是菊科草本植物，為不帶子房的管狀花，長12cm，表面紅黃色或紅色；花冠筒細長，先端5裂，裂片狹條形，長58mm；雄蕊5，花藥聚合成筒狀，黃白色。柱頭長圓柱形，頂端微分叉。質(zhì)柔軟。氣微香，味微苦。含有紅花甙、紅花醌甙

4、、紅花多糖、棕櫚酸、肉桂酸和豐富的維生素E等多種化學成分，具有活血、止痛、降血脂、降血清膽固醇、防止動脈硬化等功效，臨床上廣泛用于治療冠心病等心腦血管疾病。.1.3.1 紅花的化學成分黃酮類化合物：包括紅花黃色素（SY），羥基紅花黃色素A（HSYA）等脂肪酸：紅花中含有棕櫚酸、肉豆蔻酸、月桂酸等不飽和脂肪酸.紅花多糖：該成分是由葡萄糖、木糖、阿拉伯糖、和中乳糖以B鍵連接的一種多醣體。 紅花的藥理作用 抗炎作用：SY對甲醛性大鼠足腫脹、對組胺引起的大鼠皮膚毛細血管通透量增加及大鼠棉球肉芽腫形成，均有明顯的抑制作用。1.3.2.2 鎮(zhèn)痛和鎮(zhèn)靜作用：SY對小鼠有較強而持久的鎮(zhèn)痛效用，對銳痛（熱刺痛）

5、及鈍痛（化學性刺痛）均有效。 耐缺氧作用：SY有顯著的耐缺氧、抗疲勞作用，能明顯延長動物的存活時間，并增加離體家兔心臟和心肌缺氧的冠脈流量，改善心臟的缺氧、缺血病理狀態(tài)。 紅花的臨床應用1.3.3.1 降低血壓、血脂：紅花煎劑對狗、貓均有較持久的降低血壓的作用。口服紅花油可治療高膽固醇血癥、高甘油三酯血癥及高非脂化脂肪酸血癥。1.3.3.2 興奮子宮：紅花煎劑對小白鼠、豚鼠、家兔、狗、貓、之離體和在體子宮均有顯著的興奮作用。2 儀器與藥品2.1 實驗儀器LIV-2120c型紫外可見分光光度計 尤尼柯儀器總公司N1000旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 EYELA上海愛朗儀器有限公司電熱恒溫鼓風干燥箱 上海一恒科技有

6、限公司BS110S型電子分析天平 北京塞多利斯天平有限公司2.2 實驗試劑與藥品蘆丁對照品（中國生物制品鑒定所）1號紅花（購自人民同泰藥店）；2號紅花（購自紅旗藥店）；3號紅花（購自海暉藥店）。無水乙醇（分析純）、石油醚（分析純）、氫氧化鈉、亞硝酸鈉、硝酸鋁甲醇，蒸餾水。3 方法與結(jié)果3.1 性狀鑒別評價市售紅花的質(zhì)量正品紅花性狀：不帶子房的管狀花，黃紅色或紅色，花冠筒細長，先端5裂，花藥聚合成筒狀，黃白色；柱頭長圓柱形，露出于花藥筒外，頂端微分叉。質(zhì)輕，柔軟。氣微香，味微苦；手感柔軟；質(zhì)地柔然，口嘗微苦；顏色鮮艷，將花浸水中，水染成金黃色而花不退色。偽品或摻偽紅花性狀：表面橙黃色、深紅色或鮮

7、紅色，黃色不明顯，大部分表面粘附有細小的紅色顆粒狀物質(zhì),多數(shù)粘結(jié)成團,疏松性差，手握無彈性,質(zhì)較重,濕潤感明顯,有異樣氣味(溴氣味)。用開水一沖即渾濁，放置后有白色沉淀析出用手拍打后手上會留有一部分沙粒；摻糖紅花成團塊，口嘗先天后苦；顏色發(fā)紅或較暗淡，用水泡后，水變成紅色。另外，把紅花放入水杯中，加入熱水，輕輕攪拌，放置一會兒。把上半部分倒掉，這時水杯底如有雜物，系摻偽或含雜質(zhì)。如用其他花染色者，上面顏色會洗掉，露出原形。實驗中性狀鑒別的紅花結(jié)果：疏松性較好，手握有較好的彈性，質(zhì)輕，無明顯濕潤感，用開水沖后無明顯渾濁現(xiàn)象，但有極少許泥沙顆粒。3.2 顯微鑒別評價市售紅花的質(zhì)量正品紅花的顯微特征

8、（1）花粉粒 類球形或長球形，具3個萌發(fā)孔，外壁有刺齒及疣狀雕紋。（2）花柱碎片 表皮細胞分化成單細胞毛，呈圓錐形，先端尖。（3）花瓣頂端細胞 表面觀呈長方形或長條形，頂端表皮細胞呈短絨毛狀。（4）分泌管碎片 呈長管道狀，胞腔內(nèi)充滿黃棕色至紅棕色分泌物。 偽品紅花的顯微特征 粉末呈淡橙黃色。淀粉粒眾多,均為單粒,偶見復粒;呈類圓形、不規(guī)則形或扁圓形。不規(guī)則的結(jié)晶體眾多,大小不等,有的呈不規(guī)則的塊狀,邊緣不整齊,多層重疊,有立體感；或呈不規(guī)則的顆粒狀物;或呈多梭形,近三角形。可見紅色或鮮紅色的塊狀物。實驗中的顯微測定結(jié)果花粉粒花柱碎片花瓣頂端細胞分泌管碎片3.3紫外-可見分光光度法測定市售紅花中

9、總黃酮的含量3.1 對照品溶液和供試品溶液的制備 對照品溶液的制備精密稱取蘆丁對照品5.00mg，置50ml容量瓶中，用60%乙醇溶液溶解定容，配成濃度為0.1mg/ml的對照品溶液。 供試品溶液的制備將三種樣品粉碎40目。在100ml圓底燒瓶中加入經(jīng)稱量的1. 00 g的紅花粉末，并標號1（紅旗），2（人民同泰），3（海暉）。加入60%的乙醇溶液至刻度線一下，放入超聲儀器中30min，取出，用60%的乙醇定容。3.2 線性關(guān)系考察 將蘆丁對照品溶液分別移取1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 ml，置10 ml比色管中，用60%的乙醇補充至5ml，加入5%的亞硝酸鈉0.3 ml，搖勻，放置

10、6min，加入10%硝酸鋁溶液0.3ml，搖勻，放置6 min后再加入4%的氫氧化鈉溶液4ml，搖勻，用60%的乙醇至刻度，搖勻，放置12 min后，在510nm下測定。將5組實驗數(shù)據(jù)填入下列表格：蘆丁標準數(shù)據(jù)試管12345吸光度A0.1100.2350.3550.4790.596C(mg/ml)0.010.020.030.040.05以吸光度為縱坐標(Y)、蘆丁對照品溶液的濃度(mg/ml)為橫坐標(X)，得其回歸方程:Y=12.16X-0.0098(R2=0.9999).蘆丁品在0.01-0.05mg/ml范圍內(nèi)線性良好。3.3 精密度試驗 用移液管移取試樣溶液2ml于比色管中，加60%乙

11、醇稀釋至5ml，加入5%NaNO2 0.3ml，搖勻，靜置6min，再加10%Al(NO3)3 0.3ml，搖勻，靜置6min，再加4%NaOH 4ml，再加0.4ml30%乙醇，搖勻，靜置12min。于510nm波長下測定吸光度值，重復測定6次，計算其相對標準偏差。測量結(jié)果如下表。精密度檢驗序號123456試樣0.221 0.225 0.223 0.224 0.223 0.221結(jié)果RSD=0.719%,本實驗精密度良好。3.4 重復性試驗稱取紅花粉末1g于容量瓶中，按“供試品溶液制備”方法重新制備試樣，取2ml紅花（紅旗）提取液，加60%乙醇稀釋至5ml，加入5% NaNO2 0.3ml，

12、搖勻，靜置6min，再加10% Al( NO3)3 0.3ml，搖勻，靜置6min，再加4%NaOH 4ml，再加0.4ml 30%乙醇，搖勻，靜置12min。在510nm波長處測定吸光度值。重復實驗六次，數(shù)據(jù)如下：重復性檢驗序號123456吸光度A0.2310.2670.2780.2700.3350.297結(jié)果RSD為2.4%，表明實驗重復性一般好。3.5 穩(wěn)定性考察用移液管移取紅花提取液1 ml于比色管中，按“供試品溶液制備”方法制備，顯色后，每隔10min測定1次吸光度值，測定6次。穩(wěn)定性檢驗時間（min）0102030405060吸光度A0.1530.1520.1520.1510.15

13、00.1490.149其結(jié)果RSD=0.10%，表明試樣在一小時內(nèi)穩(wěn)定。3.6 加樣回收率實驗精密量取海暉藥店紅花粉末（總黃酮含量為2.26%）6份，分別加入一定量的蘆丁對照品，按“供試品溶液制備”方法處理，測定，計算回收率。結(jié)果加樣回收率為（97.99±1.76）%，RSD為1.11 %(n=6)，表明該含量測定結(jié)果準確。回收率試驗結(jié)果序號123456RSD（%）稱取樣品量（g）0.100.120.110.120.100.101.11供試品中含有量（mg）2.603.122.863.122.602.60對照品加入量（mg）2.53.02.83.12.62.5測定總黃酮的量（mg）5

14、.0780 6.0069 5.6194 6.1484 5.1345 5.0730 回收率（%） 99.1296.2398.5597.6997.4898.923. 7 樣品測定 每份紅花樣品溶液平行取樣3份，每份2ml，按“供試品溶液制備”方法制備，每樣品平行測定3次,在510nm波長處測定吸光度值，根據(jù)標準曲線計算總黃酮含量。紅花中總黃酮含量測定的結(jié)果樣品吸光度A1吸光度A2吸光度A3平均值總黃酮含量（mg/g）總黃酮總量（%）紅旗0.3350.337.0.3330.33514.181.40人民同泰0.1760.1270.1230.1426.240.62海暉0.2210.2090.2270.2199.410.944 討論通過實驗數(shù)據(jù)知道紅旗藥店所售紅花總黃酮含量最高，人民同泰藥店所售含量最低，但含量均超過50%