1、、分子生物學研究的內容a) 生物大分子的化學結構、大小、形狀和三維結構，以及大分子之間的相互作用。b) 生物大分子結構與功能的關系，以及生物學現象的分子生物學過程。c) 生物大分子在細胞成分中的組織結構方式，活細胞在合成大分子時的物理化學過程。d) 生物信息傳遞和代謝調節的分子生物學過程、生物化學與分子生物學的關系與區別分子生物學從分子水平研究生命現象，生物化學從分子水平研究生命化學現象，二者互相滲透。分子生物學主要研究核酸、蛋白質和其他大分子的結構和功能，以及其相互作用，著重遺傳信息傳遞和代謝調節問題。生物化學代謝過程。分子生物學采用物理學、生物化學和遺傳學相結合的方法，生物化學采用生物化學

2、和化學的研究方法三、分子生物學研究方法X 射線衍射法核磁共振技術基因表達譜研究技術DNA 芯片技術蛋白質譜研究技術蛋白質鑒定的數據庫搜索法第二章 遺傳信息的傳遞1 .中心法則的基本內容2核酸的化學組成3 DNA 的二級結構4 DNA 的超螺旋結構5 維持 DNA 雙螺旋的力1 氫鍵GC 之間有三條氫鍵，AT 之間有兩條氫鍵，這是 DNA 雙螺旋結構的重要特征之一，DNA 的許多物理性質如變性、復性以及Tm 值等都與此有關。2 .堿基堆集力： DNA 同一條鏈相鄰堿基之間的非特異性作用力，包括疏水作用力和范德華力。氫鍵與堿基堆集力的協同作用已經堆基的堿基更容易發生氫鍵的鍵合，相應地已經被氫鍵定向

3、的堿基更容易堆集。兩種作用力相互協同，形成一種非常穩定的結構。如果一種作用力被消除，另一種作用力也大為減弱。3 .不穩定因素磷酸基團間的靜電斥力帶負電荷的磷酸基的靜電斥力，所以DNA 需要保存在含Na+ 生理鹽條件。堿基分子內能物體的內能是物體內全部分子的分子動能與分子勢能之和。溫度升高，堿基分子內能增加時，堿基的定向排列遭受破壞，消弱了堿基的氫鍵結合力和堿基的堆集力，會使DNA 的雙螺旋結構受到破壞三變性（denaturation概念：在某些理化因素作用下，DNA 分子互補堿基對之間的氫鍵斷裂，DNA 雙螺旋結構松散，變成單鏈的過程。1 .常用的變性方法熱變性應用廣泛，特別是用于變性動力學研

4、究缺點：高溫引起磷酸二酯鍵的斷裂，得到長短不一的單鏈堿變性pH11.3 時，全部氫鍵被淘汰無熱變性的缺點，為制備單鏈DNA 的首選方法2 .核酸變性程度的鑒定紫外測定法：原理：嘌呤堿、嘧啶堿存在共軛雙鍵，堿基、核苷、核苷酸、核酸在240-290nm 處有強烈的紫外吸收，最大吸收峰在260nm 處紫外光吸收值：1 雙鏈DNA A260=1.002 單鏈DNA A260=1.373 自由堿基A260=1.603 .熔解曲線與Tm 值緩慢而均勻地增加DNA 溶液的溫度（現可做到0.1 分）可根據各點的 A260值繪制成DNA 的熔解曲線熔鏈溫度Tm ：OD 增加值的中點溫度（一般為 85-95）或

5、DNA 雙螺旋結構失去一半時的溫度4 .影響DNA Tm 值大小的因素G-C 含量：Tm 值計算公式：Tm= 69.3+0.41 （G+C）%GC%= （Tm-69.3 ） X 2.44介質中的離子強度：DNA 保存在高濃度的緩沖液中，如1mol/LNaCl 中。5 .DNA 復性 （renaturation）變性 DNA 在適當條件下，分開的兩條單鏈分子按照堿基互補原則重新恢復天然的雙螺旋構象的現象，又稱為退火（ annealingDNA 的復性的條件有兩個：（ 1）有足夠的鹽濃度以消除磷酸基的靜電斥力；（ 2）有足夠高的溫度以破壞無規則的鏈內氫鍵，但又不能太高，一般使用比Tm 值低20 2

6、5 。復性的機制一般認為需要10 20 個堿基對，特別是富含GC 的節段首先形成一個（或幾個）雙螺旋核心，這一步叫成核作用。然后兩條單鏈的其余部分就會迅速形成雙螺旋結構6 .復性的影響因子：溫度和時間： 低于 Tm 值 25左右（60-65）DNA 濃度 ：DNA 片段的大?。篋NA 順序的復雜性；反應溶液中的離子強度四 DNA 的超螺旋結構（三級結構絕大多數原核生物及病毒的完整DNA 分子都是共價封閉環（covalently closed circle,CCC） 分子。這種雙螺旋環狀分子再度螺旋化成為超螺旋.真核生物線狀DNA 與蛋白質結合以環狀的形成存在。超螺旋結構是DNA 三級結構的主要

7、形式。超螺旋是有方向的，有正超螺旋和負超螺旋兩種。DNA 生物合成1 .DNA 復制方式：半保留復制子代 DNA 分子雙鏈的一條鏈總是來源于親代DNA ，采用半保留方式復制，原核生物及真核生物都采用該方式。DNA 復制屬性復制原點、復制子、復制叉、復制速度。2 .DNA 復制酶學基礎底物 （dAMPdGMPdCMPdTMP） 和 dNTP模板DNA 聚合酶其他酶和蛋白質因子3 .DNA 復制過程復制起始復制的延伸復制的終止4 .原核生物和真核生物DNA 復制的比較相同點：1）半保留復制方式2）半不連續復制3） DNA 螺旋酶, SSBP4） RNA 引物不同點：1） 復制起點（單、多）2）復制

8、子（大小、多少）3）復制叉移動的速度4）岡崎片段的大小5）端粒和端粒酶6） DNA 聚合酶RNA 生物合成1 .原核生物轉錄機制終止子不依賴P因子/強終止子(1) 一個反向重復序列，可形成莖環結構，阻止RNA pol 的前進；(2)莖區域內富含G-C,使莖環不易解開；(3) 3端上有6個U,和模板形成的連續 U-A配對較易打開，便于 RNA釋放。2 .真核生物轉錄機制依賴p因子(1) 沒有固定的特征，也可形成莖環結構，但不是都能形成穩定的發夾；(2) 莖中的 G 、 C 含量少。(3) 3端寡聚 U 數量不定；(4)靠與p的共同作用而實現終止。莖環的存在可使 RNA聚合酶暫停一下，若此時 p因

9、子追上來和其結合，那么轉錄即可終止，若無p因子聚合酶還可越過終止進行通讀”。3 .原核前體mRNA 的加工原核生物的mRNA 很少經過加工，由于轉錄和翻譯偶聯，一般情況下一邊轉錄一邊就進行翻譯，中間沒有可加工的間歇時間。但在少數情況下多順反子mRNA 先被內切酶切成較小的單位再作為翻譯的模板。4 .真核生物前體RNA 的加工1. 5 端加帽2. 3端的產生和多腺苷酸化3. mRNA 內部甲基化4. RNA 剪接5. RNA 編輯遺傳密碼1 .通用三聯體密碼1. 密碼子的簡并性2. 密碼子的通用性和特殊性3. 密碼子的閱讀方向4. 密碼子與反密碼子的作用反密碼子與 mRNA 相應的三聯體密碼子堿

10、基互密反補擺動性：mRNA 密碼子的前兩位堿基和tRNA 的反密碼嚴格配對，而密碼子第三位堿基與反密碼子第一位堿基不嚴格遵守配對規則。tRNA1 .tRNA 結構三葉草結構2 .tRNA 的功能3 )解讀 mRNA 的遺傳信息2)運輸的工具，運載氨基酸tRNA 有兩個關鍵部位： 3端CCA :接受氨基酸，形成氨酰 -tRNA。與 mRNA 結合部位 反密碼子部位3 .氨酰tRNA合成酶(AARS )模板 mRNA 只能識別特異的tRNA 而不是AA。氨基酸進入蛋白質合成途徑是通過氨酰-tRNA 合成酶 (AARS) ， 這種酶將氨基酸和特異的 tRNA 連接起來，成為氨基酰tRNA 。原核生物

11、中AARS 有 20 種，對 AA 及 tRNA 高度專一，準確結合； 大?。?40kDa100kDa 之間，有單聚體、二聚體和四聚體。4 .AARS 識別tRNA 的反應 ： 需要三種底物AAtRNAATP 因此有三個位點AA binding sitetRNA binding siteATP site 反應：活化：氨基酸 +ATP+E-氨基酰-ATP-E+PPi轉移：氨基酰-ATP-E +tRNA - aa-tRNA+AMP+E5 .翻譯過程1 起始組成過程：30S+50S+mRNA+fMet- tRNAfmet70S-mRNA-fMet- tRNAfmet+GDP+Pi起始復合物- 70S

12、 三元復合物起始因子(Initiation factor， IF )Ecoli 三種 : IF1IF 的性質特點：IF2IF3IF不同形式MWGTP結合 能力生物學活性IF-19500-無特異功能，但具有加強IF2和IF3的活性作用。IF-2IF-2aIF-2b11700085000+生成IF-2.GTP.fMet-tRNAfmet與前起始復合物結合形成30S三元復合物IF-3IF-3aIF-3B2066819997-1 .使得30S與mRNA結 合，形成前起始復合物 。2 .解離活性，使70S核糖體 顆粒解離為30S和50S亞 基。30S亞基與 mRNA 的結合IF3+30S- - 30S-

13、IF3+ mRNA- 30S-IF3-mRNA ( 30S 復合物) IF3賦予30S亞基與 mRNA 結合的能力。(30S亞基沒有與mRNA主動結合的能力) IF3使30S亞基不能與 50S亞基結合，保證解離狀態 30S 亞基與 mRNA 的結合。SD (5 -AGGAGG- 3)與 16S rRNA 的 3端(3 -UCCUCC- 5)，使 AUG 定 位在P位上。 30S復合物中，起始密碼子位于P位點，只有fMet-tRNAfMet能進入起始tRNA的結合IF2 + fMet-tRNAfIF2-fMet-tRNAf + 30S-IF3-mRNA-30S-IF3-mRNA-IF2TMet-

14、tRNAf-GTP70S起始復合物的形成過程a、 IF3先游離30S-IF3-mRNA-IF2-fMet-tRNAf-GTP 與 50S 亞基的結合導致。b、 70S起始復合物形成 50S亞基的結合激活IF2的GTP酶活性，水解GTP并解離下來（IF1、IF2 ）。 GTP水解釋放的能量改變兩者的構象形成70S起始復合物：30S-mRNA-fMet-tRNA-50Sc、 Met的甲?；?合成到1530個AA 去甲酰基酶（細菌、線粒體）； 氨肽酶去除Met。2延伸延伸的三個階段： 進位反應：主要是密碼子-反密碼子的識別； 轉肽反應：肽鏈的形成；移位反應：tRNA和mRNA相對核糖體的移動。1

15、）進位氨基酰-tRNA與核糖體結合，進入 A位的過程。過程：3終止包括：肽鏈釋放，tRNA逐出，核糖體與 mRNA解聚。3.1 終止密碼 UAA,UGA,UAG ;3.2 釋放因子(releasing factor,RF)釋放因子MWGTP結合能力生物學活性RF136000識別UAA和UAGRF238000識別UAA和UGARF346000+刺激RF1 , RF2的活性，與GTP結合，使轉肽酶構象改變，發揮酯酶活性，水解多肽、脫離tRNA終止過程a. RF1、RF2作用于A位點（P位被肽酰-tRNA所占據），識別終止密碼子；b. RF3作用改變肽基轉移酶構象，從而改變肽基轉移特性，發揮水解酶作

16、用，將肽鏈從結合在核糖體上的 tRNA的CCA末端上水解下來，mRNA與核糖體分離，tRNA脫落。c. RF3與GTP結合為肽基轉移及隨后的核糖體釋放提供能量。d.同時核糖體在IF-3作用下，解離出大、小亞基mRNA翻譯的多肽鏈沒有功能，稱為新生蛋白質或蛋白質前體，需要經過加工改造才能成為有功能的蛋白質。mRNA的信息閱讀：5端向3端，肽鏈延伸：從N端到C端。真核生物的基因組結構1 .真核生物基因組的大小2 .真核生物基因組的基因數量3 .真核生物基因組的非重復序列和重復序列4 .細胞器基因組真核生物基因組的非重復序列和重復序列：1 .高度重復序列2 .中度重復序列3 .非重復序列細胞器基因組

17、：4 .線粒體基因組5 .葉綠體基因組第二節斷裂基因1 .斷裂基因由外顯子與內含子組成2 .外顯子3 .內含子第三節基因家族和基因簇一.基因家族1 .基因家族的成因2 .基因家族的特點3 .假基因4 .常見基因家族第四節 真核生物基因組的包裝一.染色質的結構單位：核小體由核心顆粒和連結 DNA兩部分組成： 每個核小體單位包括約200bp的DNA、一個組蛋白核心和一個 H1 ;組蛋白核心：由 H2A、H2B、H3、H4各兩分子形成八聚體；DNA分子以左手螺旋纏繞在核心顆粒表面，每圈 80bp,共1.75圈，約146bp,兩端被H1鎖合；相鄰核心顆粒之間為一段60bp的連接線DNA。第五章 原核生

18、物基因的表達調控第一節基因表達調控的概念基因表達：儲存遺傳信息的基因經過一系列步驟表現出其生物功能的整個過程?；虮磉_調控：對基因表達過程的調節。生物的基因表達不是雜亂無章的，而是受著嚴密、精確調控：1.5原核生物基因表達調控環節： 轉錄水平上的調控；轉錄后水平上的調控：a. mRNA加工成熟水平上的調控；b.翻譯水平上的調控 。2結構基因和調控基因結構基因(structural gene):編碼蛋白質或 RNA的任何基因。原核生物的結構基因一般成簇排列，真核生物獨立存在。調控基因(regulator gene):參與其他基因表達調控的RNA或蛋白質的編碼基因。其編碼產物與DNA上的特定位點結

19、合調控基因表達第二節 大腸桿菌乳糖操縱子的正負調控一、操縱子與操縱子模型原核生物基因表達調控主要發生在轉錄水平，轉錄調控的基本單元是操縱子。1、操縱子的概念：根據操縱子學說，很多功能上相關的結構基因在染色體上串連排列，由 一個共同的控制區來操縱這些基因的轉錄。包含這些結構基因和控制區的整個核甘酸序列 就稱為操縱子2、操縱子結構由啟動子(P)、操縱基因(O)、調控基因、結構基因所組成。 二、正調控與負調控1、在正轉錄調控系統中，調節基因的產物是激活蛋白(activator),激活蛋白結合與DNA的啟動子及 RNA聚合酶后，轉錄才會進行。(1)在正控誘導系統中，誘導物的存在使激活蛋白處于活性狀態，

20、轉錄進行。(2)在正控阻遏系統中，效應物分子的存在使激活蛋白處于非活性狀態，轉錄不進行2、在負轉錄調控系統中，調節基因的物質是阻遏蛋白(repressor)阻止結構基因轉錄。其作用部位是操縱區。它與操縱區結合，轉錄受阻。(1)負控誘導系統一一阻遏蛋白不與誘導物結合時，阻遏蛋白與操縱區相結合，結構基因 不轉錄，阻遏蛋白結合上誘導物時，阻遏蛋白與操縱區分離，結構基因轉錄。(2)負控阻遏系統一一阻遏蛋白與效應物結合時，結構基因不轉錄。名詞正調控負調控誘導阻遏激活蛋白阻遏蛋白誘導物輔阻遏物調控模式1、可誘導負調控2、可誘導正調控3、可阻遏負調控4、可阻遏正調控三、大腸桿菌乳糖操縱子的負調控(一)大腸桿

21、菌的乳糖利用系統大腸桿菌的乳糖代謝需要有 3 -半乳糖甘酶(3 -galactosidase)的催化。這種酶能 把乳糖水解為半乳糖和葡萄糖 .另外有半乳糖昔透性酶和疏基半乳糖昔轉乙酰酶。三種酶協同作用，使得乳糖得以分解和利用。乳糖操縱子的結構和功能結構 基因3個不同結構基因能夠產生3種不同的酶.操縱 基因是結構基因的開關.通過對RNA聚合酶阻抑與否來控制結構基因的 轉錄或停止.啟動子是RNA聚合酶與DNA結合的部位，可識別轉錄起始點.調節能產生阻遏物.通過阻遏物與操縱基因的結合與否來控制操縱基因的基因關閉和開啟二)乳糖操縱子的調控機制1、沒有乳糖時，具有活性的阻遏物和操縱基因結合，轉錄不能進行

22、。2、有乳糖時，乳糖與阻遏物結合，使阻遏物發生構象變化而失活，不能與操縱子結合，結 構基因正常轉錄，進而再翻譯出蛋白質。四、大腸桿菌乳糖操縱子的正調控1、葡萄糖敏感操縱子有一些控制某一種糖如乳糖、半乳糖、阿拉伯糖和麥芽糖等分解代謝的操縱子， 當培養基含有葡萄糖時，會阻止這些操縱子的功能，稱為葡萄糖敏感操縱子。例如：當大腸桿菌生長的培養基中既有葡萄糖又有乳糖的條件，只利用葡萄糖，而不利 用乳糖。換句話說，只要在培養基中有葡萄糖存在，便可抑制了利用其他各種酶的產生， 稱為分解物阻遏。2、CAP-cAMP 調控另外一種起調節作用的誘導物為cAMP (環化腺甘酸)分析一組實驗幾種情況：(1)當培養基中

23、含用大量葡萄糖時，cAMP水平明顯下降。(2)當以乳糖為唯一碳源時，cAMP水平明顯上升，3-半乳糖昔酶的合成增加。3)當有乳糖和葡萄糖為碳源時，如果加入cAMP , 3 -半乳糖昔酶的合成速率大大提高。結論：？cAMP濃度能影響到3 -半乳糖昔酶的合成速率。主要是 cAMP能激活CAP (分解物基因 激活蛋白)，起轉錄因子的作用。3、lac操縱子的正調控機制(1) cAMP-CAP復合物與 DNA結合，改變 DNA結構，促進了 RNA聚合酶結合區的解 鏈，從而促進 RNA聚合酶和啟動子結合，使轉錄能力增強。(2) cAMP-CAP復合物的形成取決于 AMP的濃度，當以葡萄糖為能源時，由于其抑

24、制腺 甘酸環化酶的活性，ATP不能轉化為cAMP , cAMP濃度下降，不能形成 cAMP-CAP復合 物，乳糖結構基因不能被轉錄。(因為細胞中有葡萄糖作為能源，就沒有必要需要對乳糖利用的幾種酶了 )四、色氨酸操縱子的轉錄調控及衰減作用1 .色氨酸操縱子模型：操縱子：包括色氨酸合成有關的5種酶的結構基因；大量色氨酸時：大腸桿菌5種酶的轉錄同時受到抑制；色氨酸不足時：這5種酶的基因開始轉錄；色氨酸：作為阻遏物而不是誘導物參與調控結構基因的轉錄。trp操縱子是一個典型的可阻遏操縱元模型(repressible operon)。色氨酸操縱子模型結構：5種結構基因：trpE、D、C、B、A;調控結構：

25、啟動子、操縱子、前導序列、弱化子； 阻遏物trpR基因：與trp操縱子相距較遠；2 .色氨酸操縱子的負調控：.阻遏調控：trpR基因編碼無輔基阻遏物與色氨酸結合形成有活性的色氨酸阻遏物與操作子結合阻止轉錄；色氨酸不足：阻遏物三維空間結構發生變化，不能與操作子結合，操縱元開始轉錄；色氨酸濃度升高：色氨酸與阻遏物結合，空間結構發生變化， 可與操作子結合，阻止轉錄。.弱化子調控：當有色氨酸存在而 trp操縱子受抑制時，仍有一段前導序列發生轉錄，可能存 在另一種的機制來抑制 trp操縱元的轉錄。色氨酸高濃度存在時，轉錄的前導序列140bp長，其中有一 28bp的弱化子區域；形成發夾結構，為內部終止子，

26、 RNA酶從DNA上脫落，不能轉錄；色氨酸低濃度或不存在時，RNA聚合酶能通過弱化子區域，轉錄完整的多順反子mRNA序列；第七章基因突變和修復第一節基因突變一、基因突變的類型1 .堿基置換和移碼突變2 .同義突變、錯義突變和無義突變3 .自發突變和誘發突變4 .點突變和染色體變異5 .突變和回復突變1 .堿基置換和移碼突變移碼轉換和顛換突變轉換(transition):一種喋吟-喀咤對被另一種喋吟-喀咤對所替換。顛換(transvertion):一種口吟-喀咤對被另一種喀咤-喋吟對所替換 。移碼突變(frame-shift mutation基因組DNA鏈中插入或缺失1個或幾個堿基對，從而使自插

27、入或缺失的那一點以下的三聯體密碼的組合發生改變，進而使其編碼的氨基酸種類和序列發生變化。無義突變(non-sense mutation)堿基替換使編碼氨基酸的密碼變成終止密碼UAA、UAG或UGA。錯義突變(missense mutation)堿基替換使編碼某種氨基酸的密碼子變成編碼另一種氨基酸的密碼子，從而使多肽鏈的氨基酸種類和序列發生改變。3 .自發突變和誘發突變自發突變：主要來源于復制錯誤及DNA自發水解和脫氨等產生的自發損傷。(堿基的互變異構、脫氨作用、脫喋吟脫喀咤、堿基修飾與鏈斷裂)誘發突變：物理、化學或生物因素誘發產生的突變。堿基類似物某些堿基類似物可以取代堿基而插入DNA分子引起

28、突變芳香族化合物吖啶類和焦寧類等扁平分子構型的芳香族化合物可以嵌入DNA 的核苷酸序列中，導致堿基插入或丟失的移碼突變。二、基因突變的特點1. 普遍性2. 基因自發突變頻率很低(10-6-10-9)3. 多數基因突變對生物體有害4. 基因突變的隨機性和不定向性第三節 直接修復1 DNA 聚合酶的校正功能2 嘧啶二聚體的光復活修復3 烷基轉移酶介導的修復一、 DNA 聚合酶的校正功能原核生物DNA 聚合酶3-5外切校對活性真核生物DNA 聚合酶3-5外切校對活性第四節 錯配修復系統一錯配修復系統根據不同甲基化程度識別模板鏈和新生鏈第五節切除修復系統一堿基切除修復1 .DNA 糖基化酶的作用2 .

29、AP 內切酶的作用3 .氧化堿基的修復第六節重組修復一 同源重組修復第八章基因重組和轉座第一節同源重組一、同源重組的分子機制1. 同源重組的條件交換區具有相同或相似的序列雙鏈 DNA 分子間互補配對重組酶的存在異源雙鏈區的形成二、同源重組的酶學機制-Rec ABCD 、 RuvABC 途徑Rec BCD 蛋白在 chi 位點 3側的一條鏈上產生切口。Rec BCD 蛋白同時具有解螺旋酶的活性，使chi 位點附件切口的DNA 解鏈單鏈區被Rec A 蛋白和 SSB 蛋白覆蓋RecA 蛋白使單鏈DNA 取代雙鏈DNA 中的同源部分D loop 區域的 DNA 產生切口，新切口的3端( the ta

30、il of newly nicked DNA )與另一條 DNA 的單鏈區互補配對DNA 連接酶封閉切口，形成Holliday junctionRuvA 和 RuvB 發動遷移反應RuvC 拆分重組中間體第二節位點特異性重組位點特異性重組最典型的列子是 入噬菌體對 E.coli的整合。在裂解周期， 入DNA 是以環狀分子獨立存在于細菌的細胞質中；在溶原化狀態時的入DNA是整合在細菌的染色體中。稱為原噬菌體。通過位點特異性重組這兩種狀態是可以相互轉變的。進入溶原狀態時游離的 入DNA必須整合（intergrated）到宿主的DNA中；從溶原周 期進入裂解周期時原噬菌體DNA須從宿主的染色體中切離

31、出來。噬菌體入的整合和切離是在特異位點即附著位點（attatchment sites, att ）通過重組完成的，若這個位點發生突變就會失去功能而抑制整合。第三節轉座（transposition）一、原核轉座子的類型.插入序列（IS）:IS家族的結構：兩端都有短的 正向重復序列（direct repeats, DR）,略長的反向重復序列（inverted repeats, IR ）以及1kb左右的編碼區，它僅編碼和轉座有關的轉座酶。對靶的選擇有三種形式：隨機選擇，熱點選擇和特異位點的選擇。2 .復合轉座子：復合轉座子含有一個中心序列和位于兩側的臂（arm）。除了和自身轉座有關的基因外，中心序列

32、含有抗藥性基因等遺傳信息。復合轉座子兩端的臂由IS序列組成。有的二側組件相同（如 Tn903）,有的 不同（如Tn10）。有的方向相同（如 Tn9）,有的方向相反（如 Tn903, 10, 5）。有的皆有功能（如 Tn903, 10）,有的僅右側組件有功能3 .Tn A家族:TnA是復制型轉座的轉座子。長名5kb左右，中部的編碼區不僅編碼抗性基因，還編碼轉座酶和解離酶。兩端具有末端反向重復序列，而不是IS,長約38bp左右，任一個缺失都會阻止轉座。靶位點具有5bp的正向重復序列。TnA家族都帶有抗性標記二.轉座機制：轉座子插入到 DNA上新的位點，首先交錯切開靶DNA ,再將轉座子連接到靶 D

33、NA的凸出單鏈上，最后填補空缺完成轉座。使用參差不齊的末端是各種轉座子的共同特點根據轉座子的機制，轉座可分成三種不同的類型：1 .復制性轉座2 .非復制型轉座這類轉座因子直接從原位點移到靶位點，同時在供體留下產生一個雙鏈斷裂的位點。這種類型的機制只需要轉座酶。這個雙鏈斷裂位點需要修復系統的識別和修復，否則將是致命的。3 . 保守轉座 （conservative tranposition ）Conservative transposition involves direct movement with no loss of nucleotide bonds 保守轉座的轉座因子從供體位點上切離，插入到靶位點上，供體位點恢復原狀。這種因子的轉座酶和入整合酶家族相關。注意：某些轉座子只具有一種轉座機制，而另一些可能具備兩種途經，如IS1和IS903第九章基因工程基因工程：在生物體外，通過對 DNA分子進行人工 剪切”和拼接”，對生物的基因進行改 造和重新組合，然后導入受體細胞進行無性繁殖，使重組基因在受體細胞內表達，產生出 所需要的基因產物?；蚬こ痰膭e名基因拼接技術或 DNA重組技術操作劃、境生物體外操作對象基因操作水平DNA分子水平基本