1、高效液相色譜的維護與保養高效液相色譜的維護與保養液相色譜儀器的使用及保養色譜泵的保養色譜泵的保養流動相要過濾常用緩沖液時，停泵前要用水沖洗，并用水沖洗柱塞桿清洗孔擰緊排液閥時，不要太用力，以不滲液為準更換流動相時，要保證兩種溶劑的互溶性,如不互溶，要用一種中間溶劑過渡. 例如:使用無機鹽緩沖液時,用前和用后均須用水過渡流動相的脫氣流動相的脫氣流動相脫氣的目的.使色譜泵的輸液準確輸液均勻準確，并且脈動減小保留時間及色譜峰面積的重現性提高.提高檢測的性能防止氣泡引起的尖峰基線穩定，信噪比增加溶劑的紫外吸收本底降低.保護色譜柱減少死體積防止填料的氧化流動相脫氣的方法流動相脫氣的方法加熱.簡單，如同抽

2、真空一起使用，其效果很好。但容易造成流動相組成的變化抽真空.同上，一般在溶劑抽濾的同時，也有脫氣的效果超聲波.簡單，但效果不理想。通惰性氣體（一般用氦氣）.可保持連續脫氣，多用于低壓梯度在線脫氣機.可保持連續脫氣，多用于低壓梯度色譜泵的排氣操作色譜泵的排氣操作使用前，應先確認泵頭內沒有氣體，如有氣體要按以下步驟排氣：.將排液閥反時針轉2-3圈，用10ml注射器抽，直到出液.按以下方法之一將泵的后面放空將U6K的C閥打開，或717設在PURGE狀態或，將參比閥打開或，把色譜柱摘下.打開電源開關.開大流速到 69ml/min.同時用10ml注射器從排液閥注入流動相.直到泵后的流速穩定無氣泡為止色譜

3、泵的運行色譜泵的運行注意用外部控制器與用泵面板控制的區別.有些型號的外部控制器與面板不能同時用.如需要面板控制，需要斷開控制線或關閉控制器排氣后的色譜泵即可運行.注意排氣后，先設流速為 0恢復排氣時斷開的部分，如 進樣器、色譜柱如需要，恢復排氣時斷開的控制線根據色譜柱的不同，逐漸提高流速到設定值液相色譜對流動相的要求液相色譜對流動相的要求除色譜柱對流動相的要求外，還有.與檢測器匹配.脫氣.避免鹵素離子（不銹鋼系統）.溶劑的粘度.防止細菌的生長流動相的保存流動相的保存有機溶劑流動相:.室溫下密封,避光保存緩沖鹽流動相:.當日現配現用.低溫下密封保存,一般不超過3天.防止長菌有機溶劑與水（緩沖鹽）

4、混配的流動相:.低溫密封保存.防止有機相的揮發選用適宜的容器2 星期1 天1 星期1 小時新鮮配制5101520250分保存于聚乙烯瓶中的超純水保存于聚乙烯瓶中的超純水1 天1星期新鮮配制5101520250分保存于標準棕色玻璃瓶中的超純水保存于標準棕色玻璃瓶中的超純水檢測器的保養檢測器的保養如長時間不用檢測器可以關掉紫外燈.在4小時以上不用時，太頻繁開關也不好不要讓緩沖液長期停滯在檢測池內.用純水沖洗示差檢測器及熒光檢測器.注意流動池的耐壓，不要在后面加壓關于自動進樣器的針清洗關于自動進樣器的針清洗.Purge Injector 與 Needle Wash.洗針溶劑瓶(綠色塑料管)不要放在7

5、17plus的上部，應放于717plus同一水平面.洗針溶劑根據流動相的不同應有不同：流動相洗針溶劑緩沖溶液，反相50% 水 50% 甲醇純緩沖溶液100% 水非水溶液，反相100% 甲醇正相流動相GPC流動相離子交換對離子試劑的水溶液異丙醇異丙醇？液相色譜系統的清洗與鈍化液相色譜系統的清洗與鈍化一般采用30磷酸作為清洗劑，用6M硝酸作為鈍化劑，先清洗再鈍化清洗的目的是去除不銹鋼管路及系統內的污垢鈍化的目的是使不銹鋼管路的內表面形成光滑均勻的氧化膜高效液相色譜的維護與保養高效液相色譜的維護與保養色譜柱的使用及保養測柱效測柱效 良好的色譜實驗習慣良好的色譜實驗習慣拿到一根新色譜柱時，先測柱效保留

6、在新色譜柱上測得的色譜圖，并記錄色譜測試條件定期檢測柱效定期檢測儀器的譜帶展寬測柱效的方法測柱效的方法色譜柱種類繁多,性能各異,測定方法亦各不相同Waters的色譜柱均附有Use and Care說明書,可按說明書所述方法測定以下是Waters反相C18柱的測定方法:.流動相:乙腈/水=60:40;流速:1ml/min.樣品:50mg Acenaphthene(二氫苊)溶于100ml乙腈,加入600l丙酮.進樣量5l.檢測波長:254nm計算色譜柱的柱效計算色譜柱的柱效 N N理論塔板數計算公式：Ws 方法Wtan16切線法Wh5.54半峰高半峰高W3s9 3sW4s16 4sW5s25 5s

7、21WVNs色譜柱的正確使用及操作色譜柱的正確使用及操作流動相的轉換.特別是GPC柱流速(壓力)的變化幅度：0.1ml/min.凝膠柱（GPC及糖柱）溫度的變化幅度專用色譜柱 樣品及溶劑的要求記記住住拿拿到到一一根根從從未未用用過過的的色色譜譜柱柱時時 一一定定要要先先看看其其使使用用說說明明！色譜柱與儀器的聯接色譜柱與儀器的聯接不同公司的色譜柱接頭不同。處理不當時會造成嚴重后果：.色譜峰展寬（死體積）致使柱效下降或滲漏解決辦法：.自制相應的轉換接頭.使用“通用”型接頭（錐箍及螺母）這種錐箍在不銹鋼管上是活動的，即stop-depth長度可調。因此可以換接不同的色譜系統及色譜柱。從Waters

8、 Phase Separations公司能得到一些PEEK工程塑料的接頭,可用在各種類型的色譜柱上。色譜柱的聯接色譜柱的聯接各種錐箍和管路接頭長度示意圖:譜帶展寬譜帶展寬連接適當連接不妥由于色譜柱連接不當引起的譜帶展寬，機械問題色譜柱安裝及連接的機械因素色譜柱安裝及連接的機械因素連接不妥，造成漏液色譜柱的在線保護裝置色譜柱的在線保護裝置給色譜柱提供物理的保護.除去樣品及流動相中的顆粒給色譜柱提供化學的保護.防止分析柱被化學污染裝置.在線過濾器.自裝填料保護柱.預裝保護柱在線過濾器在線過濾器In-Line Filter，部件號 WAT084560.防止顆粒在色譜柱頭累積.優點：基本不影響柱效.在

9、需要高柱效的分析時中常用（如：氨基酸分析）可更換的消耗品.更換濾芯，部件號 WAT005139 (5/pkgs).更換墊圈，部件號 WAT084567 (10/pkgs)保護柱保護柱可避免化學污染新型保護柱可提高整個色譜柱的柱效，甚至可作為色譜柱使用保護柱選擇：選用與色譜柱相同的填料.真正起到保護作用.保證色譜分離結果 使用保護柱延長色譜壽命實例：磺胺藥物分析相同保護柱與色譜柱：第950次進樣更換新Sentry Guard保護柱：第951次進樣使用配Symmetry C8保護柱的色譜柱：首次進樣色譜柱的保護色譜柱的保護色譜柱的清洗色譜柱的清洗對所做的樣品要有充分的了解用對該樣品洗脫能力最強的流動相清洗硅膠柱的一般方法先用甲醇洗去極性雜質用干燥的二氯甲烷、正庚烷100200ml依次活化鍵合相柱(烷基)的一般方法20倍柱體積的：甲醇-氯仿-甲醇-水依次沖洗若使用緩沖液，需先用不含鹽的水溶液清洗記住每種色譜柱可能有特定的方法記住每種色譜柱可能有特定的方法 一定要先看其使用說明！ 一定要先看其使用說明！色譜柱的存放色譜柱的存放存放前的處理.除去雜質、緩沖鹽合適的存放溶劑避免色譜柱床的干涸避免機械震動防止細菌生長注意存放的溫度正確使用色譜柱（一）正確使用色譜柱（一）流動相方面.除去微粒.純度的要求超純水，梯度實驗時水中有機雜質含量要低緩沖液的pH值，在填料的允許范圍內緩沖液（鹽）的