1、    L-arg在高膽固醇血癥兔中抗氧化作用研究        臨床和實驗研究報道，脂質過氧化作用在動脈粥樣硬化(atherosclerosis)發病機理中起重要作用。新近研究報道，動脈粥樣硬化病變過程中，血管內皮損傷，精氨酸/一氧化氮(L-arginine/nitric oxigen, L-arg/NO)途徑障礙，而內源性NO有清除自由基的作用，NO對多不飽和脂肪酸的脂質過氧化作用有抑制作用。目前，關于NO與動脈粥樣硬化發生發展過程中的脂質過氧化作用的關系尚不清楚。本研究

2、主要觀察體外長期補充外源性NO前體物L-arg時，對高膽固醇血癥兔動脈粥樣硬化病變過程中的脂質過氧化作用的影響。 材料和方法一、動物與分組:中科院皮膚病研究所提供健康成年雄性新西蘭兔(體重1.92.2 kg左右)16只，分為3組：正常對照組( normal, N組)5只，喂普通飼料。單純膽固醇組(cholesterol, Ch組)6只，飼料中含1%膽固醇。膽固醇+精氨酸組(CA組)5只，飼料中含1%膽固醇和2.25%精氨酸。3組均喂滿10周。膽固醇(AR)購自上海醫藥采購供應站，L-arg購自上海伯奧醫藥公司。二、指標測定：在實驗開始前、第5周和第10周采兔耳緣靜脈血，血漿膽固醇(total

3、cholesterol, TC)采用鄰苯二甲醛直接顯色法測定，血漿丙二醛(malondialdehyde, MDA)采用硫代巴比妥酸法測定。第10周處死動物，摘取胸主動脈，稱重、制成勻漿，采用硫代巴比妥酸法測定其MDA含量，同時用雙縮脲法測其組織蛋白含量，以每毫克蛋白質中含TBA活性物質的nmol/mg表示MDA活性。另取50mg動脈組織嚴格按cGMP放免測定盒操作測定其cGMP含量。三、數據處理和分析：數據用均值±標準差(<"9903062.jpg (732 bytes)" src="/med/cano/201003/20100310182151

4、966.jpg" 15 17>±s)表示，方差分析用組間q檢驗。結果一、不同時期各組血漿膽固醇測定結果(見表1)：喂食高膽固醇飲食后，補充L-arg組和單純膽固醇組血漿膽固醇含量均大大增加，為正常組的10余倍，Ch組和CA組之間無明顯差異。補充L-arg不影響血漿膽固醇含量。二、血漿和動脈組織中cGMP、MDA含量測定(見表2)：表1不同時期三組兔血漿膽固醇含量Tab 1 The levels of total cholesterol of the rabbitplasa in different stages(mmol/L,<"9903062.jpg

5、 (732 bytes)" src="/med/cano/201003/20100310182151966.jpg" 15 17>±s)GroupnBeginningThe fifth weekThe tenth weekN51.196±0.2671.276±0.267*1.270±0.219*Ch61.085±0.36017.394±5.11118.686±4.180CA51.230±0.54215.716±5.23717.696±4.915*P0.05,

6、*P0.01vs Ch group表2實驗結束時動脈組織cGMP、MDA的含量Tab 2 The levels of cGMP、MDA in the aorta tissues at the end of the experiment(nmol/mg, <"9903062.jpg (732 bytes)" src="/med/cano/201003/20100310182151966.jpg" 15 17>±s)GroupnPlasmaAorta tissuecGMP(pmol/L)MDA(nmol/mg)cGMP(pmol/L)M

7、DA(nmol/mg)N543.08±5.54*6.452±2.346*33.36±7.98*0.22±0.02*Ch635.78±3.5713.737±2.70512.96±7.760.30±0.08CA546.18±5.14*6.194±2.146*35.96±14.76*0.22±0.01*P0.05, *P0.01, vs Ch group由表2可見，在實驗結束時，CA組血漿和動脈組織MDA含量小于Ch組，有顯著差異；CA組血漿動脈和組織cGMP含量大于Ch組，差異顯

8、著。可見，補充精氨酸后提高了cGMP含量，減小了MDA含量。討論高膽固醇血癥所致血管內皮細胞損傷和LDL的氧化、修飾在AS發生過程中起重要作用。新近研究報道，動脈粥樣硬化病變時，其血漿NO含量較低，推測可能與內皮細胞受損，其合成和釋放NO減少有關。NO帶有不成對電子，可迅速與分子氧、超氧陰離子反應，是超氧化物陰離子(<"wpe3.jpg (872 bytes)" src="/med/cano/201003/20100310182151582.jpg" 18 21>)的清除劑，在有Fe2存在時，可與其它活潑自由基(·OH)反應生成HO

9、NO，與脂質過氧化中產生的以碳為中心的自由基LOO、烷氧自由基LOO·和過氧自由基LOO·迅速反應形成LNO，LONO和LOONO，而這些自由基對LDL有氧化修飾作用。NO減少，則進一步促進LDL的氧化和細胞損傷。這樣，一方面Ox-LDL對單核細胞有趨化作用，促進它們聚集在動脈內皮并進入動脈壁中，促進大單核細胞/巨噬細胞通過清道夫受體大量攝取氧化脂蛋白形成泡沫細胞；另一方面，Ox-LDL的較強的細胞毒性加重內皮細胞損傷，致使其對血小板粘附聚集的抑制作用減弱，cGMP抗血管平滑肌增殖作用減弱，而體內的脂質過氧化作用較強，最終形成一系列動脈粥樣硬化的病理變化。本實驗中體外補充L-arg后，可使體內NO增多，而脂質過氧化物的分解產物MDA在血漿和組織中均下降，這一方面可能與NO的直接清除自由基作用，保護內皮細胞功能完整性有關，另一方面可能與NO抑制LDL的氧化有關，因此，在Cook實驗中