1、補(bǔ)腎壯骨顆粒增強(qiáng)骨密度作用的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究    【摘要】  目的比較低鈣、CaCO3及補(bǔ)腎壯骨顆粒對(duì)大鼠股骨生長(zhǎng)的影響，進(jìn)行補(bǔ)腎壯骨顆粒增加骨密度的作用研究。方法70只清潔級(jí)SD雌性大鼠，分設(shè)3個(gè)劑量的受試組、相應(yīng)的CaCO3對(duì)照組和低鈣對(duì)照組，喂養(yǎng)90 d后,測(cè)定各組大鼠的股骨干重、密度、鈣表觀吸收率及骨鈣含量等指標(biāo)。結(jié)果3.30，6.60 g/kg.bw劑量受試組的股骨鈣含量與鈣總量、中點(diǎn)和遠(yuǎn)心端密度均高于低鈣組(P<0.05或P<0.01)； 1.65，6.60 g/kg.bw劑量受試組的股骨鈣總量和遠(yuǎn)心端密度分別高于相應(yīng)Ca

2、CO3組(P<0.05或P0.05)。結(jié)論補(bǔ)腎壯骨顆粒的鈣吸收率較高，并具有增加骨密度的功能作用。 【關(guān)鍵詞】  補(bǔ)腎壯骨顆粒 杜仲 牦牛骨粉 骨密度Research of BushenZhuanggu Granule on the Function of Enhancing Bone Mineral DensityAbstract：ObjectiveTo observe the effect on feeding rat with different food and study the function of BushenZhuanggu granule on increa

3、sing bone mineral density.Methods70 sanitary distinction rats were randomized into 7 groups including 1 scarce calcium group, 3 CaCO3 groups and 3 experimental groups (BushenZhuanggu granule) for 90 days. Then the indexes of rats'  thighbone weight, mineral density and the content of calciu

4、m were measured.ResultsThe content of calcium and mineral density of experimental group in 3.30,6.60 g/kg.bw  were better than those in scarce calcium group (P<0.05 or P<0.01).The content of calcium in experimental group of 1.65,6.60 g/kg.bw were better than those CaCO3 groups (P<0.05

5、or P<0.01).Compared with CaCO3 groups, the other indexes of the experimental groups had no statistic significance(P>0.05)ConclusionBushenZhuanggu granule can promote absorbing calcium by the bone, and enhance bone mineral density.Key words：BushenZhuangguKeli;  Eucommia ulmoides Oliv.;

6、0; Yak bone dust;  Bone mineral density (BMD)    骨質(zhì)疏松（osteoporosis）是世界范圍內(nèi)的老年性疾病之一，多為生理、病理以及藥物治療因素導(dǎo)致，是一種嚴(yán)重危害中老年人，尤其是老年婦女健康的常見、多發(fā)病癥。 隨著人均壽命的延長(zhǎng)和中國(guó)老齡化社會(huì)的到來，骨質(zhì)疏松及其合并癥的發(fā)病率逐步上升，因此防治骨質(zhì)疏松癥、增加骨密度已經(jīng)成為醫(yī)藥食品界越來越重視的課題之一。中醫(yī)理論認(rèn)為：腎,主骨,生髓藏精。素問?陰陽應(yīng)象大論中論述說：腎精、腎氣充實(shí)，則骨髓生化有源，骨骼堅(jiān)固，強(qiáng)健有力；若腎氣不足，腎精虧虛，則骨髓乏源，骨

7、骼失養(yǎng)而導(dǎo)致骨質(zhì)疏松。因此，在某種意義上來說，歸腎經(jīng)的中藥可以影響骨的生長(zhǎng)，補(bǔ)腎中藥具有延緩和治療骨質(zhì)疏松的作用1。    杜仲 Eucommia ulmoides Oliv.為杜仲科杜仲屬植物，味甘、微辛，性溫，歸肝、腎二經(jīng)，具有補(bǔ)肝腎、強(qiáng)筋骨、降血壓、安胎等功效2,是補(bǔ)腎健骨的常用中藥之一。牦牛骨粉為牦牛鮮骨經(jīng)噴霧干燥、超微細(xì)化等高新技術(shù)進(jìn)行加工，使細(xì)度均在200目以上，含骨中全部蛋白質(zhì)、磷質(zhì)、骨膠朊等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，其鈣、磷比為21，為最佳吸收比例，易于消化吸收，是純天然有機(jī)鈣源，能夠補(bǔ)充鈣的吸收。     該受試品即以杜仲

8、葉、牦牛骨粉等為主料配以其它輔料經(jīng)多次混合制粒，加工為顆粒。既能補(bǔ)腎壯骨，促進(jìn)骨的成長(zhǎng)，又以骨粉為良好鈣源，補(bǔ)充骨的鈣質(zhì)。1  材料與方法1.1  受試樣品補(bǔ)腎壯骨顆粒，以杜仲葉、牦牛骨粉等為主料。 受試物實(shí)測(cè)含鈣量為2.25。1.2  試驗(yàn)動(dòng)物清潔級(jí)SD雌性大鼠，70只，體重70 g左右，由上海西普爾-必凱實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司提供。    1.3  劑量選擇及樣品處理1.3.1  劑量計(jì)算該產(chǎn)品成人推薦每天攝入量為20 g/d，按成人60 kg重計(jì)，人體推薦攝入量可折算為每日0.33 g/kg.bw。1.3

9、.2  劑量分組低鈣對(duì)照組（實(shí)際含鈣量為1 160 mg/kg）；3個(gè)劑量 1.65，3.30，6.60 g/kg.bw的補(bǔ)腎壯骨顆粒受試組(在低鈣合成飼料的基礎(chǔ)上分別添加受試物1.67，3.33，6.67，實(shí)際含鈣量分別為1 437，1 852，2 778 mgkg)；相應(yīng)劑量的CaCO3對(duì)照組(在低鈣合成飼料的基礎(chǔ)上分別添加CaCO3 3 592.5 ，4 630，6 945 mgkg 的量，使之與補(bǔ)腎壯骨顆粒受試組相對(duì)應(yīng)的)。1.3.3  樣品給予實(shí)驗(yàn)時(shí)受試物以飼料摻入的方式給予。1.4  試驗(yàn)方法3機(jī)體中的鈣絕大部分儲(chǔ)存于骨骼及牙齒中，動(dòng)物若攝入鈣量不足會(huì)

10、影響機(jī)體和骨骼的生長(zhǎng)發(fā)育。生長(zhǎng)期大鼠在攝食低鈣飼料的基礎(chǔ)上分別補(bǔ)充碳酸鈣（對(duì)照組）或受試含鈣產(chǎn)品（實(shí)驗(yàn)組），檢測(cè)大鼠體重、股骨長(zhǎng)度、干重和鈣含量及骨鈣總量及鈣表觀吸收率等指標(biāo)，比較兩者在促進(jìn)機(jī)體及骨骼的生長(zhǎng)發(fā)育，增加骨礦物質(zhì)含量和增加骨密度上的作用，從而對(duì)受試樣品增加骨密度的功能進(jìn)行評(píng)價(jià)。1.5  數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)組間的比較采用SPSS 11.5統(tǒng)計(jì)軟件包中的單因素方差分析和LSD檢驗(yàn)(方差齊的前提下)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。1.6  儀器和試劑1.6.1  儀器原子吸收分光光度計(jì)(HG9620A型，沈陽華光精密儀器有限公司)，光子骨密度儀，動(dòng)物解剖器械、電子天平(SL-1001型，0

11、.1 g，上海民橋電子儀器廠)，電子天平(JA2003型，0.001 g，上海精科天平)，烘箱。1.6.2  試劑硝酸、高氯酸、氧化鑭，均為優(yōu)級(jí)純。 2  結(jié)果2.1  補(bǔ)腎壯骨顆粒對(duì)大鼠體重的影響2.1.1  檢測(cè)方法各組大鼠連續(xù)飼養(yǎng)3個(gè)月，實(shí)驗(yàn)期間，每周稱體重1次，觀察受試物及CaCO3補(bǔ)充對(duì)大鼠生長(zhǎng)發(fā)育的影響。2.1.2  測(cè)定結(jié)果大鼠各期體重見表1。表1  補(bǔ)腎壯骨顆粒對(duì)大鼠體重的影響(略)    由上表可見，試驗(yàn)期間，各組大鼠的體重均有不同程度的增長(zhǎng)，但各組同期體重間無顯著性差異。2.2

12、0; 補(bǔ)腎壯骨顆粒對(duì)大鼠股骨長(zhǎng)度、干重和鈣含量及骨鈣總量的影響2.2.1  檢測(cè)方法動(dòng)物喂養(yǎng)3個(gè)月后處死，剝離出右側(cè)股骨，105烘烤至恒重，稱量骨干重和骨長(zhǎng)度，并采用光子骨密度儀測(cè)定中點(diǎn)及遠(yuǎn)心端的骨密度。2.2.2  測(cè)定結(jié)果各組大鼠股骨長(zhǎng)度、干重、骨鈣含量和骨鈣總量測(cè)定結(jié)果見表2。表2  補(bǔ)腎壯骨顆粒對(duì)大鼠股骨長(zhǎng)度、干重和鈣含量及骨鈣總量的影響(略)由表2可見，各組大鼠股骨長(zhǎng)度和股骨干重均無顯著性差異。    相應(yīng)劑量的CaCO3對(duì)照組股骨鈣含量也明顯高于低鈣對(duì)照組，差異具有極顯著性(P<0.01)。受試物各受試組股骨鈣含量與

13、相應(yīng)劑量的CaCO3對(duì)照相比，差異無顯著性(P<0.05)。    受試物6.60 g/kg.bw受試組和相應(yīng)劑量的CaCO3對(duì)照組股骨鈣總量均明顯高于低鈣對(duì)照組，差異具有極顯著性(P<0.01)，1.65 g/kg.bw受試組股骨鈣總量高于相應(yīng)劑量的CaCO3對(duì)照組，差異有顯著性(P<0.05)。    以上測(cè)定結(jié)果表明，受試物具有提高大鼠股骨鈣含量的作用。    各組大鼠股骨密度測(cè)定結(jié)果見表3。表3  補(bǔ)腎壯骨顆粒對(duì)人鼠股骨骨密度的影響(略)方差分析和LSD檢驗(yàn)結(jié)果表明：受

14、試物3.30 g/kg.bw受試組與相應(yīng)劑量的CaCO3對(duì)照組股骨遠(yuǎn)心端密度高于低鈣對(duì)照組，差異分別有顯著性(P<0.05)和極顯著性(P<0.01)；受試物1.65 g/kg.bw受試組大鼠股骨遠(yuǎn)心端密度高于相應(yīng)劑量的CaCO3對(duì)照組和低鈣對(duì)照組，差異分別有顯著性(P<0.05)和極顯著性(P<0.01)。    受試物3.30,6.60 g/kg.bw受試組股骨中點(diǎn)密度高于低鈣對(duì)照組，差異有極顯著性(P<0.01)，6.60 g/kg.bw劑量CaCO3對(duì)照組股骨中點(diǎn)密度高于低鈣對(duì)照組，差異有顯著性(P<0.05)。

15、0;   以上結(jié)果表明，受試物具有提高大鼠股骨骨密度的作用。2.3  補(bǔ)腎壯骨顆粒對(duì)大鼠鈣表觀吸收率的影響2.3.1  檢測(cè)方法于試驗(yàn)第5周，將各組大鼠轉(zhuǎn)入代謝籠(每籠1只)，稱量加入、撒出和剩余的飼料量以及排出的糞便量，烘干至恒重并事先粉碎、混和均勻并過20目篩，經(jīng)混和酸(硝酸高氯酸=41)濕化后，以0.5的氧化鑭溶液定容，采用原子吸收分光光度法測(cè)定其含鈣量，由此計(jì)算各組大鼠鈣的吸收率。2.3.2  測(cè)定結(jié)果各組大鼠鈣攝入量、糞鈣排出量和表觀吸收率見表4。表4  補(bǔ)腎壯骨顆粒對(duì)大鼠鈣表觀吸收率的影響(略)  &#

16、160; 由表4可見，低鈣對(duì)照組鈣表觀吸收率明顯高于各受試組和CaCO3對(duì)照組，這與機(jī)體鈣缺乏時(shí)吸收率增加有關(guān)。受試物1.65，6.60 g/kg.bw受試組鈣表觀吸收率高于相應(yīng)劑量的CaCO3對(duì)照組，差異分別有顯著性(P<0.05)和極顯著性(P<0.01)，表明受試物的鈣吸收率較高。3 結(jié)論與討論    受試物3.30 g/kg.bw受試組股骨鈣含量、股骨中點(diǎn)密度高于低鈣對(duì)照組(P<0.05)，股骨遠(yuǎn)心端骨密度高于低鈣對(duì)照組(P<0.01)；6.60 g/kg.bw受試組股骨鈣含量與鈣總量、股骨中點(diǎn)和遠(yuǎn)心端密度高于低鈣對(duì)照組(P<

17、0.01)。    除受試物1.65 g/kg.bw受試組股骨鈣總量和6.60 g/kg.bw受試組股骨遠(yuǎn)心端密度高于相應(yīng)劑量的CaCO3對(duì)照組(P<0.05和P<0.01)外，受試物各受試組股骨長(zhǎng)度、干重、鈣含量、鈣總量及中點(diǎn)和遠(yuǎn)心端密度與相應(yīng)劑量的CaCO3對(duì)照組相比，差異均無顯著性(P>0.05)。    受試物1.65，6.60 g/kg.bw受試組鈣表觀吸收率與相應(yīng)劑量的CaCO3對(duì)照組相比，差異分別有顯著性(P<0.05)和極顯著性(P<0.01)。    根據(jù)判

18、定標(biāo)準(zhǔn)3：受試物受試組骨鈣含量或骨密度顯著高于低鈣對(duì)照組，且不低于相應(yīng)劑量的CaCO3對(duì)照組，可判定受試物具有增加骨密度功能的作用；受試物2個(gè)以上受試組鈣的表觀吸收率高于相應(yīng)劑量的CaCO3對(duì)照組，可判定其“鈣吸收率較高”。因而判定該補(bǔ)腎壯骨顆粒的鈣吸收率較高，并具有增加骨密度的功能作用。    卿茂盛等4研究了補(bǔ)腎活血類中藥對(duì)去勢(shì)骨質(zhì)疏松癥的預(yù)防作用，證明能顯著提高脛骨、股骨干骺端的骨密度，能提高骨量。本受試物中的補(bǔ)腎益氣中藥成分，具有調(diào)節(jié)性腺軸的作用， 改善神經(jīng)內(nèi)分泌， 提高體內(nèi)雌激素，從而加強(qiáng)成骨作用，具有延緩和治療骨質(zhì)疏松的作用。    鈣與磷是骨礦物質(zhì)的主要成分，二者在骨骼沉積得愈多，骨骼就愈堅(jiān)實(shí)。其中磷在日常食物里含量比較豐富，極少有磷缺乏問題，因此骨的強(qiáng)度及密度與鈣的含量密切相關(guān)5。本受試物添加了天然鈣源牦牛骨粉，提供充足的鈣元素，鈣磷比例更易于人體吸收，從而增加骨密度，強(qiáng)健骨質(zhì)，預(yù)防骨質(zhì)疏松。    本受試物補(bǔ)腎壯骨顆粒以補(bǔ)肝腎、強(qiáng)筋骨的杜仲葉為君藥，輔以益氣養(yǎng)血成分，調(diào)整下丘腦-垂體-性腺軸，抑制破骨細(xì)胞的同時(shí)促進(jìn)成骨細(xì)胞的生長(zhǎng)，使骨的形成增加，從內(nèi)補(bǔ)骨；同時(shí)，添加牦牛骨粉，其鈣質(zhì)更有利于人體吸收，從外補(bǔ)骨。骨鈣同補(bǔ)，內(nèi)外雙保，均優(yōu)于單純補(bǔ)