1、提RNA，可是電泳后什么條帶都沒有，用的是REDzol，是因為細胞太少了還是別的什么原因，在加了氯仿后沒有出現3層，只有沉淀和上清，是不是因為加氯仿到離心隔的時間太久了？參考見解：1、 樣品量太??；2、 操作時沒有嚴格按照提RNA的要求做，一般需要帶手套，最好帶上口罩，所有塑料用品需要用DEPC處理并高壓，要在超凈臺上操作，盡量不讓外源的RNA酶降解RNA。3、 RNA電泳的電泳液和膠必須現配現用，并且要用DEPC處理，電泳槽、制膠板先用蒸餾水洗滌然后用75的酒精處理，還有，要單獨一個槽子跑，不要和其他膠一起跑。跑膠時間控制在10分鐘左右。4、 在加了氯仿后沒有出現3層，只有沉淀和上清，可能是

2、加的氯仿量不合適，一般是按0.2ml氯仿/mlTrizol加氯仿的。從加氯仿到離心隔的時間對這個應該沒有影響。5、 在提完RNA后可以測OD值，如果OD值在1.8-2.0之間，說明提的RNA比較純。RNA提取可不可以不用DEPC處理，多次滅菌（而不是長時間滅菌）也可以比較有效地滅活RNAse，這種方法確實可行嗎？參考見解：DEPC主要目的是防止RNA酶,其實還有很多其他的方法處理器皿的,如氯仿沖洗,NaOH處理,高溫烘烤等另外兩次滅菌也可以代替DEPC處理.提RNA的關鍵在于：防止內源性或外源性RNase降解RNA對付外源性RNase有兩種辦法：能烤者烤，能泡者泡。比起其他的核酸實驗來說，就多

3、這么一步。其二、RNase分子內部存在二硫鍵，一般條件變性后很快即可復性，所以極為穩定；而且其作用條件“簡單、快捷”與絕大多數DNase不同，不需要二價陽離子即可迅速發揮酶切作用。所以，要想長期保存RNA標本，DEPC處理溶液、Tip頭等都是必不可少的。RNase一般高壓不能滅活，如果不用DEPC的話，快速提取，快速使用，不能貯藏。3個關于乙醇單詞：ethanol；alcohol；mercaptoethanol，他們的主要區別是什么，可以互相代替嗎？參考見解：ethanol是乙醇的專業名詞，是用在醫學，工業等方面，主要是指工業酒精。alcohol也是乙醇，酒精的意思，但是主要是用在飲食行業的名

4、詞。mercaptoethanol 是巰基乙醇，不同于前兩種，是另外一種物質，是一種還原劑。RNA提取中DNA是怎么去掉的？在哪一步呢？參考見解：在加入氯仿離心吸取上清的時候，注意不要吸到中間層。一般都要用DNase處理，即使吸不到中間層，也可能有DNA污染。組織已經低溫保存了一年多了，用來提RNA可以嗎？參考見解：液氮中保存應該可以，但如果是在-70C低溫冰箱中則可能降解，建議在液氮中保存時盡量將組織塊切小，最好直徑在1CM之內，有利于保存并方便下一步RNA提取操作。當然如果條件允許，可以將組織塊放入RNAlater后低溫保存，只要普通冰箱即可，方便且效果很好。提取血細胞的RNA，但血凝很快

5、，應該注意什么問題？是不是要加EDTA？用什么方法會更好？參考見解： 全血提DNA或RNA要用抗凝血，可以用醫院里采血管，里面已經加了抗凝劑，或是自己配EDTA、ACD等來抗凝。EDTA抗凝用2.5%的溶液，與血液之間體積比一般是1:10 。ACD配方：單結晶水檸檬酸 （分子量210.1） 8.0g，檸檬酸三鈉（分子量 294.1） 22.0g，單結晶水D-葡萄糖 （分子量 198.2）24.5g，順次溶于蒸餾水中，定容至1000ml，過濾除菌。分裝后20C保存?？鼓昧馨图毎蛛x液分離，得到單核細胞后，再加入trizol等提取RNA，步驟可按試劑盒操作進行。如果不分離單核細胞，血里面的紅

6、細胞對提取有影響，把紅細胞破壞掉也可以。采用淋巴細胞分離液分離外周血中的有核細胞，經細胞裂解液處理，上清提取RNA，沉淀提取 DNA，用分離液分離所得紅細胞沉淀制備血紅蛋白溶液。本法能從少量外周血中同時分離 RNA、DNA 及血紅蛋白，高效易操作，值得推廣。怎樣能更有效的降低材料的降解？參考見解：1、 新鮮細胞：如果試劑沒有問題，且外源性污染也可以排除，那么降解幾乎都來自裂解液的用量不足。如?果將裂解液直接加入培養皿中裂解細胞，一定要使裂解液能覆蓋住細胞。 2、 新鮮組織：某些富含內源核酸酶的樣品(如肝臟，胸腺等)，即使使用電動勻漿器勻漿也不能避免RNA的降解。更可靠的方法是：在液氮條件下將組

7、織研碎，并且勻漿時使用更多裂解液。3、 冷凍樣品：樣品取材后應立即置于液氮中速凍，然后移至-70冰箱保存。樣品決不能未經液氮速凍而直接保存于-70冰箱中。冷凍樣品，即使是冷凍細胞，如果不在液氮條件下研磨碎，而直接加入裂解液中勻漿，RNA也比新鮮樣品更容易降解。樣品在與裂解液充分接觸前決不能出現融化，所以研磨用具必須預冷，在碾磨過程中要及時補充液氮。樣品研碎后，在液氮剛剛揮發完時，將樣品迅速轉移到含裂解液的容器中，立即混勻勻漿。4、 外源RNA酶的污染：試劑，器械及實驗環境中的RNA酶進入實驗系統。5、 內源RNA酶的污染：抑制劑失效或者用量不夠，實驗樣品過多；勻漿時溫度過高。OD260/OD2

8、80比值偏低？參考見解：1、 蛋白質污染：確保不要吸入中間層及有機相。減少起始樣品量，確保裂解完全、徹底。加入氯仿后首先要充分混勻，并且離心分層的離心力和時間要足夠。如果所得RNA的OD260/OD280比值偏低，則用氯仿重新抽提一次，再沉淀，溶解。2、 苯酚殘留：確保不要吸入中間層及有機相。加入氯仿后首先要充分混勻，并且離心分層的離心力和時間要足夠。3、 多糖或多酚的殘留：一些特殊的組織和植物中，多糖、多酚含量較多，這些殘留也會導致OD260/OD280比值偏低。因此，從這類材料中提取RNA時，需要注意多糖、多酚雜質的去除。4、 設備限制：測定OD260及OD280數值時，要使OD260讀數在0.1-0.5之間。此范圍線性最好。用水稀釋樣品：測OD值時，對照及樣品稀釋液請使用10mM Tris，pH7.5。用水作為稀釋液將導致比值偏低。RNA提取得率低？參考見解：1、 該組織或者細