1、實驗二 斜面接種，用平板劃線法分離菌種與微生物培養 【課前預習】 微生物純種分離有哪些方法？【目的要求】1.懂得微生物接種技術的重要性與應用面；2.正確掌握無菌操作法移接斜面菌種的步驟與方法；3.了解平板劃線法分離菌種的基本原理；4.熟練掌握平板劃線法的操作方法；5.掌握超凈工作臺的使用方法?！净驹怼縩 一、斜面接種與培養基本原理一、斜面接種與培養基本原理n 操作為：用滅菌的接種環取單個菌落或少許細菌，從培養基斜面底部向上劃一條直線，然后從底部向上作連續曲線劃線，一直劃到斜面頂端。n 二、用平板劃線法分離菌種基本原理二、用平板劃線法分離菌種基本原理n 步驟：用接種環在平板培養基表面通過分區

2、劃線而達到純化分離微生物的一種方法。是將微生物樣品在固體培養基表面多次作“由點到線”稀釋而達到分離的目的。用于目的微生物的分離?！緦嶒炗闷贰縩 1. 菌種： 大腸桿菌、金黃色葡萄球菌和枯草芽孢桿菌斜面培養基。n 2. 培養基： 牛肉膏蛋白胨斜面培養基。 n 3. 儀器： 恒溫培養箱，無菌操作臺，高壓蒸汽滅菌器。 n 4. 其它用品： 培養皿（每組4個），無菌水，滅菌棉簽，接種環(25個)，酒精燈（25盞），試管架，記號筆（25支）。【方法步驟】n 一、斜面接種操作步驟n 1.接種前的準備工作n 貼上標簽n 旋松棉塞n 點燃酒精燈n 2.用接種環轉接菌種n 手持試管 n 灼燒接種環圖1 接種環的

3、火焰滅菌步驟【方法步驟】二、平板劃線法操作步驟1.融化培養基：瓊脂培養基放入水浴中加熱至融化。2倒平板3劃線分區4劃線操作【方法步驟】n 拔出棉塞n 管口過火與停留n 取培養物n 接種n 殺滅環上殘留菌n 3培養與觀察n 4培養物后處理n 清洗n 清理桌面【方法步驟】(1) 挑取他含菌樣品：選用平整、圓滑的接種環，按無菌操作法挑取少量菌種。(2) 劃a區a區b區c區d區【方法步驟】4.恒溫培養5.挑單菌落6.清洗培養皿【方法步驟】實驗結果n結果結果n記錄斜面劃線接種后生長的培養物特征（菌名、菌苔特征），并圖示。n菌苔特征描寫方法參考如下： 形態：松針狀，樹枝狀 干濕情況：干燥，濕潤，粘稠 高度

4、：扁平，隆起，凹下實驗結果透明度：透明度，半透明，不透明顏色：黃色，金黃色，灰色，乳白色，紅色，粉紅色，黑色等邊緣：整齊，不整齊接種情況：稀疏、致密、水膜等【注意事項】 n 1.接種前，務必核對菌種和菌株名，防止混淆或錯接菌種。n 2.接種環自菌種管移至待接斜面過程中，切莫接觸其他物品，以免斜面接種污染。n 3.接種環在接種前需用酒精燈進行灼燒，灼燒后必須等接種環完全冷卻后，才能進行接種，以防止所接菌種失活。n 4.劃線時，環口與平板間的夾角不宜太大，動作要輕巧，以防劃破平板。n 5.用于劃線的平板，在倒平板的時候不能倒得太薄，最好在使用前一天倒好。為防止平板表面產生冷凝水，倒平板時，培養基溫度不要太高?！咀⒁馐马棥?n 6.分段劃線時，在每次劃線后，都需將接種環進行灼燒，待冷卻后再進行下一次劃線。n 7.接種前，務必核對菌種和菌株名，防止混淆或錯接菌種。n 8.接種環自菌種管移至待接斜面過程中，切莫接觸其他物品，以免斜面接種污染。n 9.接種環在接種前需用酒精燈進行灼燒，灼燒后必須等接種環完全冷卻后，才能進行接種，以防止所接菌種失活。實驗思考n （1）接種時可否將棉塞放在桌上？菌種管和待接種新鮮斜面試管可否平放在桌面上？為什么？n （2）為了防止斜面接種時避免雜菌污染，在操作中應注意哪些問題？n （3）用平板劃線法進行純種分離