1、繼發性紅細胞增多癥動物模型的建立有臨床研究證實，各種繼發性紅細胞增多癥的發生大多與血清紅細胞生成素（Epo）水平異常升高有關1。據此，我們利用注射外源性Epo的方法，建立大鼠繼發性紅細胞增多癥模型。為研究此病提供一種簡便、準確的動物模型。 材料和方法1實驗材料1.1實驗動物：中國藥品生物制品檢定所提供近交系級Wistar大鼠，雌、雄性各半，3月齡，體重(25050)g。北京友誼醫院級動物室飼養。1.2試劑：Epo(美國Angen公司出品)。2實驗方法2.1實驗動物分組：大鼠48只，38只為模型組，10只為正常對照組。2.2用藥方法：劑量：全量每次75IU/250g體重，維持量每次40IU/25

2、0g體重（根據成人劑量每次3000IU/70kg體重的4倍，換算成大鼠每次注射劑量）。注射時間：第1，2，3，4，6，8，10，13天注射全量；第16，19天注射維持量，此后停止注射。對照組同上時間注射等量注射用水。注射部位：腹腔內。2.3血液學檢測：注射當日及注射后第2第16天隔日取血，第17第35天每5d取血。測血紅蛋白，血細胞比容，紅細胞、白細胞、血小板計數。取血方式：斷尾取血。對照組僅取實驗前和處死時兩次。2.4放免方法測定血清Epo水平。大鼠Epo正常參考值13.1IU/L（1116IU/L）2。均于處死時留血標本。2.5病理學檢查：對照組10只與模型組28只在成模時一次性處死，對比

3、成模前后變化。取肝、腎、脾、骨髓標本，稱重后用體積分數為10%的甲醛固定。石蠟切片、蘇木素伊紅染色，光鏡下病理檢查。模型組另10只采取階梯式處死方式，每一觀察點每次處死2只大鼠，用于動態觀察各臟器及骨髓動態病理改變。3結果判斷標準根據大鼠正常血細胞生理參數3，參照人紅細胞增多癥診斷標準4以及PTE診斷標準5設定大鼠紅細胞增多癥診斷標準。3.1主要指標：血紅蛋白高于正常均值(150g/L)，血細胞比容高于0.50，骨髓紅系統增生活躍，Epo水平超過正常。3.2參考指標：紅細胞計數正常水平10%，無導致缺氧的情況，非脫水狀態。4統計學處理t檢驗，直線相關分析。結果1模型完成時間實驗周期分為造模、成

4、模和回復3個階段。本組實驗共用5周完成。第1第8天為造模階段。平均9.2d成模，繼續用藥穩定模型可維持10.5d。停止注射Epo后第10第14天外周血象逐步回復正常。此前預實驗顯示，成模后如繼續注射Epo，模型可繼續保持穩定。表1實驗動物在實驗不同時間外周血象的變化(s)組別鼠數Hb(g/L)0d10d17d35d實驗組381531318818186151454對照組1015417157141552114911P值0.050.0010.05組別鼠數HCT0d10d17d35d實驗組380.400.060.500.090.570.040.410.04對照組100.400.050.400.050.

5、390.070.390.04P值0.050.0010.05組別鼠數RBC(1012/L)0d10d17d35d實驗組37.80.9對照組6.91.8P值0.050.0010.102外周血象改變2.1血紅蛋白：如表1所示。實驗前Hb均值153g/L。實驗第8天Hb平均值174g/L。第10天達到最高點，為188g/L，達到紅細胞增多癥標準（P0.0001）。實驗第9第18天Hb維持在18.0g/L以上。與對照組相比，第0天和第35天時差異無統計學意義(P0.05)，第10和第17天差異有統計學意義(P0.05)，第10

6、天和第17天HCT升高，差異有統計學意義(P0.001)。2.3紅細胞計數：實驗前紅細胞均值6.71012/L。第10天8.541012/L，達到診斷標準。第9第14基本持續這一水平。與對照組相比，第0天和第35天時差異無統計學意義(P0.005)，第10天和第17天紅細胞計數值升高，差異有統計學意義(P0.001)。2.4白細胞與血小板計數：成模時分別達19.27109/L和598109/L，成模前后差異無顯著性（P=0.25，P=0.72）。符合繼發性紅細胞增多癥時白細胞和血小板計數不超過正常的臨床特征。2.5模型組紅系三項指標變化與對照組差異均有顯著性（血紅蛋白：P=0.0001；血細胞

7、比容：P=0.002；紅細胞計數：P=0.0001）,結果符合紅細胞增多癥診斷標準。3血清Epo水平在每一觀察點階梯式處死實驗組大鼠時取血測定血清Epo水平。測定結果顯示，隨注射次數增加，體內Epo水平逐步升高，外周血紅系三項指標隨之升高；當Epo注射減少，外周血紅系三項指標也隨之下降。4脾及骨髓病理變化造血程度分3個階段改變。實驗第2第6天為第1階段，可見脾及骨髓造血呈現活躍狀態，粒、紅、巨三系細胞均較正常增多；脾臟有少量含鐵血黃素沉著()(+)。第9第13天為第2階段，造血更現活躍，進入高峰期；脾臟表現為血竇充血，淋巴小結不明顯，粒、巨、紅三系造血細胞均明顯增多，含鐵血黃素沉著增多(+)(

8、+)；骨髓表現為增生活躍，乃至極度活躍，幾乎見不到脂肪細胞。第16第33天為第3階段，脾臟造血雖仍明顯活躍，但較前兩階段有所減緩，含鐵血黃素沉著明顯(+)(+)；骨髓增生仍非常活躍并可見少量含鐵血黃素沉著。整個造模過程中可見到在Epo刺激下骨髓和脾臟造血增生活躍的動態改變。上述變化證明正常大鼠的造血器官骨髓和脾臟對Epo作用反應敏感，尤以骨髓造血更顯敏感，造血程度的改變與注射Epo的劑量成正比。實驗不同時間動物脾臟和肝臟重量在成模時略有增加，體重與正常對照組的差異無顯著性（P0.05）。這一結果表明，各組動物在同樣飼養、實驗條件下，兩組的全身血漿容量基本一致。 討論利用外源性Epo建立紅細胞增

9、多癥動物模型，可以達到紅細胞增多癥的病理狀態。1本模型的優點：模型成模后，血液學檢驗和病理改變與臨床患者病變過程相似。模型穩定，制作過程簡單易行，重復性強。由于制模采用藥物注射，動物各臟器沒有缺氧損傷，并可根據實驗要求維持長時間穩定狀態。與采用低壓缺氧制作動物紅細胞增多癥模型的方式比較，可避免因缺氧而導致其他器官和組織的病理過程而影響實驗結果。2本模型的意義：建立無缺氧紅細胞增多癥動物模型，為進一步研究探討紅細胞增多癥提供與臨床更接近、更理想的動物模型。可在非缺氧狀態下觀察紅細胞增多癥時骨髓、外周血及有關臟器的病理改變過程，沒有缺氧造成的影響。目前國內外較少關于治療前后患者骨髓改變情況的報道，

10、本模型可提供動態骨髓病理變化。病理實驗結果與作者臨床上遇到的患者骨髓變化十分相近。觀察各種不同治療方法的療效及優缺點，為臨床提供治療依據。為進一步研究新藥藥理提供動物模型。可作為藥效學、藥理學、治療學和病理學實驗研究的基礎工具。基金項目：北京市中醫藥管理局資助項目（JX9517）作者單位：馬麟麟（100050北京，首都醫科大學附屬友誼醫院泌尿科）張玉海（100050北京，首都醫科大學附屬友誼醫院泌尿科）劉利（100050北京，首都醫科大學附屬友誼醫院泌尿科）楊宇飛（中國中醫研究院西苑醫院腫瘤科）周靄祥（中國中醫研究院西苑醫院腫瘤科）應紅光（中國醫學科學院、中國協和醫科大學血液學研究所）參考文獻

11、1，Oymak O,Demiroglu H,Akpolat T, et al. Increased erythropoietic response to venesection in erythrocytosis renal transplant patients.Int Uro Nephrol,1995，27:223-227.2，Hamilton DL, Cotes PM. The effect of bilateral removal of the submandibular salivary glands on the erythropoietic response of mice. Exp Hematol, 1993, 21:656-659.3，苗三明,主編. 實驗動物和動物實驗技術. 第1版. 北京：中國中醫藥出版社，1997.4，張之南，沈悌，主編. 血液病診斷及療效標準. 第2版. 北京：科學出版社，1997.5，