1、課程編號： 開課對象：生物科學(xué)專業(yè) 英文名稱：08207017學(xué)時(shí)： 51學(xué)分： 1.5B教學(xué)大綱課程類別：專業(yè)必修BasicBiologyExperimentsB一、課程任務(wù)、目的生物化學(xué)是四年制本科生物專業(yè)開設(shè)的一門專業(yè)基礎(chǔ)課，其中生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)是重要環(huán)節(jié)。本實(shí)驗(yàn)課程通過生物化學(xué)分離、制備、分析、鑒定等實(shí)驗(yàn)（如滴定、比色、層析、電泳等），加強(qiáng)對學(xué)生基本技能的訓(xùn)練。同時(shí)要求學(xué)生了解掌握一些生化研究的理論和技術(shù)，為進(jìn)入生命科學(xué)各分支學(xué)科的研究鄰域打下基礎(chǔ)。二、課程內(nèi)容與基本要求甲醛滴定法測定氨基氮一、目的要求：初步掌握甲醛滴定法測定氨基酸含量的原理和操作要點(diǎn)二、器材：滴定管、吸量管、試管三、內(nèi)容

2、與方法：1 、滴定標(biāo)準(zhǔn)甘氨酸，計(jì)算氨基氮回收率2 、滴定未知濃度甘氨酸，計(jì)算氨基氮3 、計(jì)算未知甘氨酸濃度實(shí)驗(yàn)二考馬斯亮藍(lán)染色法測蛋白質(zhì)含量一、目的要求學(xué)習(xí)和掌握考馬斯亮藍(lán)G-250法測蛋白質(zhì)含量的原理和方法。進(jìn)一步掌握721型分光光度計(jì)的使用方法和原理。二、器材：721型分光光度計(jì)離心機(jī)研缽容量瓶刻度吸管試管內(nèi)容與方法1 、制備樣品溶液2 、制作標(biāo)準(zhǔn)曲線3 、測定血清蛋白醋酸纖維薄膜電泳、目的要求：學(xué)習(xí)醋酸纖維薄膜電泳的操作，了解電泳技術(shù)的一般原理。二、器材：穩(wěn)流穩(wěn)壓電泳儀、水平電泳槽、醋酸纖維薄膜、鑷子、白瓷反應(yīng)板、大培養(yǎng)皿三、內(nèi)容與方法：1 、浸泡薄膜2 、點(diǎn)樣3 、電泳4、染色5 、漂

3、洗實(shí)驗(yàn)四凱氏定氮法測定總氮量一、目的要求：學(xué)習(xí)凱氏定氮法的原理和操作技術(shù)。二、器材：凱氏定氮儀、電爐、消化燒瓶、滴定管、吸量管三、內(nèi)容與方法：6 、消化7 、蒸餾8 、滴定實(shí)驗(yàn)五Folin酚法測蛋白質(zhì)濃度一、目的要求：掌握Folin酚法測蛋白質(zhì)濃度的原理和方法，學(xué)習(xí)標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備。二、器材：試管、試管架、吸量管、恒溫水浴鍋、721分光光度計(jì)三、內(nèi)容與方法：1 、制備標(biāo)準(zhǔn)曲線（蛋白質(zhì)濃度與反應(yīng)生成的藍(lán)色物質(zhì)的光吸收值的關(guān)系曲線）2 、未知濃度的蛋白與Folin酚試劑反應(yīng)，測出蘭色物質(zhì)光吸收值3 、從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出對應(yīng)蛋白濃度實(shí)驗(yàn)六苯丙氨酸聚氨酶（PAL.）活力和比活力測定一、目的要求1 、學(xué)習(xí)一

4、種常用的酶活力測定法，并與前面學(xué)過的二種酶活力測定法相比較；2 、掌握苯丙氨酸解氨酶活力與比活力測定的原理與方法，為后面該酶分離純化的實(shí)驗(yàn)中測活力與比活力所需要；3 、了解紫外分光光度計(jì)及其使用。二、器材：電子天平高速冷凍離心機(jī)恒溫水浴紫外分光光度計(jì)721分光光度計(jì)剪刀研缽試管刻度小試管塑料離心管刻度吸管燒杯內(nèi)容與方法1、提取酶液2、酶活力測定3、蛋白質(zhì)含量測定4、計(jì)算實(shí)驗(yàn)七硫酸銨分級沉淀分離苯丙氨酸解氨酶、目的要求了解硫酸銨沉淀蛋白質(zhì)的原理，掌握分級沉淀分離酶的基本操作和方法。、器材天平冷凍離心機(jī)恒溫水浴紫外分光光度計(jì)鐘表冰浴試管燒杯玻棒刻度吸管研缽剪刀量筒離心管內(nèi)容與方法1 、酶液提取2

5、、硫酸銨分級沉淀3、沉淀樣品溶解4、酶活力測定實(shí)驗(yàn)八凝膠層析純化苯丙氨酸解氨酶一、目的要求掌握葡聚糖凝膠柱層析法脫鹽的原理和基本操作方法，分離上一個(gè)實(shí)驗(yàn)所得沉淀液中的酶蛋白和硫酸銨。二、器材層析柱紫外分光光度計(jì)721分光光度計(jì)恒溫水浴鐘或手表刻度吸管刻度試管試管滴管三、內(nèi)容與方法1、層析脫鹽：凝膠溶脹，灌膠，層析，收集2、酶活力測定3、蛋白質(zhì)含量測定實(shí)驗(yàn)九過氧化物酶活力測定一、目的要求：了解酶活力、比活力概念，通過測定過氧化物酶活力，掌握酶活力測定的一般方法。二、器材：天平、研缽、離心機(jī)、試管、量筒、恒溫水浴鍋、721分光光度計(jì)三、內(nèi)容與方法：1 、酶液制備（植物樣品在酶抽提液中磨成勻漿，取清

6、液）2 、酶活力測定（愈創(chuàng)木酚溶液中加入一定量酶液，再加入過氧化氫溶液，迅速混勻并測定）實(shí)驗(yàn)十聚丙烯酰胺凝膠電泳分析過氧化物酶同工酶一、目的要求1 、學(xué)習(xí)聚丙烯酰胺凝膠電泳的原理。2 、學(xué)習(xí)聚丙烯酰胺凝膠電泳的操作技術(shù)。二、器材電泳儀一套（包括穩(wěn)壓電源及垂直電泳槽）高速離心機(jī)真空泵及抽濾器烘箱（或培養(yǎng)箱）細(xì)玻管及玻璃架研缽注射器培養(yǎng)皿燒杯橡皮膏、剪刀等三、內(nèi)容與方法1、樣品制備2、凝膠制備3、裝槽4、點(diǎn)樣5、電泳6、取膠7、染色實(shí)驗(yàn)十一底物濃度對酶促反應(yīng)影響一、目的要求：了解米氏常數(shù)意義，學(xué)習(xí)測定米氏常數(shù)的原理和方法。二、器材：錐形瓶、吸量管、滴定管、量筒三、內(nèi)容與方法：1 、磷酸緩沖液配制（

7、pH7.0,0.2M）2 、KMNO4濃度標(biāo)定3 、H2O2濃度的標(biāo)定4 、H2O2酶制備5 、反應(yīng)速度測定6 、關(guān)系曲線制作7 、求出Km實(shí)驗(yàn)十二血清膽固醇的測定一、目的要求：了解掌握測定膽固醇的原理和方法二、器材：試管、試管架、容量瓶、吸量管、離心機(jī)、分光光度計(jì)三、內(nèi)容與方法：8 、血清經(jīng)無水乙醇處理，使蛋白沉淀9 、設(shè)置膽固醇標(biāo)準(zhǔn)管、樣品管，分別與磷硫鐵試劑反應(yīng)，測定A56010 、計(jì)算血清蛋固醇含量實(shí)驗(yàn)十三還原糖和總糖的測定一、目的要求：11 3.5一二硝基水楊酸化色法測定糖原理，掌握還原糖及總糖定量測定的操作方法。二、器材：天平、燒杯、離心機(jī)、容量瓶、恒溫水浴鍋、白瓷板、分光光度計(jì)三

8、、內(nèi)容與方法：1 、面粉樣品中還原糖提取（水溶解法）2 、面粉樣品中總糖的提取（沸水溶中酸水解）3 、標(biāo)準(zhǔn)曲線制備4、樣品待測液的測定5、標(biāo)準(zhǔn)曲線上查找相應(yīng)糖含量實(shí)驗(yàn)十四、油料作物脂肪抽提和含量測定一、目的要求學(xué)習(xí)脂肪的提取和測定方法二、器材索氏脂肪抽提器（一套），分析天平，恒溫水浴鍋，烘箱，干燥器。三、內(nèi)容與方法1、樣品烘干、磨碎2、濾紙包好樣品3、抽提4、烘干稱重實(shí)驗(yàn)十五水果中維生素C的測定、目的要求:了解一種維生素C的測定方法和原理。二、器材：研缽、試管、離心機(jī)、721分光光度計(jì)三、內(nèi)容與方法：1、水果中維生素C提取2、標(biāo)準(zhǔn)曲線制作及樣品測定實(shí)驗(yàn)十六酵母RNA的提取及鑒定一、目的要求了解

9、核酸的組分，并掌握鑒定核酸組分的方法。二、器材1、乳缽2、 150ml錐形瓶3、恒溫水浴箔4、量簡5、布氏漏斗及抽濾瓶6、吸管7、滴管8、試管及試管架9、燒杯10、離心機(jī)11、漏斗三、內(nèi)容與方法1、RNA提取，干燥2、嘌呤堿、核糖、磷酸等的鑒定實(shí)驗(yàn)十七定磷法測定核酸濃度一、目的要求掌握利用核酸定磷測定法測定核酸的含量。二、器材分析天平，722型分光光度計(jì)，恒溫水浴，200恒溫烘箱或萬用電爐，移液管，凱氏燒瓶4個(gè)，燒杯，容量瓶，培養(yǎng)皿一個(gè)，稱量并S一個(gè)，干燥器，試管20mIX20,離心管4個(gè)水浴鍋1個(gè),藥勺1個(gè)。三、內(nèi)容與方法1 、樣品的消化2 、用標(biāo)準(zhǔn)磷溶液制作標(biāo)準(zhǔn)曲線3 、總磷量的測定4、無

10、機(jī)磷測定5 、計(jì)算實(shí)驗(yàn)十八脫氧核糖核酸的瓊脂糖凝膠電泳一、目的要求1、掌握瓊脂糖凝膠電泳分離DNA的原理和方法。2、學(xué)習(xí)利用瓊脂糖膠電泳方法測定DNA片段大小。3、學(xué)習(xí)有關(guān)建立DNA艮制性內(nèi)切酶圖譜的基本技術(shù)。二、器材,電泳樣品槽Eppendorf離心管（1.5ml，經(jīng)消毒），電泳槽，電泳儀，凝膠塑料托盤模板（梳子），錐形瓶（100ml），小燒杯（50，100，250ml），橡皮膏，電熱恒溫箱，玻璃紙。三、內(nèi)容與方法1、DNA的酶解4 、凝膠的制備5 、點(diǎn)樣4、電泳6 、染色7 、觀察實(shí)驗(yàn)十九紙層析法分析生物體內(nèi)的轉(zhuǎn)氨反應(yīng)一、目的要求1、掌握紙層析法基本原理和操作方法。2、利用紙層析法分離氨基

11、酸，進(jìn)而了解生物體內(nèi)的轉(zhuǎn)氨基作用。二、器材（ 1）研缽（ 2）試管及小離心管10ml*4（ 3）天平（ 4）刻度吸管1ml*82ml*2（ 5）離心機(jī)（ 6）恒溫水浴（370C）（ 7）沸水浴（ 8）層析紙、鉛筆、小尺（ 9）毛細(xì)管（ 10）電吹風(fēng)機(jī)（ 11）訂書機(jī)（ 12）層析缸、培養(yǎng)皿（ 13）噴霧器三、內(nèi)容與方法1、酶液的制備2、轉(zhuǎn)氨反應(yīng)3、裁紙4、點(diǎn)樣5、擴(kuò)展6、顯色7、計(jì)算三、課程難點(diǎn)與重點(diǎn)生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)內(nèi)容較為復(fù)雜，操作要求高，所需時(shí)間長，應(yīng)成分調(diào)動學(xué)生的積極性。四、實(shí)踐環(huán)節(jié)及基本要求各實(shí)驗(yàn)盡量采用學(xué)生較為熟悉的材料，用生產(chǎn)實(shí)踐和各研究領(lǐng)域常用的實(shí)驗(yàn)方法和技術(shù)。五、對學(xué)生能力培養(yǎng)的要

12、求通過生物化學(xué)分離、制備、分析、鑒定等實(shí)驗(yàn)（如滴定、比色、層析、電泳等），加強(qiáng)對學(xué)生基本技能的訓(xùn)練，培養(yǎng)學(xué)生創(chuàng)造性思維能力。了解掌握一些生化研究的理論和技術(shù)，為進(jìn)入生命科學(xué)各分支學(xué)科的研究鄰域打下基礎(chǔ)。六、學(xué)時(shí)分配（總學(xué)時(shí)數(shù)為51,包括實(shí)驗(yàn)理論部分、6個(gè)必做實(shí)驗(yàn)和34個(gè)選做實(shí)驗(yàn)）1、實(shí)驗(yàn)理論部分（總14學(xué)時(shí)），包括：電泳技術(shù)（5學(xué)時(shí)），層析技術(shù)（4學(xué)時(shí)），核酸研究方法（5學(xué)時(shí)）。2、必做實(shí)驗(yàn)（總學(xué)時(shí)為25）序號實(shí)驗(yàn)內(nèi)容學(xué)時(shí)數(shù)1Folin酚法測蛋白質(zhì)濃度32苯丙氨酸解氨酶（PAD活力和比活力測定43過氧化物酶活力測定44過氧化物酶同工酶聚丙烯酰胺凝膠電泳85r面粉中還原糖和總糖的測定36酵母核糖核酸的提取和組分鑒定33、選做實(shí)驗(yàn)（選做下列實(shí)驗(yàn)中的34個(gè)，完成12學(xué)時(shí)的實(shí)驗(yàn)內(nèi)容）序號實(shí)驗(yàn)內(nèi)容學(xué)時(shí)數(shù)1:甲醛滴定法測定氨基氮32考馬斯亮藍(lán)染色法測定蛋白質(zhì)含量33硫酸錢分級沉淀分離聚丙氨酸解氨酶64r凝膠層析法純化苯丙氨酸解氨酶65r底物濃度對酶促反應(yīng)速度的影響66血清膽固醇的測定37粗脂肪的提取和定量測定38P水果（蔬菜）中Vc含量