1、    納洛酮對(duì)缺血再灌注心肌c-fos基因表達(dá)的影響        摘要目的：研究納洛酮對(duì)心肌缺血再灌注損傷的影響，從分子水平探討心肌缺血再灌注損傷的保護(hù)機(jī)制。方法：30只大白兔隨機(jī)分為三組：（1）對(duì)照組；（2）心肌缺血30分鐘再灌30分鐘組；（3）靜注納洛酮10分鐘后缺血30分鐘再灌30分鐘組。提取心肌總RNA與經(jīng)同位素標(biāo)記的c-fos cDNA探針進(jìn)行分子雜交并自顯影，測定c-fos基因mRNA水平。結(jié)果：納洛酮能顯著抑制心肌缺血再灌注時(shí)c-fos基因的表達(dá)。結(jié)論：納洛

2、酮可能具有全心缺血再灌注損傷的分子保護(hù)作用。關(guān)鍵詞心肌缺血再灌注c-fos基因納洛酮 Effects of Naloxone on Expression of c-fos Gene during Global Myocardial Ischemia-reperfusionZhang Chi，Wan Hong，Wan Dening(Department of Anesthesiology，Shenzhen East Lake Hospital，Shenzhen 518020)AbstractObjective：To observe the effects of naloxone on expre

3、ssion of c-fos gene during global myocardial ischemia-reperfusionMethods：30 rabbits were randomly divided into control group，IR group（ischemic 30min-reperfusion 30min） and NAL group （naloxone was injected before IR）Total cellular RNA was isolated after 30min of ischemia and reperfusionOptical densit

4、y（OD） value was measuredResults：OD values decreased more in NAL group than that in IR groupConclusion：Naloxone depresses effectively the expression of c-fos geneIn the molecular modulation，naloxone may protect myocardium from ischemia-reperfusion injuryKey wordsMyocardial protectionIschemia-reperfus

5、ion injuryc-fos geneNaloxone心肌缺血再灌注損傷機(jī)制較復(fù)雜。有研究表明，c-fos基因可能參與心肌缺血再灌注損傷1。納洛酮（Nal）對(duì)缺血再灌性心律失常有防治作用2，還能改善心肌的收縮和舒張性功能，對(duì)心肌有保護(hù)作用3。本文利用離體兔心臟灌注模型，觀察納洛酮對(duì)心肌缺血再灌注時(shí)c-fos基因表達(dá)的影響，研究納洛酮、心肌缺血再灌注損傷及c-fos基因之間的關(guān)系，從而探討納洛酮抗心肌缺血再灌注損傷的可能機(jī)制。材料與方法模型制備實(shí)驗(yàn)用大白兔30只，雌雄不限，體重450500g，3戊巴比妥鈉（3035mgkg）腹腔注入，麻醉后先將心臟離體，迅速于4生理鹽水中行主動(dòng)脈插管并與灌注裝

6、置連接，Langendorff灌注15分鐘（灌注液為Krebs-Henseleit液，經(jīng)95O2和5CO2混合氣體平衡，pH7.357.45），然后灌注Thomas液使心臟停跳。缺血30分鐘后恢復(fù)Langendorff灌注30分鐘，灌注液仍為K-H液。將標(biāo)本迅速置于40保存?zhèn)溆谩?shí)驗(yàn)分組30只大白兔隨機(jī)分成三組，每組10只。對(duì)照組（C組）：預(yù)灌15分鐘后再繼續(xù)灌注30分鐘。缺血再灌注組（IR組）：預(yù)灌15分鐘后，停灌30分鐘，再復(fù)灌30分鐘。納洛酮組（NAL組）：心臟離體前10分鐘靜注Nal1mgkg，余皆同IR組。組織總RNA提取，雜交及放射自顯影采用異硫氰酸胍-酚氯仿一步法4，提取RNA，

7、然后與經(jīng)同位素標(biāo)記的c-fos cDNA探針進(jìn)行打點(diǎn)雜交。雜交膜于40自顯影7天后用IBAS系統(tǒng)處理，得出每個(gè)c-fos雜交點(diǎn)的積分光密度值（optical density，OD）。統(tǒng)計(jì)分析實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以±s表示，采用方差分析和q檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。P0.05有顯著性差異。結(jié)果心肌缺血30分鐘再灌30分鐘后心肌細(xì)胞c-fos基因表達(dá)明顯增加，IR組OD值（11.855±1.257）比N組顯著增高（P0.01）。納洛酮預(yù)處理對(duì)心肌缺血再灌注c-fos基因表達(dá)有明顯抑制作用，NAL組與IR組相比，有顯著性差異（P0.01），與對(duì)照組相比無顯著性差異（P0.05）（表1）。討論資料顯

8、示，在心肌局部或全心缺血再灌注時(shí)c-fos基因能快速、早期表達(dá)1，與鈣離子、IP3、cAMP等第二信使有密切關(guān)系。c-fos基因的表達(dá)產(chǎn)物FOS蛋白與c-jun基因的蛋白產(chǎn)物JUN形成異源二聚體，作用于DNA特殊序列，調(diào)節(jié)相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄，發(fā)揮第三信使作用。表1各組心肌c-fos基因mRNA點(diǎn)雜交OD值組別例數(shù)OD值C101.842±0.063?IR1011.855±1.257NAL102.570±0.416?與IR組比較，?P0.01 Brand1等人發(fā)現(xiàn)將動(dòng)物冠狀動(dòng)脈左前降支阻斷10分鐘，缺血區(qū)中c-fos基因即被誘導(dǎo)表達(dá)，為對(duì)照組3.6倍。而其他學(xué)者也發(fā)現(xiàn)，在

9、心肌缺血14小時(shí)內(nèi)，c-fos基因表達(dá)達(dá)到高峰，隨后逐漸下降。另有學(xué)者發(fā)現(xiàn)，反復(fù)多次缺血再灌注比短時(shí)間單次缺血再灌注更能誘導(dǎo)c-fos基因大量表達(dá)4。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，離體心肌在缺血再灌注過程中c-fos基因表達(dá)明顯增強(qiáng)，提示c-fos基因可能參與了心肌缺血再灌注過程。c-fos基因含有DNA依賴的RNA多聚酶催化的轉(zhuǎn)錄啟動(dòng)信號(hào)和多腺苷化信號(hào)，包括鈣離子在內(nèi)的上述第二信使進(jìn)入細(xì)胞核后，通過作用于c-fos基因5端的調(diào)節(jié)成分誘導(dǎo)其轉(zhuǎn)錄mRNA。阿片受體拮抗藥納洛酮可增加冠脈血流量，降低心肌cAMP和Ca2含量，Ca2內(nèi)流減少，可促進(jìn)細(xì)胞膜的穩(wěn)定性，從而限制缺血再灌注心肌釋放去甲腎上腺素，并且通過抑

10、制黃嘌呤氧化酶的形成，減少再灌注氧自由基的生成5。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，納洛酮抑制了心肌細(xì)胞c-fos基因的表達(dá)，可能正是通過以上機(jī)制而發(fā)揮對(duì)抗心肌缺血再灌注損傷的作用。張赤（深圳市東湖醫(yī)院麻醉科518020）萬紅（湖北醫(yī)科大學(xué)附一院麻醉科）萬德寧（湖北醫(yī)科大學(xué)附二院麻醉科）王焱林（湖北醫(yī)科大學(xué)附二院麻醉科）參考文獻(xiàn)1，Brand T，Hari SProto-expression in porcine myocardium subjected to ischemia and reperfusionCirc Res，1992，7113512，F(xiàn)agbemi O，Lepran I，Parratt JRN

11、aloxone inhibits early arrhythmias resulting from acute coronary ligationBr J Pharmacol，1982，765043，Zhan ZY，Lee AY，Wong TMNaloxone blocks the cardiac effects of myocardial ischemia and reperfusion in the rat isolated heartClin Exp Pharmacol Physiol，1985，123734，Webster KA，Discher DJInduction and nuclear accumulation of fos and jun proto-onco