1、高脂血癥患者血清抵抗素水平及與補體調節蛋白CD55、CD59表達的關系               作者：王燕炯劉永銘滕永軍嚴祥楊正方劉彩成 【摘要】  目的 觀察高脂血癥患者血清抵抗素與補體調節蛋白的表達的關系。方法 高脂血癥患者例，年齡、性別、體重與其匹配的健康對照例，使用酶聯免疫法測定空腹血清抵抗素濃度，使用流式細胞儀測定外周血白細胞、的表達。結果 高脂血癥患者空腹血清抵抗素濃度較正常對照增高(P005)，女性血清抵抗素濃度高于男性(P005)，抵抗

2、素與血清總膽固醇明顯正相關(r=0297，P005)，與體重指數、腰臀比、血糖均無相關性，與補體調節蛋白CD55、CD59陽性細胞平均熒光強度及百分率亦無相關性。多元回歸分析腰臀比是CD55陽性淋巴細胞平均熒光強度的獨立預測因子，腰圍是CD55陽性單核細胞百分率的獨立預測因子。結論 高脂血癥患者空腹血清抵抗素濃度增高，有性別差異，且與血清總膽固醇明顯正相關，提示抵抗素可能參與脂代謝紊亂。高脂血癥者補體調節蛋白表達下調，且與腰臀比、腰圍密切負相關，提示肥胖，特別是中心型肥胖可影響補體調節蛋白的表達。空腹血清抵抗素與補體調節蛋白CD55、CD59表達無相關性，是否有其他脂肪細胞因子參與影響補體調節

3、蛋白的表達有待進一步研究。 【關鍵詞】  高脂血癥；抵抗素；補體調節蛋白CD55、CD59動脈粥樣硬化(AS)是一種慢性炎癥1。 補體系統參與了AS的發生、發展 2。近幾年研究表明抵抗素與炎癥及AS的發生發展也存在一定聯系。高脂血癥是AS的重要危險因素。我們在近幾年的研究中發現高脂血癥患者CD55表達下調，CD55與腰圍、 腰臀比值呈負相關3。提示脂肪因子可能參與CD55表達的調節，CD55表達下調降低組織細胞對補體活化的抑制，可加重炎癥反應。脂肪組織是否通過影響補體系統而參與AS，目前尚不清楚。本文通過高脂血癥患者抵抗素表達及其與補體調節蛋白關系研究，進一步探討抵抗素是否參與脂代謝

4、及其是否通過參與補體系統而影響AS的發生、發展。1 資料與方法11研究對象      高脂血癥患者50例，為2005年6月2006年1月門診及住院患者，其中高膽固醇血癥22例，混合型高脂血癥15例，高甘油三酯血癥13 例，男25例，女25 例。年齡、性別、身高、體重相匹配的健康人21例作為對照組。入選標準：高脂血癥診斷標準參照1997年我國制訂的血脂異常防治建議，血清總膽固醇(TC) 572 mmol/L 和(或)甘油三酯(TG) 170 mmol/L 作為入選條件。不同日期血脂達上述標準2次以上可入選。排除標準：肝腎疾病、甲狀腺功能

5、低下等引起的繼發性高脂血癥；有明確自身免疫性疾病者；1個月內有嚴重感染、手術和外傷史；慢性感染性疾病患者；急性冠狀動脈綜合征患者、半年內有急性心肌梗死或腦卒中病史者；嚴重肝腎功能不全、惡性腫瘤患者；就診時已使用他汀類藥物治療者（但不包括曾使用汀類藥物而在就診時已自動停藥2個月以上者）。12 標本的采集與處理      空腹12 h以上，取肘靜脈血，分離血清，當日送檢血脂及補體調節蛋白，其余血清置-80冰箱保存以備測定血清抵抗素。記錄入選對象的年齡、身高、體重、腰圍、臀圍、血壓、腰/ 臀比值,通過公式計算。體重指數(BMI) = 體重/

6、身高2（kg/m2) 。13 實驗室方法131 血脂檢測      采用酶法，使用美國Beckman Coulter公司LX20 全自動生化分析儀測定。TC 采用CHODPAP 法，測定值批內變異系數(CV) 30%，批間變異系數 45%。甘油三酯( TG) 采用GPOPAP 法，測定值批內變異系數 25%，批間變異系數 30%。TC、TG試劑購自廣州標佳科技有限公司。低密度脂蛋白膽固醇(LDLC) 采用直接法，測定值批內及批間變異系數均 50%，試劑購自美國Gcell 公司。高密度脂蛋白膽固醇(HDLC) 采用直接法,測定值批內變異

7、系數 40%，批間變異系數50%，試劑購自英國Randox 公司。高脂血癥患者血脂水平檢測應有二次結果方可確診。132 血清抵抗素檢測      受試者空腹血清測定。采用酶聯免疫法，試劑購自美國R&D公司，批號：228881，批內變異系數53%，批間變異系數92%，最小測定值:0026 ng/ml。133 白細胞補體調節蛋白檢測      采用全血流式法。空腹取肘靜脈血2 ml，置含依地酸二鈉的真空采血器，取血后30 min 內開始測定。將鼠抗入CD55PE、CD59

8、FITC 單克隆抗體及陰性對照抗體10 l 分別加入標記的試管中，每管中加入100l新鮮抗凝全血，震蕩混勻后室溫避光反應15 min，然后用全自動全血細胞制備儀裂解紅細胞，最后用流式細胞儀檢測CD 分子平均熒光強度及陽性細胞百分率。流式細胞儀為美國CoulterEPICSXL型，補體調節蛋白CD55、CD59 單抗購自美國Caltag Laboratories公司。14 統計學處理      采用SPSS100統計軟件進行統計分析。計量資料用x±s表示，兩組間比較用獨立樣本t檢驗，指標間的關系用直線相關分析、偏相關及多元回歸

9、分析。2 結果21 臨床資料      高脂血癥組腰圍、腰臀比值、TC、TG、LDLC、HDLC、 Lp（a）、oxLDLC高于對照組，年齡、身高、體重、體重指數、臀圍、收縮壓、舒張壓、空腹血糖等兩組間差異無統計學意義（見表1）。表1 兩組一般臨床資料(略)22 血清抵抗素的表達及相關因素分析      高脂血癥患者空腹血清抵抗素濃度（1352±641 ng/ml）高于正常對照組（957±486 ng/ml）,兩組間差異顯著(P005)。女性空腹血清抵抗素濃度（14

10、18±735 ng/ml） 高于男性（1057±432 ng/ml），差異有統計學意義（P005）。所有病例（n=50+21）相關分析顯示：血清抵抗素濃度與TC呈明顯正相關(r=0297，P005)，與腰圍負相關，與體重指數、腰臀比、血壓、血糖、年齡均無相關性。偏相關分析：所有病例控制性別后，血清抵抗素濃度與TC仍顯著正相關，與腰圍無相關性。控制腰圍與性別后，血清抵抗素濃度與TC依然顯著正相關。多元逐步回歸分析：空腹血清抵抗素濃度是影響血清總膽固醇的獨立因素,回歸方程:TC=4969+0075×血清抵抗素濃度，標準化回歸系數為0297。23 補體調節蛋白 CD55

11、、CD59的表達及影響因素分析     高脂血癥組CD55陽性淋巴細胞平均熒光強度及百分率均低于對照組（P005），CD59陽性粒細胞百分率低于對照組（P005），（見表2，表3）。所有病例男性CD59陽性淋巴細胞百分率（6242±1210）低于女性(6820±870)，P=0024，差異有統計學意義。直線相關分析（n=50+21）顯示：CD55陽性淋巴細胞平均熒光強度與體重指數（r=-0238，P=0045）、腰圍（r=-0253，P=0033）、腰臀比(r=-0325，P=0006)負相關，CD55陽性單核細胞的百分率與體重指數（

12、r=-0361，P=0002）、腰圍（r=-0338，P=0004）、腰臀比(r=-0301，P=0011)負相關。CD59與上述指標無相關性。CD55、CD59與血脂、血糖、血壓、年齡無相關性。同一CD分子（CD55或CD59）在不同細胞（淋巴細胞、單核細胞、粒細胞）的表達強度有明顯相關性（r=04220970，P均0000 1）。多元回歸分析CD55陽性淋巴細胞平均熒光強度=34401516×腰臀比，標準化回歸系數為（-0325）。CD55陽性單核細胞百分率=1342450592×腰圍，標準化回歸系數為（-0338）。表2  兩組患者白細胞補體調節蛋白CD55

13、、CD59平均熒光強度（略）表3  兩組患者白細胞補體調節蛋白陽性細胞百分率的變化（略）24 抵抗素與補體調節蛋白CD55、CD59相關性分析     所有病例（n=50+21）直線相關分析，血清抵抗素與補體調節蛋白CD55、CD59陽性細胞平均熒光強度及百分率均無相關性。3 討 論           抵抗素，是由Steppan等4在小鼠體內發現的一種多肽類蛋白質，利用逆轉錄PCR技術證實人類抵抗素與小鼠抵抗素具有高度同源性5。 目前抵抗素的生

14、理功能還不是十分確切，起初人們認為，抵抗素可能聯系著肥胖及胰島素抵抗4，但近幾年有研究表明抵抗素并不是聯系肥胖和胰島素抵抗的主要紐帶6。本研究也發現，高脂血癥患者空腹血清抵抗素濃度與體重指數、腰圍、腰臀比等肥胖（特別是中心型肥胖）指標沒有明顯的關系，與LEE研究結果6一致。抵抗素是否在肥胖及胰島素抵抗中起主要作用值得進一步研究。                    目前，國內外關于抵抗素與血脂的研究結果尚存在分歧。

15、Jove研究7發現人抵抗素mRNA水平與TC呈負相關，也有研究認為血清抵抗素與血脂各成分均無相關性6。我們此次研究發現空腹血清抵抗素水平與血清總膽固醇濃度呈顯著正相關，且不受其他因素影響，多元逐步回歸分析血清抵抗素是影響TC的獨立影響因素，與上述結果不一致。但以上結果均提示抵抗素可能參與脂代謝的調節，抵抗素參與血脂代謝的機制目前尚不明確，有待進一步研究。           高脂血癥是動脈粥樣硬化的重要危險因素，近幾年研究表明抵抗素與炎癥及動脈粥樣硬化的發生發展也存在一定聯系。抵抗素在鼠和人動脈

16、粥 樣硬化斑塊有陽性表達，并且抵抗素mRNA的表達水平在鼠的主動脈粥樣硬化進展期斑塊中顯著增加8,9。抵抗素還可導致血管內皮細胞功能紊亂10，刺激內皮素1、各種黏附分子和化學因子表達增加11，促進血管平滑肌細胞遷移增殖12，激活炎癥通路13。我們在此次研究中發現高脂血癥患者，空腹血清抵抗素水平明顯高于正常對照組，且與血清總膽固醇濃度呈顯著正相關，進一步提示抵抗素參與脂代謝的調節并有可能參與動脈粥樣硬化的發展過程。           Gui14等發現 ，雌性鼠較雄性鼠抵抗素m表達增加，Nogue

17、iras15在大鼠體內也發現抵抗素的表達受性別、性激素的影響，認為與抵抗素基因表達的二重性有關。我們也發現，女性組抵抗素濃度高于男性，與LEE6結果一致，提示抵抗素表達受性別影響。           目前認為動脈粥樣硬化是一種慢性炎癥，以動脈管壁單核細胞、淋巴細胞浸潤、泡沫細胞形成、脂質沉積和鈣化為特點。補體系統是固有免疫的組成部分，是炎癥反應的重要介質和效應分子。大量證據表明，補體參與動脈粥樣硬化發生、發展的整個過程，補體活化也是缺血再灌注損傷 和糖尿病大小血管并 發癥的重要原因16,17。

18、補體系統組成的多樣性和補體調節蛋白的存在為動脈粥樣硬化的防治提供了多個潛在的干預靶點。補體活化受補體調節蛋白的調控，CD55、CD59是重要的膜結合補體調節蛋白，在內皮細胞、血細胞、神經細胞等多種組織細胞表達。CD55又稱衰變加速因子，抑制C3、C5轉化酶的形成，防止補體活化；CD59又稱保護素，阻礙C7、C8與C5b6的結合，抑制C5b9形成，從而防止自身組織受到補體活化的損傷。我們在近年來研究中發現，高脂血癥患者補體調節蛋白CD55表達下調3，CD55表達強度與體重指數、腰臀比值負相關，腰臀比值是CD55表達的預測因素。我們在此次研究中更進一步證實了以上結果，高脂血癥組CD55陽性淋巴細胞

19、平均熒光強度及百分率均低于對照組，CD59陽性粒細胞百分率低于對照組，腰臀比、腰圍分別是CD55陽性淋巴細胞平均熒光強度、CD55陽性單核細胞百分率的顯著預測指標。以上結果提示肥胖尤其是腹型肥胖可能抑制補體調節蛋白CD55的表達。脂肪細胞 是非常重要的內分泌器官18，釋放大量的生物活性分子，如TNF、IL6、FFA、瘦素、脂聯素、抵抗素、纖溶酶原激活物抑制1（PAI1）等，上述脂肪因子不僅僅在胰島素抵抗的發病有顯著的作用，而且還是重要的血管活性因子，直接影響內皮功能和血管健康。脂肪因子直接影響血管平衡的能力，可能是代謝綜合癥病人心血管疾病的重要基礎機制。然而在此次研究中，我們并未發現空腹血清抵

20、抗素濃度與補體調節蛋白CD55、CD59表達有相關性，抵抗素可能沒有影響CD55、CD59的表達，但其是否影響補體系統的其他成分以及其他脂肪細胞特異因子如脂聯素（adiponectin）、瘦素（leptin）等參與補體調節蛋白的表達還有待進一步研究。【參考文獻】  1 Bin S,Wu ZGInflammation and AtherosclerosisJCardiology Development，2004；25(1)：2 劉永銘,嚴祥,劉艷英,等補體與動脈粥樣硬化J中華心血管病雜志,2005；33：86693 劉永銘,何津春,楊京港,等阿托伐他汀對高脂血癥患者補體調節蛋白CD55

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22、tin levels are not associated with obesity or insulin resistance in humans and are not regulated by fasting or leptin administration：crosssectional and interventional studies in normal，insulinresistant，and diabetic subjectsJJ Clin Endocrinol Metab，2003;88:4848567 Jove M,Planavila A,Cabrero A,et alRe

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