1、根素衍生物4ac混懸液及其納米粒在Beagle犬體內的藥代動力學研究【摘要】目的比較葛根素衍生物4ac混懸液及其納米粒在Beagle犬體內的生物利用度。方法分別于給藥后不同時間取血，高效液相色譜（HPLC）法測定血清中葛根素衍生物4ac的血藥濃度，應用3P97藥動學統計軟件對血藥濃度數據擬合。結果葛根素衍生物4ac混懸液及其納米粒在Beagle犬體內過程均符合二室開放模型。結論葛根素衍生物4ac納米粒較葛根素衍生物4ac混懸液相比能明顯提高在Beagle犬體內的生物利用度。 【關鍵詞】 葛根素衍生物4ac； 藥物動力學； 高效液相色譜Pharmacokinetic Investigation

2、of Suspension and Nanopaticles in Beagle DogsGUO Dongyan， CHEN Shilin，YANG Dajian（Shaanxi College of Traditional Chinese Medicine， Xianyang 712046 China；Hong Kong Polytechnic University，China）Abstract：ObjectiveTo study the pharmacokinetics of suspension and nanopaticles in beagle dogs.MethodsBlood w

3、as collected at different time. The plasma concentration of the derivatives-4ac was determined by HPLC. The compartment model was calculated with 3p97 program and the pharmacokinetic parameters were compared with SPSS program. ResultsThe suspension and nanopaticles of derivatives-4ac could be fitted

4、 to two-compartment model in beagle dogs. ConclusionNanopaticle of derivatives-4ac can obviously improve the bioavailability in beagle dogs.Key words：Derivatives-4ac； Pharmacokinetics ； HPLC 葛根素是葛根心腦血管活性的主要物質基礎1，2，臨床上常用于治療冠心病、心絞痛及腦血栓等疾病35。實驗證明，犬口服葛根素的生物利用度低，其絕對生物利用度約為3%，大部分以原形從糞便中排出。為了提高葛根素的生物利用度，制備

5、了葛根素的衍生物4ac及其衍生物4ac的納米粒。本實驗旨在采用高效液相色譜法，測定葛根素衍生物4ac混懸液及其納米粒在Beagle犬體內的生物利用度。1 器材1.1 藥品與試劑葛根素衍生物4ac由香港理工大學楊大堅教授提供，經HPLC法測定含量均在98%以上。葛根素衍生物4ac混懸液為4ac加蒸餾水制成的混懸型水針劑；葛根素衍生物4ac納米粒凍干針劑（4ac-PLA-NP，香港理工大學中藥研究所自制）為衍生物4ac經溶劑揮發法制備的納米膠體溶液經冷凍干燥制成的凍干粉針劑。 乙腈、甲醇均為HPLC級，水為重蒸餾水。1.2 儀器與色譜條件Agillent1100高效液相色譜儀，DAD二極管陣列檢測

6、器，HP1100色譜工作站；Agillent XDB-C18色譜柱（4.6 mm250 mm，5 m）；預柱為Agillent XDB-C18柱（4.6 mm12.5 mm ，5 m）；梯度洗脫：0 min 乙腈水（1090） 0.7ml/min；15 min乙腈：水（6040）0.7 ml/min；20 min 乙腈水（7030） 0.7 ml/min；30 min 乙腈水（1000） 0.7 ml/min；柱溫為室溫；檢測波長為250 nm。1.3 動物Beagle犬，體重（100.1）kg，雌雄兼用，由廣州醫藥工業研究院Beagle犬培育中心供應。2 方法與結果2.1 葛根素衍生物4ac

7、納米粒（4ac-PLA-NP)的制備稱取聚乳酸100 mg，4ac30 mg，卵磷脂0.2 ml（預先用二氯甲烷配成25的溶液），加入1 ml二氯甲烷中溶解，作為有機相；另取普流羅尼克68（F-68）300 mg溶于蒸餾水中，作為連續相；將有機相加入連續相中，攪拌除去有機溶劑即得。2.2 樣品采集取Beagle犬6只，隨機分為兩組，每組3只，實驗前禁食12 h， 4ac混懸水針劑、4ac-PLA-NP凍干針劑分別按含4ac 6 mg/kg靜脈注射給藥，于給藥后0，0.083，0.25，0.5，1.0，3.0，6.0，12，24， 48，72，96，144 h取血，靜置30 min后離心，取上層

8、血清備用。2.3 樣品處理精密吸取0.5 ml血清，加入甲醇2.0 ml，旋渦振蕩1 min，離心15 min（3 000 r/min），上清液用氮氣流吹干，殘渣加0.2 ml甲醇溶解，離心10 min（10 000 r/min），取上清液進樣。2.3.1 色譜條件葛根素對照品液、空白血清、含藥血清經處理后的溶液的HPLC色譜圖見圖13。由圖可見血清中內源性雜質對葛根素的測定無干擾，葛根素的保留時間為8.3 min。2.3.2 標準曲線制備稱取葛根素對照品適量，用甲醇溶解，制成每毫升約含0.1 mg的溶液，作為貯備液。精密吸取此貯備液用甲醇稀釋為含葛根素為18.75，12.5，9.375，6.

9、25，3.125 g/ml的系列標準液。分別吸取以上標準溶液0.5 ml，加入空白血清0.5 ml，按樣品處理方法進行處理，得一系列對照品溶液。分別吸取以上系列對照品溶液20 l，進樣測定峰面積。以葛根素濃度為橫坐標，以峰面積為縱坐標，得葛根素對照品在血液中的標準曲線，其回歸方程為A=149 750C-55.665 （r=0.996 3），在0.156 3 0.937 5g范圍內線性關系良好。由于回歸方程中b/a100，因此采用外標一點法定量。2.3.3 回收率實驗取0.5 ml空白血清6份，分別加入不同量的葛根素對照品溶液，旋渦混合均勻，分別加入甲醇2.0 ml，旋渦振蕩1 min，離心15

10、 min，3 000 r/min，上清液用氮氣流吹干，殘渣加0.2 ml甲醇溶解，離心10 min，10 000 r/min，取上清液進樣。記錄峰面積，求回收率。高、中、低濃度的平均回收率為96.58%。結果見表1。表1 回收率實驗（略）結果表明，回收率在要求范圍內, 該方法合理、可行。2.3.4 精密度實驗取含葛根素的血清樣品0.5 ml，加入甲醇2.0 ml，旋渦振蕩1 min，離心15 min（3 000 r/min），上清液用氮氣流吹干，殘渣加0.2 ml甲醇溶解，離心10 min（10 000 r/min），取上清液進樣。采用外標一點法計算，求RSD（）。結果見表23。表2 日內精密

11、度（略）表3 日間精密度（略）結果表明，日內及日間精密度均10%，該方法的精密度良好。2.4 數據分析按“2.3”樣品處理方法項下對各樣品進行處理，進樣，采用外標一點法計算出各樣品的血藥濃度，將測得的血藥數據輸入計算機，用3P97藥動學統計程序處理，結果表明游離4ac及其納米粒的體內過程均符合二室開放模型。其主要藥動學參數見表4。表4 4ac混懸液及其納米粒主要藥動學參數（略）從表4數據直觀來看，納米粒在體內血藥濃度與時間曲線下的面積遠遠高于4ac混懸液組，經t檢驗， 4ac混懸液與納米粒組比較有極顯著性差異（t0.01）。圖1 空白血清色譜圖（略）圖2 血液樣品色譜圖（略）圖3 葛根素色譜圖

12、（略）3 討論 在進行含量測定中發現，血清樣品中，4ac在Beagle犬體內主要以葛根素的形式存在，分析其原因可能是由于衍生物在犬體內水解，脫乙酰基而成為葛根素的緣故。因此，含量測定中采用葛根素為對照品進行含量測定。 由于葛根素衍生物4ac的脂溶性較強，制備成注射液時需要大量的增溶劑；為此制備了葛根素衍生物4ac的納米粒，旨在提高其生物利用度，通過Beagle犬體內的生物利用度比較實驗可以看出，制成納米粒后其生物利用度明顯提高。分析其主要原因在于消除半衰期明顯延長，增加了藥物在體內吸收的緣故。【參考文獻】 1 高秀榮，王春梅，秦桂云，等.葛根素注射液改善冠心病微循環的臨床觀察J.中國微循環，2002，6（4）：216.2 許旭偉，李進禧，汪 濤，等.葛