1、細(xì)菌數(shù)量測(cè)定細(xì)菌數(shù)量測(cè)定-標(biāo)準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)平板計(jì)數(shù)法平板計(jì)數(shù)法一、實(shí)訓(xùn)目的一、實(shí)訓(xùn)目的v1 1、掌握菌液稀釋的方法和步驟。、掌握菌液稀釋的方法和步驟。 v2 2、掌握澆混接種的操作步驟。、掌握澆混接種的操作步驟。 v3 3、掌握菌落計(jì)數(shù)的原理與方法、掌握菌落計(jì)數(shù)的原理與方法v平板菌落計(jì)數(shù)法是將待測(cè)樣品經(jīng)適當(dāng)平板菌落計(jì)數(shù)法是將待測(cè)樣品經(jīng)適當(dāng)稀釋后，其中的微生物充分分散為單個(gè)稀釋后，其中的微生物充分分散為單個(gè)細(xì)胞，取一定量的稀釋液接種到平板上，細(xì)胞，取一定量的稀釋液接種到平板上，經(jīng)過培養(yǎng)，由每個(gè)單細(xì)胞生長繁殖而形經(jīng)過培養(yǎng)，由每個(gè)單細(xì)胞生長繁殖而形成的肉眼可見的菌落，即代表原樣品中成的肉眼可見的菌落，即代表

2、原樣品中的一個(gè)單細(xì)胞。的一個(gè)單細(xì)胞。二、實(shí)訓(xùn)原理二、實(shí)訓(xùn)原理v統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)，根據(jù)其稀釋倍數(shù)和取樣統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)，根據(jù)其稀釋倍數(shù)和取樣接種量即可換算出樣品中的含菌數(shù)。由接種量即可換算出樣品中的含菌數(shù)。由于待測(cè)樣品往往不易完全分散成單個(gè)細(xì)于待測(cè)樣品往往不易完全分散成單個(gè)細(xì)胞。所以平板菌落計(jì)數(shù)法結(jié)果往往偏低。胞。所以平板菌落計(jì)數(shù)法結(jié)果往往偏低。現(xiàn)在常使用菌落形成單位現(xiàn)在常使用菌落形成單位。三、實(shí)訓(xùn)儀器和材料三、實(shí)訓(xùn)儀器和材料v1、儀器：恒溫培養(yǎng)箱。高壓蒸汽滅菌鍋，、儀器：恒溫培養(yǎng)箱。高壓蒸汽滅菌鍋，電熱套、托盤天平電熱套、托盤天平v吸量管、燒杯、三角瓶、培養(yǎng)皿、試管、吸量管、燒杯、三角瓶、培養(yǎng)皿、試管、試

3、管架、酒精燈試管架、酒精燈 v2試劑：大腸桿菌懸液、牛肉膏蛋白胨培試劑：大腸桿菌懸液、牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基（營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基），生理鹽水、鹽養(yǎng)基（營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基），生理鹽水、鹽酸、氫氧化鈉、蒸餾水酸、氫氧化鈉、蒸餾水 四、實(shí)訓(xùn)步驟四、實(shí)訓(xùn)步驟v（一）培養(yǎng)基配制與滅菌（一）培養(yǎng)基配制與滅菌 v1.生理鹽水：生理鹽水：180mL/2組組v 分分16支支 （9mL/支）支）加塞包扎滅加塞包扎滅菌菌v2.營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基：營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基：330mL/2組組 加熱煮沸加熱煮沸溶解溶解調(diào)調(diào)pH=7.20.2 分分4個(gè)個(gè) 加塞包扎滅菌加塞包扎滅菌(二二)儀器包扎（每組用量儀器包扎（每組用量）v 培養(yǎng)皿培養(yǎng)皿7套套

4、v1mL吸量管吸量管7支，包扎滅菌支，包扎滅菌（三）菌液稀釋（三）菌液稀釋v 1、編號(hào)、編號(hào)v（1）無菌平皿）無菌平皿7套，分別標(biāo)記為套，分別標(biāo)記為10-4、10-5、10-6各各2套，留一平皿做空白對(duì)照。套，留一平皿做空白對(duì)照。v2、標(biāo)記、標(biāo)記v(2）6支盛支盛9mL生理鹽水的滅菌試管一次生理鹽水的滅菌試管一次標(biāo)記為標(biāo)記為10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6v （四）澆混接種（四）澆混接種1、取樣：用、取樣：用3支無菌吸管分別精確吸取支無菌吸管分別精確吸取10-4、10-5、10-6的的稀釋液的的稀釋液0.2 mL，對(duì)號(hào)放入，對(duì)號(hào)放入編好號(hào)的培養(yǎng)皿中。編好號(hào)的培養(yǎng)皿中。

5、2、倒平板：在上述平皿中倒入熔化并冷、倒平板：在上述平皿中倒入熔化并冷卻卻至至50左右的瓊脂培養(yǎng)基約左右的瓊脂培養(yǎng)基約1520 mL，置，置水平位置，迅速旋動(dòng)混勻，待凝固后，于水平位置，迅速旋動(dòng)混勻，待凝固后，于37培養(yǎng)箱中倒置培養(yǎng)培養(yǎng)箱中倒置培養(yǎng)24h。v（五）計(jì)數(shù)（五）計(jì)數(shù)v取出平皿，觀察并計(jì)算菌落數(shù)。一般取出平皿，觀察并計(jì)算菌落數(shù)。一般選擇平皿上長有選擇平皿上長有3030030300個(gè)菌落的稀釋度個(gè)菌落的稀釋度計(jì)算每毫升的菌落數(shù)最合適。計(jì)算每毫升的菌落數(shù)最合適。v算出同一算出同一稀釋度稀釋度2 2個(gè)個(gè)平皿上的菌落平平皿上的菌落平均數(shù)，并按下列公式計(jì)算：均數(shù)，并按下列公式計(jì)算：v活菌落數(shù)活菌落數(shù)/mL=/mL=同一同一稀釋度稀釋度2 2個(gè)個(gè)平皿上平皿上的菌落平均數(shù)的菌落平均數(shù)稀釋倍數(shù)稀釋倍數(shù)5 5檢驗(yàn)結(jié)果檢驗(yàn)結(jié)果v活菌落數(shù)活菌落數(shù)/ /mLmL= =同一稀釋度同一稀釋度2 2個(gè)平皿上的菌落平均數(shù)個(gè)平皿上的菌落平均數(shù)稀釋倍數(shù)稀