1、天然藥物實驗報告 天然藥物化學實驗實驗報告實驗一、槐米中蘆丁的提取、精制和鑒定（一）實驗目的要求制備蘆丁，供藥用。通過蘆丁的制備，掌握黃酮類化合物的提取分離的原理和操作。熟悉重結晶技巧。了解和掌握黃酮類化合物的一些主要性質和鑒定方法。（二）實驗的基本原理蘆丁的提取原理利用蘆丁結構中含有多個酚羥基，呈酚酸性，能在堿水中溶解的性質，可用堿性溶劑進行提取，提取液加酸后可沉淀析出（堿溶酸沉法）。也可利用蘆丁在冷水中溶解度小，在熱水中溶解度大的性質進行提取。2.蘆丁的分離原理利用蘆丁結構在冷乙醇中溶解度小，在熱乙醇中溶解度大，以及在熱水中溶解度大，在冷水中溶解度小的性質分離。蘆丁用溶劑加熱溶解后，趁熱抽

2、濾，濾液放冷后能析出而達到分離的目的（如不純可再重復操作進行分離）。也可采用醇溶水沉法進行精制。3. 蘆丁的鑒定原理（1）利用吸附薄層色譜的分離原理，蘆丁與蘆丁對照品在同一條件下進行展開，顯色，以達到鑒定蘆丁的目的。（2）通過專屬的化學顯色反應（如三氯化鋁顯色反應），確定蘆丁的成分類型（黃酮類）。(三)實驗內容1.用堿提法、水提法、醇提法提取槐米中蘆丁。2.用酸沉法和冷卻過飽和法分離蘆丁。3.溶劑重結晶精制蘆丁。4.薄層色譜法和顯色反應鑒定蘆丁(四) 實驗藥材儀器與試劑1.實驗藥材 槐米20g。2.儀器：磁力加熱攪拌器、旋轉蒸發儀、粉碎機、500ml燒杯，1000ml燒杯，50ml燒杯，250

3、ml園底燒瓶、500ml園底燒瓶、100ml量筒、50ml量筒、100ml錐形瓶、50ml錐形瓶、研缽、移液管、減壓過濾裝置，布氏漏斗，抽濾瓶、層析缸等。3.試劑：硼砂、氧化鈣、 HCI、三氯化鋁、甲醇、乙醇、乙醚、丙酮、甲酸、濾紙、PH試紙等。（五）實驗方法與注意事項1.蘆丁的提取（2）方法二（水提取法）稱取槐米粗粉20g，在研缽中研碎后放入500ml燒瓶中，（注意小心沿側邊放入磁子），加水20ml，用磁力加熱攪拌器加熱煮沸30min，（設定溫度為105°C，當加熱到103°時，觀察到：液體開始沸騰，有氣味，有泡沫產生。藥材翻滾，圓底燒瓶壁有水滴。且隨著時間的增多，泡沫越

4、來越多，加熱20min左右后，泡沫豐富。稍調低轉速。），趁熱過濾。殘渣同法操作一次，合并兩次濾液，放置冰箱中析晶，待全部析出后，（觀察到：析出后，有黃色晶體，上清液為棕色，香卞甘味。抽濾時，固體為淡黃色。烘干后，呈黃綠色）。減壓抽濾，用少量蒸餾水洗滌蘆丁結晶，抽干，得粗制蘆丁，干燥，稱重，計算得率。（濾紙+漏斗145.02g，濾紙+漏斗+樣品 146.617g，故知樣品為1.597g，得率為7.99）（附加步驟：旋轉蒸發，濃縮至50ml，觀察是否有殘余蘆丁。其中，重點注意旋轉蒸發儀的使用。組裝好儀器后，關閉玻璃氣閥，打開真空泵，至0.05Mpa時，打開加熱開關，旋轉開關等。然后開始旋轉蒸發，過

5、程中，要耐心等待，并時刻注意蒸發液體，防止噴濺出蒸發瓶，造成實驗失敗。）2.蘆丁的精制（1）方法一（醇-水重結晶法）取粗制蘆丁1g，(實際上為1.008g，其中，粗制蘆丁為淡黃色固體，有香味)，置于250ml園底燒瓶中，加90(實際為80)乙醇30ml加熱回流15分鐘，趁熱抽濾。（濾液為黃色透明油狀液體）。濾液置250ml燒杯中，向濾液中加蒸餾水（約34倍量）至溶液呈明顯混濁，室溫放置，抽濾得精致蘆丁。用少量蒸餾水洗滌蘆丁結晶，晾干，稱重。（濾紙+漏斗29.69g，濾紙+漏斗+樣品30.20g，故知樣品為0.51g）。3.鑒定（1）點滴顯色反應 取蘆丁的甲醇溶液（供試液）分別點在濾紙上，揮去溶

6、劑，然后分別加下列試劑，觀察顯色前后顏色及熒光的變化。供試液：蘆丁的甲醇溶液。顯色劑：2三氯化鋁乙醇溶液在紫外燈下365nm觀察顯色前后顏色及熒光的變化（2）薄層色譜鑒定吸附劑：硅膠GF254薄層板（5.0cm 10.0cm）。樣 品：自制蘆丁（用甲醇溶解，濃度約1mg/ml）對照品：蘆丁對照品的甲醇溶液。展開劑：三氯甲烷-甲醇-甲酸（730.5）顯 色：a.先在可見光下觀察，然后在紫外光下觀察（365nm紫外燈下觀察）（觀察到兩點，呈深色）b.噴三氯化鋁試劑前后觀察顏色變化（365nm紫外燈下觀察）（對照組為淺褐色，實驗組為黃綠色，有拖尾）實驗結果記錄：觀察斑點顏色，記錄圖譜并計算Rf值。R

7、f樣品=3.00/5.75=0.522總結：1.實驗應細心，耐心，如旋轉蒸發時。2從失敗中總結經驗，改進實驗的方法，為以后積累經驗。3.實驗的過程中，需要團隊合作，從不同的方面來注意、分析實驗，得到最好的結果。5 .注意事項(1) 硼砂因能與蘆丁中的鄰二酚羥基結合，起保護鄰二酚羥基，不被氧化破壞的作用。實驗證明，提取時加入硼砂，產品的質量會好些。(2) 石灰乳既能達到堿溶解提取蘆丁的目的，還可以除去槐米中大量的粘液質和酸性樹脂（形成鈣鹽沉淀），但PH不能過高和長時間煮沸，因為會導致蘆丁的水解而開環和形成鈣鰲合物，影響產品的質量和產率。(3) PH過低（酸性太強）會使蘆丁形成洋鹽而收率降低。(4

8、) 稱量蘆丁時，先將帶濾紙的漏斗稱重，再將盛樣品的帶濾紙的漏斗稱重，差重即為樣品的重量。實驗二 牡丹皮中丹皮酚的提取、分離與鑒定(一)實驗目的要求1.掌握揮發油的一般提取和鑒定方法。2掌握用水蒸氣蒸餾法從牡丹皮中提取丹皮酚的方法。3掌握丹皮酚的色譜檢識和定性鑒定方法。(二)實驗的基本原理利用揮發油與水不相混合，當受熱后，二者蒸氣壓的總和與大氣壓相等時，溶液即開始沸騰。繼續加熱，則揮發油可隨水蒸氣蒸餾出來。丹皮酚具有揮發性，可隨水蒸氣蒸餾，又因在冷水中難溶，故放冷后析出結晶。(三)實驗內容1.用揮發油提取器提取牡丹皮中的丹皮酚。2.溶劑重結晶或引種結晶純化丹皮酚。3三氯化鐵顯色反應和薄層色譜法鑒

9、定丹皮酚。(四) 實驗藥材儀器與試劑 1.實驗藥材 牡丹皮20g。2.儀器：水蒸氣蒸餾裝置（包括揮發油提取器、蒸餾瓶500ml、回流冷凝管）、粉碎機、500ml燒杯，量筒，減壓過濾裝置， 濾紙，布氏漏斗，層析缸等。3.試劑：氯化鈉、三氯化鐵、鹽酸、乙醇、環己烷、乙酸乙酯等。4材料：GF254硅膠薄層板（五）實驗方法及注意事項1.丹皮酚的提取取牡丹皮20g（實際為20.066g），粉碎，置250ml圓底燒瓶(改為“三口瓶”)中，加100ml水、2ml乙醇和8g氯化鈉(實際為8.043g)，(裝儀器時，注意凡士林的涂抹方法，不是全涂抹于塞子，而是口與塞各涂一半，注意方向)，振搖混合后浸潤1h，連接

10、揮發油提取器并加注冷凝水，自冷凝管上端加水使充滿測定器的刻度部分，并溢流入燒瓶時為止。（過程中現象為：乳白色粉末，混合后，顏色變深，上有咖啡色淺浮沫），水浴回流收集蒸餾液（共收集蒸餾液約60ml）。將蒸餾液放冷，分層，開啟測定器下端活塞使油層下降至其上端與刻度“0”線平齊，讀取揮發油量，計算百分含量。（出現問題：開始加熱時，油層在下，加熱全部壓回，重新開始。后來，溫度傳感器在瓶中與磁子相吸，處理過程中，由于頻繁開塞且時間過長，導致大量有效揮發性油物質從側口揮發，最終未能成功收集到大量油性物質。實驗失敗！）緩緩放出水分，接收揮發油。揮發油靜置過夜，有白色針狀結晶析出，濾取結晶，干燥，稱重。如結晶

11、不純，可加入95乙醇至全部溶解，（約為粗晶的15倍），抽濾，濾液中加入4倍量的蒸餾水，使溶液呈乳白色，靜置后則有大量白色針狀結晶析出。（由于上一步的失敗，未進行此步驟，而是與“第七組”共同分享了他們的成果，從而順利進行實驗的下一步。在此表示感謝！）2.丹皮酚的.鑒定（1）薄層色譜鑒定吸附劑：硅膠GF254薄層板（5.0cm 10.0cm）。樣 品：自制樣品的乙醇液，丹皮酚對照品乙醇溶液展開劑：環己烷-乙酸乙酯-（3：1）或環己烷-三氯甲烷-無水乙醇（7：3：1）顯 色：噴5三氯化鐵乙醇溶液或鹽酸酸化的5三氯化鐵乙醇溶液，熱風吹至斑點顯色清晰實驗結果記錄：觀察斑點顏色，記錄圖譜并計算Rf值。Rf

12、樣品=4.90/7.10=0.690總結：1.本實驗出現問題：溫度傳感器在瓶中與磁子相吸，處理過程中，由于頻繁開塞且時間過長，導致大量有效揮發性油物質從側口揮發，最終未能成功收集到大量油性物質。實驗應細心，耐心，不可操之過急。2 .實驗的過程也是探索的過程，實驗失敗，得不到產物，需要我們從失敗中總結經驗，防止再發生錯誤；改進實驗的方法，尋找合適的方法。3.實驗指導及注意事項1.提取完畢后，須待油水完全分層，在接受揮發油時，應注意盡量避免帶出水分。2.產品應在干燥、密閉、避光條件下保存（注意，嚴禁放入烘箱中烘干）。實驗三 黃柏中小檗堿的提取、分離與鑒定實驗部分實驗目的要求學習和掌握小檗堿的結構特

13、點和特殊的理化性質，及小檗堿的一般提取精制方法。實驗的基本原理小檗堿的提取原理根據水溶性季銨堿在乙醇和堿水中溶解度大性質，利用乙醇回流法和堿水提取法進行提取。小檗堿的分離原理(1)利用小檗堿的鹽酸鹽在水中溶解度小（1：500），采用鹽析法使小檗堿沉淀析出，達到純化的目的。(2)利用鹽析法分離小檗堿實驗內容1.用乙醇回流提鹽析法、醇索氏提鹽析法和堿滲漉提鹽析法提取黃柏中鹽酸小檗堿。2.溶劑重結晶精制鹽酸小檗堿。3.薄層顯色反應鑒定鹽酸小檗堿實驗藥材儀器與試劑1.實驗藥材 黃柏30g。2.儀器：250ml燒瓶、500ml燒杯，冷凝管、滲漉筒250ml，粉碎機、減壓過濾裝置、紗布、漏斗，層析缸等。3

14、.試劑：氧化鈣，氨水，NaCI，鹽酸、H2SO4，三氯甲烷，甲醇，乙醇，改良碘化鉍鉀等。實驗方法小檗堿的提取（2）方法二（醇索氏提鹽析法）稱取黃柏30g(實際上，試驗中取15g)，（用粉碎機）粉碎成粗粉，用濾紙包成筒狀，置于索氏提取器中，（由于索氏提取器的內徑較小，在裝入粗粉的過程中要注意藥粉不能溢出，注意最后藥品不要高于管口），燒瓶中加入210ml的95乙醇，（實驗中由于判斷失誤，開始只加了105ml，后來在過程中，由于虹吸較難，補加了一部分乙醇，大約70多ml），（水浴提取開始時，未加水浴鍋的蓋，后來及時加蓋，并用棉花裹住索氏提取器側管，防止因水蒸氣影響過熱），（過程中，觀察到：提取液剛開

15、始為黃色液體，隨著提取次數增多，顏色變淡），水浴提取至無顏色。乙醇提取液濃縮至糖漿狀(濃縮采用旋轉蒸發儀，現象為：隨著蒸發的進行，液體減少，顏色變深)，加水約80ml（實際為40ml），濾出沉淀（樹脂等雜質），濾液加入15NaCI（W/V）(實際為6.05g)，溶解后（為了加快溶解，可以把加入NaCI的濾液放在水浴上方，并用玻璃棒攪拌），放置過夜。析出沉淀，(沉淀為黃色固體，溶液為紅棕色)，過濾沉淀物（鹽酸小檗堿）。烘干，稱重。（由于電子天平儀器的故障，第一次測量得到負質量。除去漏斗，重新采用分析天平測得：樣品+濾紙為0.4603g，濾紙為0.54516g，故粗略得樣品0.0087g。雖產量較

16、低，但也是所有實驗組中唯一成功的一組，得到了經驗：。鹽酸小檗堿的精制（2）方法二：取上述鹽酸小檗堿粗品全部,放入適宜的小錐形瓶（實際為燒瓶）中，加25倍量沸水，水浴加熱溶解，趁熱過濾，濾出不溶物，濾液在65時加濃鹽酸調PH23，放置12h，析晶，用蒸餾水洗至PH4.8，80以下干燥，得精制鹽酸小檗堿，稱重，計算得率。（由于粗制得的樣品較少，未進行此步驟，直接進入鑒定）。鑒定（1）檢識反應 取鹽酸小檗堿(淺黃色)少許，加蒸餾水3ml（10ml），緩緩加熱，（小檗堿逐漸溶解，成淺黃色液體），溶解后加氫氧化鈉試液2滴（10滴），顯橙色，溶液放冷，過濾，取澄清濾液，加丙酮4滴，即發生混濁。（加入丙酮后

17、可觀察到黃色渾濁）放置，生成黃色小檗堿沉淀。（2）薄層色譜鑒定吸附劑：硅膠GF254薄層板（5.0cm 10.0cm）。樣 品：自制鹽酸小檗堿（用甲醇溶解）展開劑：三氯甲烷-甲醇-氨水（1440.5）顯 色：a.先在可見光下觀察，（觀察到點呈黃色，由于產品不純，樣品點后面還有拖尾現象）。然后在紫外光下觀察。（可以明顯的觀察到兩點的位置，為明顯的黑藍色，拖尾現象很明顯）。b.噴改良碘化鉍鉀液顯色，前后觀察顏色變化（由黃色變為黃棕色）。實驗結果記錄：觀察斑點顏色，記錄圖譜并計算Rf值。Rf樣品=4.10/7.60=0.539Rf對照=3.40/7.60=0.741 （可看出，在純度上與對照品還是存在一定的差距）。總結：1.實驗應細心，耐心，不可操之過急。2從實驗得率低中，知道了藥物中要提取有用成分含量是很少的，析晶過程需要的時間很長，故藥物總是如此之貴。3.實驗的過程也是探索的過程，每次實驗都有可能失敗，得不到產物或者產物量，需要我們從失敗中總結經驗，改進實驗的方法，尋找到最合適