1、保健食品有助于維持血脂（膽固醇/甘油三酯）健康水平檢驗(yàn)方法根據(jù)血脂異常的類型，有助于維持血脂（膽固醇/甘油三酯）健康水平按照受試物作用機(jī)制的不同，設(shè)立分類的動(dòng)物試驗(yàn)。動(dòng)物試驗(yàn)：分成二種情況：1. 混合型高脂血癥動(dòng)物模型2. 高膽固醇血癥動(dòng)物模型人體試食試驗(yàn)：根據(jù)試驗(yàn)的結(jié)果，分三種情況分別進(jìn)行判定：1. 有助于維持血脂健康水平功能2. 有助于維持血膽固醇健康水平功能3. 有助于維持血甘油三酯健康水平功能1動(dòng)物實(shí)驗(yàn)方法1.1 混合型高脂血癥動(dòng)物模型1.1.1 原理用含有膽固醇、蔗糖、豬油、膽酸鈉的飼料喂養(yǎng)動(dòng)物可形成脂代謝紊亂動(dòng)物模型，再給予動(dòng)物受試樣品，可檢測(cè)受試樣品對(duì)高脂血癥的影響，并可判定受試

2、樣品對(duì)脂質(zhì)的吸收、脂蛋白的形成、脂質(zhì)的降解或排泄產(chǎn)生的影響。1.1.2 儀器及試劑解剖器械、分光光度計(jì)、自動(dòng)生化分析儀、膽固醇、膽酸鈉、血清總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C），高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）測(cè)定試劑盒。1.1.3 動(dòng)物選擇及飼料1.1.3.1 健康成年雄性大鼠，適應(yīng)期結(jié)束時(shí)，體重200±20g，首選SD大鼠，每組812只。1.1.3.2 模型飼料在維持飼料中添加20.0%蔗糖、15.0%豬油、1.2%膽固醇、0.2%膽酸鈉，適量的酪蛋白、磷酸氫鈣、石粉等。除了粗脂肪外，模型飼料的水分、粗蛋白、粗脂肪、粗纖維、粗灰分、鈣、磷、鈣：磷均

3、要達(dá)到維持飼料的國家標(biāo)準(zhǔn)。1.1.4劑量分組及受試樣品給予時(shí)間實(shí)驗(yàn)設(shè)三個(gè)劑量組、空白對(duì)照組和模型對(duì)照組，以人體推薦量的5倍為其中的一個(gè)劑量組，另設(shè)二個(gè)劑量組，必要時(shí)設(shè)陽性對(duì)照組。受試樣品給予時(shí)間為30天，必要時(shí)可延長至45天。1.1.5 實(shí)驗(yàn)步驟1.1.5.1適應(yīng)期：于屏障系統(tǒng)下大鼠喂飼維持飼料觀察57天。1.1.5.2造模期按體重隨機(jī)分成2組，10只大鼠給予維持飼料作為空白對(duì)照組，40只給予模型飼料作為模型組。每周稱量體重1次。模型組給予模型飼料12周后，空白對(duì)照組和模型組大鼠不禁食采血（眼內(nèi)眥或尾部），采血后盡快分離血清，測(cè)定血清TC、TG、LDL-C、HDL-C水平。根據(jù)TC水平將模型組

4、隨機(jī)分成4組（即一個(gè)模型對(duì)照組、三個(gè)劑量組），分組后模型組（模型對(duì)照組和三個(gè)劑量組）各組間比較TC、TG、LDL-C、HDL-C差異均無顯著性；模型組（模型對(duì)照組和三個(gè)劑量組）各組與空白對(duì)照組比較，TC、TG、LDL-C升高差異均有顯著性，判定模型成立。1.1.5.3受試樣品給予分組后，三個(gè)劑量組每天經(jīng)口給予受試樣品，空白對(duì)照組和模型對(duì)照組同時(shí)給予同體積的相應(yīng)溶劑，空白對(duì)照組繼續(xù)給予維持飼料，模型對(duì)照組及三個(gè)劑量組繼續(xù)給予模型飼料，并定期稱量體重，于實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)不禁食采血，采血后盡快分離血清，測(cè)定血清TC、TG、LDL-C、HDL-C水平。1.1.6 觀察指標(biāo)：TC、TG、LDL-C、HDL-C

5、。1.1.7 數(shù)據(jù)處理和結(jié)果判定一般采用方差分析，但需按方差分析的程序先進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn)，方差齊，計(jì)算F值，F(xiàn)值<F0.05，結(jié)論：各組均數(shù)間差異無顯著性；F值F0.05，P0.05，用多個(gè)實(shí)驗(yàn)組和一個(gè)對(duì)照組間均數(shù)的兩兩比較方法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)；對(duì)非正態(tài)或方差不齊的數(shù)據(jù)進(jìn)行適當(dāng)?shù)淖兞哭D(zhuǎn)換，待滿足正態(tài)或方差齊要求后，用轉(zhuǎn)換后的數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)；若變量轉(zhuǎn)換后仍未達(dá)到正態(tài)或方差齊的目的，改用秩和檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果判定：有助于維持血脂健康水平（膽固醇/甘油三酯）功能結(jié)果判定：實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，模型對(duì)照組和空白對(duì)照組比較，血清甘油三酯升高，血清總膽固醇或低密度脂蛋白膽固醇升高，差異均有顯著性，判定模型成立。

6、（1）各劑量組與模型對(duì)照組比較，任一劑量組血清總膽固醇或低密度脂蛋白膽固醇降低，且任一劑量組血清甘油三酯降低，差異有顯著性，同時(shí)各劑量組血清高密度脂蛋白膽固醇不顯著低于模型對(duì)照組，可判定該受試樣品有助于維持血脂健康水平功能動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果陽性。（2）各劑量組與模型對(duì)照組比較，任一劑量組血清總膽固醇或低密度脂蛋白膽固醇降低，差異均有顯著性，同時(shí)各劑量組血清甘油三酯不顯著高于模型對(duì)照組，各劑量組血清高密度脂蛋白膽固醇不顯著低于模型對(duì)照組，可判定該受試樣品有助于維持血膽固醇健康水平功能動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果陽性。（3）各劑量組與模型對(duì)照組比較，任一劑量組血清甘油三酯降低，差異有顯著性，同時(shí)各劑量組血清總膽固醇及低

7、密度脂蛋白膽固醇不顯著高于模型對(duì)照組，血清高密度脂蛋白膽固醇不顯著低于模型對(duì)照組，可判定該受試樣品有助于維持血甘油三酯健康水平功能動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果陽性。1.1.8 注意事項(xiàng)1.1.8.1 在建立動(dòng)物模型中，可因動(dòng)物品系、飼養(yǎng)管理而影響模型的建立。1.1.8.2 保證維持飼料的各種營養(yǎng)成分，必要時(shí)需進(jìn)行檢測(cè)，除了粗脂肪外，模型飼料的水分、粗蛋白、粗纖維、粗灰分、鈣、磷、鈣：磷均要達(dá)到維持飼料的國家標(biāo)準(zhǔn)。1.1.8.3 模型飼料喂養(yǎng)期間，模型組血中膽固醇水平比較穩(wěn)定，甘油三酯水平會(huì)逐漸恢復(fù)正常水平，故模型飼料給予時(shí)間不能超過8周。1.2 高膽固醇血癥動(dòng)物模型1.2.1 原理用含有膽固醇、豬油、膽酸鈉的

8、飼料喂養(yǎng)動(dòng)物可形成高膽固醇脂代謝紊亂動(dòng)物模型，再給予動(dòng)物受試樣品，可檢測(cè)受試樣品對(duì)高膽固醇脂血癥的影響，并可判定受試樣品對(duì)脂質(zhì)的吸收、脂蛋白的形成、脂質(zhì)的降解或排泄產(chǎn)生的影響。1.2.2 儀器及試劑解剖器械，分光光度計(jì)，自動(dòng)生化分析儀，膽固醇、膽酸鈉，血清總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）測(cè)定試劑盒。1.2.3 動(dòng)物選擇及飼料1.2.3.1 大鼠模型：健康成年雄性大鼠，適應(yīng)期結(jié)束時(shí)，體重200±20g，首選SD大鼠，每組812只。金黃地鼠模型：健康成年雄性金黃地鼠，適應(yīng)期結(jié)束時(shí)，體重100±10g，每組81

9、2只。1.2.3.2 模型飼料大鼠模型：在維持飼料中添加1.2%膽固醇、0.2%膽酸鈉、3-5%豬油、適量的酪蛋白、磷酸氫鈣、石粉等。除了粗脂肪外，模型飼料的其它質(zhì)量指標(biāo)均要達(dá)到維持飼料的國家標(biāo)準(zhǔn)。金黃地鼠模型：在維持飼料中添加0.2%膽固醇，其余同大鼠模型。1.2.4 劑量分組及受試樣品給予時(shí)間實(shí)驗(yàn)設(shè)三個(gè)劑量組、空白對(duì)照組和模型對(duì)照組，以人體推薦量的5倍為其中的一個(gè)劑量組，另設(shè)二個(gè)劑量組，必要時(shí)設(shè)陽性對(duì)照組。受試樣品給予時(shí)間為30天，必要時(shí)可延長至45天。1.2.5 實(shí)驗(yàn)步驟1.2.5.1適應(yīng)期：于屏障系統(tǒng)下動(dòng)物喂飼維持飼料觀察57天。1.2.5.2造模期：按體重隨機(jī)分成2組，10只動(dòng)物給予

10、維持飼料作為空白對(duì)照組，40只給予模型飼料作為模型組。每周稱量體重1次。模型組給予模型飼料12周后，空白對(duì)照組和模型組大鼠不禁食采血（眼內(nèi)眥或尾部），采血后盡快分離血清，測(cè)定血清TC、TG、LDL-C、HDL-C水平。根據(jù)TC水平將模型組隨機(jī)分成4組（即一個(gè)模型對(duì)照組、三個(gè)劑量組），分組后模型組（模型對(duì)照組和三個(gè)劑量組）各組間比較TC、TG、LDL-C、HDL-C差異均無顯著性；模型組（模型對(duì)照組和三個(gè)劑量組）各組與空白對(duì)照組比較，TC、TG、LDL-C升高差異均有顯著性，判定模型成立。1.2.5.3受試樣品給予分組后，三個(gè)劑量組每天經(jīng)口給予受試樣品，空白對(duì)照組和模型對(duì)照組同時(shí)給予同體積的相應(yīng)

11、溶劑，空白對(duì)照組繼續(xù)給予維持飼料，模型對(duì)照組及三個(gè)劑量組繼續(xù)給予模型飼料，并定期稱量體重，于實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)不禁食采血，采血后盡快分離血清，測(cè)定血清TC、TG、LDL-C、HDL-C水平。1.2.6 觀察指標(biāo)：TC、TG、LDL-C、HDL-C。1.2.7 數(shù)據(jù)處理和結(jié)果判定一般采用方差分析，但需按方差分析的程序先進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn)，方差齊，計(jì)算F值，F(xiàn)值<F0.05，結(jié)論：各組均數(shù)間差異無顯著性；F值F0.05，P0.05，用多個(gè)實(shí)驗(yàn)組和一個(gè)對(duì)照組間均數(shù)的兩兩比較方法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)；對(duì)非正態(tài)或方差不齊的數(shù)據(jù)進(jìn)行適當(dāng)?shù)淖兞哭D(zhuǎn)換，待滿足正態(tài)或方差齊要求后，用轉(zhuǎn)換后的數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)；若變量轉(zhuǎn)換后仍未達(dá)到正態(tài)

12、或方差齊的目的，改用秩和檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果判定：有助于維持血膽固醇健康水平功能結(jié)果判定：模型對(duì)照組和空白對(duì)照組比較，血清總膽固醇或低密度脂蛋白膽固醇升高，差異有顯著性，血清甘油三酯差異無顯著性，判定模型成立。各劑量組與模型對(duì)照組比較，任一劑量組血清總膽固醇或低密度脂蛋白膽固醇降低，差異有顯著性，并且各劑量組血清高密度脂蛋白膽固醇不顯著低于模型對(duì)照組，血清甘油三酯不顯著高于模型對(duì)照組，可判定該受試樣品有助于維持血膽固醇健康水平功能動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果陽性。1.2.8 注意事項(xiàng)1.2.8.1 在建立動(dòng)物模型中，可因動(dòng)物品系、飼養(yǎng)管理而影響模型的建立。1.2.8.2 保證維持飼料的各種營養(yǎng)成分，必要

13、時(shí)需進(jìn)行檢測(cè)。2 人體試食試驗(yàn)方法2.1 受試者納入標(biāo)準(zhǔn)2.1.1 在正常飲食情況下，檢測(cè)禁食12-14小時(shí)后的血脂水平，半年內(nèi)至少有兩次血脂檢測(cè)結(jié)果，血清總膽固醇在5.18-6.21mmol/L，并且血清甘油三酯在1.70-2.25mmol/L，可作為有助于維持血脂健康水平功能試驗(yàn)備選對(duì)象；血清甘油三酯在1.70-2.25mmol/L，并且血清總膽固醇6.21mmol/L，可作為有助于維持血甘油三酯健康水平功能試驗(yàn)備選對(duì)象；血清總膽固醇在5.18-6.21mmol/L，并且血清甘油三酯2.25mmol/L，可作為有助于維持血膽固醇健康水平功能試驗(yàn)備選對(duì)象，在參考動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果基礎(chǔ)上，選擇相應(yīng)指

14、標(biāo)者為受試對(duì)象。2.1.2 獲得知情同意書，自愿參加試驗(yàn)者。2.2排除受試者標(biāo)準(zhǔn)2.2.1 年齡在18歲以下或65歲以上者。2.2.2 妊娠或哺乳期婦女，過敏體質(zhì)或?qū)Ρ臼茉嚇悠愤^敏者。2.2.3 合并有心、肝、腎和造血系統(tǒng)等嚴(yán)重疾病，精神病患者。2.2.4 近兩周曾服用降脂藥物等，影響到對(duì)結(jié)果的判斷者。2.2.5 高脂血癥患者。2.2.6未按規(guī)定食用受試樣品，或資料不全，影響功效或安全性判斷者。2.3受試樣品的劑量和使用方法根據(jù)受試樣品推薦量和推薦方法確定。2.4試驗(yàn)設(shè)計(jì)及分組要求采用組間對(duì)照設(shè)計(jì)。根據(jù)隨機(jī)盲法的要求進(jìn)行分組。按受試者血脂水平隨機(jī)分為試食組和對(duì)照組，盡可能考慮影響結(jié)果的主要因素

15、如年齡、性別、飲食等，進(jìn)行均衡性檢驗(yàn)，以保證組間的可比性。每組受試者不少于50例。試食組服用受試樣品，對(duì)照組可服用安慰劑或采用空白對(duì)照。試驗(yàn)周期45天，不超過6個(gè)月。2.5 觀察指標(biāo)2.5.1 安全性指標(biāo)2.5.1.1 一般狀況（包括精神、睡眠、飲食、大小便、血壓等）2.5.1.2 血、尿、便常規(guī)檢查2.5.1.3 肝、腎功能檢查2.5.1.4 胸片、心電圖、腹部B超檢查（僅在試驗(yàn)開始前進(jìn)行）2.5.2 功效性指標(biāo)2.5.2.1 血清總膽固醇（TC）水平及降低百分率、甘油三酯（TG）水平及降低百分率、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）水平及上升幅度、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）水平。2.5.

16、2.2 功效判定標(biāo)準(zhǔn)有效：TC 降低>10%或降至正常（<5.18mmol/L）；TG 降低>15%或降至正常（<1.70mmol/L）；HDL-C上升>0.104mmol/L。血脂總有效：TC、TG、HDL-C三項(xiàng)指標(biāo)均達(dá)到有效標(biāo)準(zhǔn)者。無效：未達(dá)到有效標(biāo)準(zhǔn)者。觀察血清總膽固醇（TC）有效率、甘油三酯（TG）有效率、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）有效率及血脂總有效率。2.6 數(shù)據(jù)處理和結(jié)果判定凡自身對(duì)照資料可以采用配對(duì)t檢驗(yàn)，兩組均數(shù)比較采用成組t檢驗(yàn)，后者需進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn)，對(duì)非正態(tài)分布或方差不齊的數(shù)據(jù)進(jìn)行適當(dāng)?shù)淖兞哭D(zhuǎn)換，待滿足正態(tài)方差齊后，用轉(zhuǎn)換的數(shù)據(jù)進(jìn)行t

17、檢驗(yàn)；若轉(zhuǎn)換數(shù)據(jù)仍不能滿足正態(tài)方差齊要求，改用t檢驗(yàn)或秩和檢驗(yàn)；方差齊但變異系數(shù)太大（如CV>50%）的資料應(yīng)用秩和檢驗(yàn)。有效率及總有效率采用c2檢驗(yàn)進(jìn)行檢驗(yàn)。四格表總例數(shù)小于40，或總例數(shù)等于或大于40 但出現(xiàn)理論數(shù)等于或小于1 時(shí)，應(yīng)改用確切概率法。2.6.1 有助于維持血脂健康水平功能結(jié)果判定：試食組自身比較及試食組與對(duì)照組組間比較，受試者血清總膽固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白膽固醇降低，差異均有顯著性，同時(shí)血清高密度脂蛋白膽固醇不顯著低于對(duì)照組，試驗(yàn)組血脂總有效率顯著高于對(duì)照組，可判定該受試樣品有助于維持血脂健康水平功能人體試食試驗(yàn)結(jié)果陽性。2.6.2 有助于維持血膽固醇健康水平功能結(jié)果判定：試食組自身比較及試食組與對(duì)照組組間比較，受試者血清總膽固醇、低密度脂蛋白膽固醇