1、酶標(biāo)儀BCA法測定蛋白濃度-一、藥品500次酶標(biāo)儀，碧云天），含以下成分：BCA蛋白濃度測定試劑盒（P0012, 1.100ml,碧云天），室溫保存試劑 A （P0012-1, a） BCA ,碧云天），室 溫保存P0012-2試劑B （, 3mlb） BCA 度保存 P0012-3, 1ml,碧云天），-20c）蛋白標(biāo)準(zhǔn)（5mg/ml BSA）（二、儀器和試劑 最佳），水浴鍋 酶標(biāo)儀（測定波長為 540-595nm之間，562nm1.孔單 條可拆酶標(biāo)板（平底）2. 96 1個（準(zhǔn)備BCA工作液用）3. 15 ml離心管 個（準(zhǔn)備蛋白標(biāo)準(zhǔn)品工作液用）1.5 ml離心管14.道移液器（排槍）和槍

2、頭 5.單道移液器和槍頭，8PBS 6.三、操作步驟 C。1.水浴鍋調(diào)至37c冰箱中取出，）的配制：將蛋白標(biāo)準(zhǔn)品（ 5mg/ml）從-202.蛋 白標(biāo)準(zhǔn)品工作液（1 mg/ml倍，即配心l PBS,即稀釋5完全溶解并混勻。取 60 l蛋白標(biāo)準(zhǔn)品（5mg/ml）,加入240成蛋白標(biāo)準(zhǔn)品工作液（1 mg/ml）。BCA。2X1.1 （標(biāo)準(zhǔn)品和樣本均需測復(fù) 孔）BCA計算工作液總量 =0.2 ml X （樣本數(shù)+8） X 3.BCA需充分混勻。50:1 ）,體積的BCA試劑B配制（即試劑工作量按 50體積的BCAA加上1 24 工作液室溫小時內(nèi)穩(wěn)定。(n)樣本數(shù)PBS 蛋白標(biāo)準(zhǔn)品 終濃度蛋 白標(biāo)準(zhǔn)品

3、 工作液單 條酶(mg/ml)(標(biāo)板l)(1mg/mll)(0100A 0S00.05 B 95S1 50.1 C S210 901-5678-1011-1213-1415-16171920-2122-2324-26mlA ()6789101112131415)B (ml0.120.140.160.180.20.220.240.260.280.3（ml）總量6.127.148.169.1810.211.2212.2413.2614.2815.3S0S7）,充分搖勻。4.按下表配制8個蛋白標(biāo)準(zhǔn)液（0.2 20 D 80S30.3 S4 70 30E0.4 S5 F 40 600.5 G 50 5

4、0S61.00S7 100H5.將96孔酶標(biāo)板的 A1孔放在左上角，按下表加入蛋白樣本和標(biāo)準(zhǔn)品。（1）先在第34條酶標(biāo)板的蛋白樣本孔（N 1N8 ）中加入待測蛋白樣本各2心1,再用排槍在蛋白樣本孔中追加 PBS液各18心1,使總量達(dá)到20心1。（此時蛋白樣本的稀釋比 1 / 2.時。如預(yù)計蛋白濃度太高或太低，可適當(dāng) 10,適用于預(yù)計蛋白濃度為 28mg/ml為調(diào)整稀釋比 例）個蛋白標(biāo)準(zhǔn)液 S0S7）中加入上面配制的 8） （2再在第12條酶標(biāo)板的蛋白標(biāo)準(zhǔn)品孔（20 al 各 12 11 9 6 5 7 8 10 4 21 3S0用排 槍在 各孔 中加 入S0N1N1S1S1N2N2S2S2N3N3S3S3N4N4S4S4N5N5S5S5N6N6S6S6N7N7S7S7N8N8200 al BCA工作液，輕輕搖勻，37c放置30分鐘或室溫放置 2小時。A B C D E F G H6.（注意：每次測定時必須都做標(biāo)準(zhǔn)曲線。因為 BCA法測定時顏色會隨著時間的延長不斷加 深，且顯色反應(yīng)的速度和溫度有關(guān)，所以除非精確控制顯色反應(yīng)的時間和溫度，否則每次都做標(biāo)準(zhǔn)曲線。如果濃度較低，可適當(dāng)?shù)匮娱L孵育時間或在較高溫度孵育。）7 .用酶標(biāo)儀測定 562nm下標(biāo)準(zhǔn)品和樣本的吸光度。8 .用標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)量為橫座標(biāo)，用吸光度值A(chǔ)562為縱座標(biāo)，做標(biāo)準(zhǔn)曲線，用線形回歸計算公式Y(jié)=A X +