1、肝膽病醫院 堿性磷酸酶（ ALP ）測定（速率法）1：概述堿性磷酸酶英文簡稱 AKP 或 ALP ，是廣泛分布于人體各臟 器器官中，其中以肝臟為最多其次為腎臟，骨骼、腸、和胎 盤等組織 ,。它不是單一的酶，而是一組同功酶。目前已發現 有 AKP1 、 AKP2 、 AKP3 、 AKP4 、 AKP5 與 AKP6 六 種同功酶。 堿性磷酸酶 （ALP ）：是從牛腸粘膜或大腸桿菌中 提取。 從大腸桿菌提取的 AP 分子量為 80kD ，酶作用的最適 pH 為 8.0；用小牛腸黏膜提取的 AP 分子量為 l00kD ，最適 pH為96 般采用對硝基苯磷酸酯（p-NPP）作為底物。它 可制成片狀試

2、劑，使用方便。產物為黃色的對硝基酚，在 405nm 有吸收峰。用 NaOH 終止酶反應后，黃色可穩定一段 時間。 2 標本的收集新鮮無溶血標本， 血清或血漿樣本均不溶血。 血漿樣本只 能采用肝素或 EDTA 抗凝。樣本在 4攝氏度可穩定 7 天。采 血前病人應禁食 12 小時，采集靜脈 3ml, 待凝固后（最好放 在 37 攝氏度水浴箱內 45 分鐘）通常為加抗凝劑的血液在30-60 分鐘凝血析出血清。 3000r/min 離心 5-10 分鐘， 分離出 血清備用。不建議采用血漿標本。3：方法原理 樣本中的堿性磷酸酶催化水解磷酸對硝基苯酚，生成游離的 對硝基苯酚和磷酸，引起 405nm 處的光

3、吸收值升高，通 過檢測 405nm 處光吸收值上升的速率，可以測定堿性磷酸 酶的活力。4 劑來源，配置及儲存試劑來源：迪瑞 試劑配置：試劑一和試劑二均為液體試劑，可直接使 用。啟用后在 2-8 度可穩定 30 天。 若試劑混濁， 或以蒸餾水 為空白在 405nm 處的光吸收值低于 0.8A, 應予丟棄。試劑儲存：試劑避光儲存 2-8 攝氏度可穩定至標簽所示失效期。5 分析儀器CS-600B 全自動生化分析儀分析參數：樣品量 4 u/l 試劑量：第一試劑 200 u/l (R1)； 第二試劑 50 u/l測光點 2338 測定模式：速率法 正反應分析波長：405nm/505nm(主波長/副波長)

4、6 計算方法ALP(U/L)=( A/min*Tv*1000)(18.8*Sv*P)式中Tv= 總反應體積Sv=樣本體積18.8=NADH 在 405nm 處的毫摩爾消光系數P=比色杯光徑(cm)7 線性范圍：本實驗的線性范圍： 0850U/L8 參考范圍：男性： 1-12 歲 500 U/L1215 歲750 U/L女性： 1-12 歲500 U/L15 歲40-150 U/L9 失控控理1：立即重測同一質控品，如重測后結果仍不再允許范圍， 請進行下一步。2：新開一瓶質控品，重測失控項目，如新開的質控血清結 果正常，那么原來質控血清可能過期或在室溫防止時間過長 而變質，如結果仍不再允許范圍，

5、則進行下一步。3：進行儀器維護，重測失控項目。檢查儀器狀態，查明光 源是否更換，比色杯是否需要清洗或更換？對儀器進行清洗 等維護。另外還要檢查試劑，此時可更換試劑已查明原因。 如果結果仍不再允許范圍內，則進行下一步。4：重新校準。重測失控項目。用新的校準液校準儀器，排 除校準液的原因。5：請專家幫助。如果前五步都為能得到在控結果，那可能是儀器或試劑已查明原因，只有和儀器或試劑廠家聯系請求 他們的技術支援。10 注意事項1:試劑和樣本用量可根據不同儀器要求按比例改變。2：如測試結果超出線性范圍，樣本應稀釋后測試，調整因子數或將結果乘以稀釋倍數。3：結果的準確性儀器校正和測定溫度，時間的控制。4：由醫生根據臨床癥狀和其他實驗結果做出臨床診斷。11：臨床意義臨床上測定 ALP 主要用于骨骼、 肝膽系統疾病的診斷和鑒別 診斷， 尤其是黃疸的鑒別診斷。 對于不明原因的高 ALP 血清 水平，可測定同工酶以協助明確其器官來源。1. 生理性增高：兒童在生理性的骨骼發育期，堿性磷酸酶活力可比正常人高 12倍。處于生長期的青少年，以及孕婦和進食脂肪含量高的食物后均可以升高。2. 病理性升高： （ 1 ）骨骼疾病如佝僂病、軟骨病、骨惡性 腫瘤、惡性腫瘤