1、Forensic Toxicological Analysis第二章第二章 毒物分析基礎毒物分析基礎 第一節第一節 檢驗材料及分類檢驗材料及分類 法醫毒物分析檢材可大致分為：法醫毒物分析檢材可大致分為：體外檢材體外檢材體內檢材體內檢材 一、體外檢材一、體外檢材體外檢材是指未經人體消化吸收的檢驗材料。體外檢材是指未經人體消化吸收的檢驗材料。包括：包括：1.偵查所得或現場搜集的可疑物偵查所得或現場搜集的可疑物 2.吞服不久的嘔吐物或洗胃液吞服不久的嘔吐物或洗胃液 3.急死的胃內容（其中尚有未被消化吸收的急死的胃內容（其中尚有未被消化吸收的藥毒物）藥毒物）特點：特點：體外檢材中常尚有原形藥毒物存在。

2、體外檢材中常尚有原形藥毒物存在。體外檢材一般不能作為鑒定中毒的直接依據。體外檢材一般不能作為鑒定中毒的直接依據。注意：注意： 用來作為對照參比而采集的一些檢材有別于體外檢用來作為對照參比而采集的一些檢材有別于體外檢材，應稱之為對照檢材或參比檢材。材，應稱之為對照檢材或參比檢材。二、 體內檢材 體內檢材指取自活體或尸體的檢驗材料。體內檢材指取自活體或尸體的檢驗材料。 包括：包括：1.尿、血、唾液和其他體液尿、血、唾液和其他體液 2.各種內臟、毛發、肌肉、皮膚、骨骼等組織各種內臟、毛發、肌肉、皮膚、骨骼等組織 3.取自已埋尸體的組織或腐泥等。取自已埋尸體的組織或腐泥等。 特點：特點：體內檢材中一般

3、已無保持原有形態或性狀的藥毒物體內檢材中一般已無保持原有形態或性狀的藥毒物存在，經代謝后成為其他化合狀態，但也有原體藥毒物存在。存在，經代謝后成為其他化合狀態，但也有原體藥毒物存在。藥毒物或代謝產物在不同組織或體液中的量可有很大差別。藥毒物或代謝產物在不同組織或體液中的量可有很大差別。 三、體內檢材與體外檢材的比較體外檢材體外檢材體內檢材體內檢材定義定義體外，未經體內吸收、分布體外，未經體內吸收、分布和代謝和代謝體內，經體內吸收、分布體內，經體內吸收、分布和代謝和代謝類別類別種類多而雜種類多而雜種類相對固定種類相對固定數量數量視情形而異視情形而異相差不大相差不大毒物毒物 性狀性狀大多具有藥毒物

4、原體大多具有藥毒物原體無原有表觀性狀，甚至轉無原有表觀性狀，甚至轉化為代謝物化為代謝物分布分布有的均勻，有的不均勻有的均勻，有的不均勻在某一檢材內分布相對均在某一檢材內分布相對均勻勻毒物含量毒物含量相對較高，但不能反映總量相對較高，但不能反映總量含量較低，但可反映體內含量較低，但可反映體內總量總量檢驗結果意檢驗結果意義義一般不能作為鑒定中毒的直一般不能作為鑒定中毒的直接依據接依據一般作為鑒定中毒的直接一般作為鑒定中毒的直接依據依據第二節第二節 檢材處理檢材處理 一、檢材處置一、檢材處置1、稱量及標記、稱量及標記J每一檢材都必須稱量并加標簽標記每一檢材都必須稱量并加標簽標記J實驗過程中的留存物、

5、廢棄物及供試品等都實驗過程中的留存物、廢棄物及供試品等都應標記，檢驗完全結束才能丟棄。應標記，檢驗完全結束才能丟棄。2 2、留樣、選擇及取用、留樣、選擇及取用保留樣品量一般不得少于送驗檢材量的三分之一。不同檢材不能隨意混合。分取檢材應能以局部檢驗結果代表全部，分取部分就其外觀狀態、組成情況、均勻程度等盡可能與同一檢材的原有性狀相同。依據分析檢驗方法的需要（如靈敏度、檢測限），盡量節省檢材。優先選擇原則：疑點最大、可能得到線索最多、估計含量較多、檢驗較易著手、檢材量最多。二、檢材二、檢材分離凈化分離凈化 （一）目的：純化（二）基本原理 1、利用形態分離 適于某些體外檢材，采取分揀法。2、根據理化

6、性質分離、根據理化性質分離利用比重不同利用比重不同 1）分子或顆粒大小差異分子或顆粒大小差異2）揮發性能不同揮發性能不同3）溶解性能差異溶解性能差異4）化學性質不同化學性質不同5）分子被吸附性能差異分子被吸附性能差異6）離心、分液器離心、分液器方式過濾、離心、超濾膜、過濾、離心、超濾膜、透析膜、分子篩、大透析膜、分子篩、大孔樹脂等孔樹脂等水蒸汽蒸餾、解熱水蒸汽蒸餾、解熱揮發等揮發等沉淀、液液萃取或直沉淀、液液萃取或直接萃取接萃取綴合物水解、酶解；綴合物水解、酶解；金屬毒物硝化；沉淀金屬毒物硝化；沉淀蛋白等蛋白等固相萃取固相萃取檢材處理的基本步驟檢材處理的基本步驟分離1使待測物使待測物與大多數與

7、大多數雜質分開雜質分開2分離后進分離后進一步去除一步去除干擾物干擾物凈化3使分散在使分散在大體積的大體積的待測物分待測物分散在小體散在小體積中積中富集定容4將待測物溶將待測物溶于一定量的于一定量的準確體積的準確體積的溶液中，便溶液中，便于計量。于計量。綜合使用，沒有嚴格區分綜合使用，沒有嚴格區分 （三）方（三）方 法法法醫毒物分析中常用提取凈化方法示意圖法醫毒物分析中常用提取凈化方法示意圖毒物合成毒物天然藥毒物殺蟲藥殺鼠藥液-液萃取法液-固萃取法（1）氣體毒物揮發性毒物頂空法蒸餾法擴散法驅氣法（2）金屬毒物有機質破壞法等（3）水浸出無機毒物透析法（4）毒物分析中大多數化合物的前處理屬于第（毒物

8、分析中大多數化合物的前處理屬于第（1）類，）類，其基本操作流程如下：其基本操作流程如下： 預處理 分離、凈化衍生化（必要時）濃縮-定容1.預處理預處理檢材制備（1）固體固體:粉末粉末組織組織:勻漿勻漿堿性毒物堿性毒物： pHpKa 1-2；酸性毒物酸性毒物: pHpKa 1-2；不穩定化合物不穩定化合物: 緩沖液緩沖液調整pH值加入蛋白質沉淀劑或者加熱，透析，超濾 去除蛋白質 結合物解離酸水解酸水解酶水解酶水解（2）（3）（4）分子量較大的酸性陰離子（在酸側沉淀）：分子量較大的酸性陰離子（在酸側沉淀）： 鎢酸、磷鎢酸、三氯醋酸、高氯酸等鎢酸、磷鎢酸、三氯醋酸、高氯酸等 鎢酸適于酸中性毒物不適于

9、生物堿鎢酸適于酸中性毒物不適于生物堿重金屬鹽（在堿側沉淀）重金屬鹽（在堿側沉淀）高濃度中性鹽（脫水鹽析）硫酸銨只能用于高濃度中性鹽（脫水鹽析）硫酸銨只能用于堿性毒物不能用于酸中性毒物堿性毒物不能用于酸中性毒物有機溶劑（變性沉淀）：適于新鮮檢材有機溶劑（變性沉淀）：適于新鮮檢材常用蛋白質沉淀劑：結合物的解離：結合物的解離： 適于蛋白結合率較高或其它結合度高的藥毒適于蛋白結合率較高或其它結合度高的藥毒物。物。 酸水解：酸水解：藥物易分解藥物易分解合適酸堿度、溫度、水解時間合適酸堿度、溫度、水解時間 酶水解：酶水解：藥物較穩定藥物較穩定合適酸堿度、室溫（體溫）合適酸堿度、室溫（體溫）-葡糖醛酸苷酶、

10、硫酸脂酶等葡糖醛酸苷酶、硫酸脂酶等水解與酶解的比較水解與酶解的比較OOONCH3OOHOHOHOHO6-acetyl-morphine-3-glucuronideCCH3O水解OHOOHNCH3OOONCH3OOHOHOHOHO6-acetyl-morphine-3-glucuronideCCH3O酶解CCH3OOHOONCH3morphine6-acetyl-morphine原理：利用待測物在互不相溶的兩種溶劑之中的溶解度 差異，使待測物從一種溶劑轉移至另一種溶劑中（1 1）分配比（distribution coefficient)distribution coefficient)和萃取效率

11、分配比：D=CD=C0 0/C/CA A D D與溶質、溶劑、溫度、溶質存在狀態（濃度）有關 萃取率：fn=1-VAn/(VA+DV0)n萃取原則：少量多次2.2.液液萃取( (liquid-liquid extraction,LLE)liquid-liquid extraction,LLE)水相：藥毒物轉移到水相并以有利萃取形式存在（pHpH） 注意需先沉淀蛋白、除油脂、調節酸堿度有機相：沸點不高的溶解度大的單一或混合溶劑 萃取方式： 一次，多次或連續萃取 破乳：靜置、鹽析、加破乳劑、適當加熱、高速離心 萃取液：脫水，無水硫酸鈉 （2 2）萃取方法：先制成水溶液再萃取）萃取方法：先制成水溶液

12、再萃取（3 3）改良）改良StatsStats一一OttoOtto法法 改良改良StatsStats一一OttoOtto法法優點：優點：系統分析（方向不明，目前常用于開棺檢材）系統分析（方向不明，目前常用于開棺檢材）缺點：缺點：檢材用量大、過程繁瑣、回收率低檢材用量大、過程繁瑣、回收率低改進：改進：以此為基礎的各種改良法以此為基礎的各種改良法注意：注意：分子量大的堿性物質在酸性下有可能分子量大的堿性物質在酸性下有可能 形成離子對，在氯仿中有一定溶解度，形成離子對，在氯仿中有一定溶解度， 不宜用氯仿萃取不宜用氯仿萃取 3.3.固相萃取固相萃取原理：原理：利用待測物與雜質固定相和洗脫液利用待測物與

13、雜質固定相和洗脫液之間吸附、分配、分子大小差異等進行之間吸附、分配、分子大小差異等進行分離分離類型：類型：正相、反相、離子交換等正相、反相、離子交換等（或液固萃取，liquid-solid extraction） （solid phase extraction,SPE)（1）正相液固萃取）正相液固萃取機理：固定相極性大于洗脫液機理：固定相極性大于洗脫液固定相：常用硅膠，鍵合極性丙氰基、二醇基、丙氨基固定相：常用硅膠，鍵合極性丙氰基、二醇基、丙氨基（2） 反相液固萃取反相液固萃取機理：固定相極性小于洗脫液機理：固定相極性小于洗脫液固定相：常用硅膠，鍵合非或弱極性的固定相：常用硅膠，鍵合非或弱極性

14、的C Cl8 l8 、C C8 8、苯基等苯基等（3）離子交換固相萃取）離子交換固相萃取機理：易帶電荷待測物質與固定相形成離子對機理：易帶電荷待測物質與固定相形成離子對類型：類型： 陽離子陽離子 陰離子陰離子 磺酸基團磺酸基團 季銨鹽季銨鹽反相萃取基本步驟：反相萃取基本步驟：（1 1）柱活化：水，甲醇洗滌）柱活化：水，甲醇洗滌（2 2）待測樣品處理：調節）待測樣品處理：調節pH,pH,去顆粒性物質去顆粒性物質 （D D1010-3-3）（3 3）樣品過柱：待測物被保留樣品過柱：待測物被保留（4 4）洗滌）洗滌: :洗棄雜質洗棄雜質（5 5）洗脫）洗脫: :有機溶劑洗脫出待測物有機溶劑洗脫出待測

15、物,(,(D10D10-3-3)固相萃取裝置固相萃取裝置加壓負壓常見操作方式：常見操作方式：待測物隨洗脫液洗脫，雜質保留，如柱層析凈化。雜質隨清洗液被清洗，待測物保留，待測物再用洗脫液洗脫，如反相萃取。雜質和待測物均保留，待測物再用選擇性洗脫液洗脫。 固相萃取優點無需大量溶劑簡便不易乳化缺點價格高組織樣本易堵塞固定相 萃取針萃取針 插入插入水溶液（尿、血清）水溶液（尿、血清） 直接進氣相色譜直接進氣相色譜SPME技術于技術于1990年由加拿大年由加拿大Waterlop 大學大學Pawliszyn首創，首創，被稱為樣品處理技術上的一次革命，集采樣、萃取、濃縮、被稱為樣品處理技術上的一次革命，集采

16、樣、萃取、濃縮、進樣于一體，實現了真正意義上的無溶劑萃取技術。進樣于一體，實現了真正意義上的無溶劑萃取技術。4.4.固相微萃取（solid phase micro extration,SPME)solid phase micro extration,SPME)固相微萃取固相微萃取(SPME) 特點特點簡單：操作方便，只需按動手柄。 快速：可以節省樣品預處理的70%時間。 經濟：無需溶劑及注射器，每個萃取頭可以反復使用50次以上。（最多達200次左右） 無毒害：由于無需溶劑，使操作人員的工作環境得到改善，同時使實驗室排出的毒液減低到最小量，為我們生活的環境作出貢獻。 適用性強：可以隨身攜帶，現場

17、采樣，并可在任何型號的GC（或HPLC）儀器上直接進樣。SPME組成組成SPME裝置由兩部分構成，手柄（Holder）和萃取頭（Fiber）狀似一支色譜注射器。 手柄：手柄：用于按裝萃取頭，可永久使用。用于按裝萃取頭，可永久使用。萃取頭：萃取頭：是一根涂不同色譜固定相或吸附劑的熔融石英纖維，接不銹是一根涂不同色譜固定相或吸附劑的熔融石英纖維，接不銹鋼絲，外套細的不銹鋼針管（保護石英纖維不被折斷及進樣），纖維鋼絲，外套細的不銹鋼針管（保護石英纖維不被折斷及進樣），纖維頭可在針管內伸縮。頭可在針管內伸縮。 原理原理 當被分析物在萃取頭與萃取體系之間達到平衡，分析物與萃取頭之間有一分配系數K，吸附于

18、萃取頭上分析物的量（N）與萃取體系中分析物的初始濃度（C0）、萃取頭體積Vf 有如下關系： N=KVf C0 其中K值取決于萃取頭一定的固定相類型、分析物的性質，Vf 為常數，因此N與C0之間存在線性關系。這是SPME的定量基礎。SPME操作步驟操作步驟 樣品萃取樣品萃取 ：1. 1. 將將SPMESPME針管穿透樣品瓶隔墊，針管穿透樣品瓶隔墊，插入瓶中。插入瓶中。2. 2. 推手柄桿使纖維頭伸出針管，推手柄桿使纖維頭伸出針管，纖維頭可以浸入水溶液中（浸纖維頭可以浸入水溶液中（浸入方式）或置于樣品上部空間入方式）或置于樣品上部空間（頂空方式），萃取時間大約（頂空方式），萃取時間大約2-302-

19、30分鐘。分鐘。3. 3. 縮回纖維頭，然后將針管退縮回纖維頭，然后將針管退出樣品瓶。出樣品瓶。SPME-GC實驗過程實驗過程三、其他前處理技術三、其他前處理技術（一）化學衍生化技術氣相衍生化目的：增加揮發性增加揮發性加強熱穩定性加強熱穩定性改善色譜行為改善色譜行為提高靈敏度、提高靈敏度、加強選擇性加強選擇性衍生化目的：適應分析檢測的需要液相衍生化目的：提高靈敏度提高靈敏度改善色譜行為改善色譜行為衍生試劑要求： 反應迅速，條件易實現反應迅速，條件易實現 反應定量進行反應定量進行反應副反應少，效率高反應副反應少，效率高過量衍生試劑易與待測物衍生產物分離過量衍生試劑易與待測物衍生產物分離衍生試劑易

20、獲得衍生試劑易獲得衍生化方式：氣相：柱前、柱上氣相：柱前、柱上液相：柱前、柱后液相：柱前、柱后（1 1）硅烷化反應）硅烷化反應 -OH -O-SiR3 -COOH -COO-SiR3 -SH + R3Si-X -S-SiR3 -NH2 -NH-SiR3 -NH =N-SiR3 最常用衍生化試劑：BSTFA、MSTFA1.氣相色譜中的常用衍生化方法（2 2）酰化反應）酰化反應 適用對象：適用對象： -OH、 -SH 、-NH2 酸酐法：酸酐法：酸酐（吡啶或四氫呋喃溶劑）鹵代酰基法鹵代酰基法：乙酰氯，苯甲酰氯，三氟乙酸酐，七氟丁酸酐，三氟乙酰咪唑，和七氟丁酰咪唑等 （3 3）酯化反應）酯化反應 適

21、用化合物：-COOH方法：重氮烷烴法，鹵化硼催化法，氫氧化銨鹽分解法和無機酸催化法。RCOOH+CH2N2RCOOCH3+N2RCOOH+CH3OHRCOOCH3+H2ORCOOH+(CH3)4NOH RCOON(CH3)4+H2ORCOOH+CH3OHRCOOCH3+H2O （4 4）烷基化反應）烷基化反應 2 高效液相中的常用衍生化方法高效液相中的常用衍生化方法 -NH-NH2 2，-NH -NH 對硝基苯對硝基苯甲酰氯甲酰氯對甲基苯對甲基苯磺酰氯磺酰氯異硫氰酸異硫氰酸苯酯苯酯2 2, ,4-4-二硝二硝基氟苯基氟苯-COOH -COOH 對溴代苯甲對溴代苯甲酰甲基溴酰甲基溴萘酰甲基萘酰甲

22、基溴溴-OH-OH2 2, ,5-5-二硝二硝基甲酰氯基甲酰氯-CHO-CHO，-C=O-C=O2 2, ,4-4-二硝二硝基苯肼基苯肼（1）紫外-可見衍生化（2）熒光衍生化）熒光衍生化 衍生化試劑有丹酰氯，熒光胺，衍生化試劑有丹酰氯，熒光胺，芴代甲氧苯酰氯，吡哆醛及香豆素芴代甲氧苯酰氯，吡哆醛及香豆素等。等。歷史：歷史：snyder，1970年提出并使用適用儀器：適用儀器：高效液相色譜 氣相色譜原理：原理：色譜柱一般分為預處理柱（也稱富集柱） 和分析柱。通過閥件實現柱的切換，使樣 品先在預柱上進行痕量富集，并除去大量 雜質，然后進入分析柱進行分離分析。優點：優點：在線處理樣本、速度快、操作簡

23、單（二）柱切換技術第三節第三節 定性與定量定性與定量 1、 定性分析 定性分析即確證檢材中是否含有某定性分析即確證檢材中是否含有某種或某幾種藥毒物，通常亦稱檢識或檢出。種或某幾種藥毒物，通常亦稱檢識或檢出。檢出對象也包括藥毒物在體內的代謝物，有檢出對象也包括藥毒物在體內的代謝物，有時也包括一些需要確證的非毒性化學物品。時也包括一些需要確證的非毒性化學物品。 定性分析的關鍵是檢驗結果的可靠性，定性分析的關鍵是檢驗結果的可靠性，因此應選擇合適的方法，反復驗證。檢驗中因此應選擇合適的方法，反復驗證。檢驗中應避免因干擾作用而出現的假陽性或假陰性應避免因干擾作用而出現的假陽性或假陰性結果。結果。 2、定

24、量分析 定量分析即確定某種或某幾種藥毒物在檢材的定量分析即確定某種或某幾種藥毒物在檢材的含量，通常也稱之為含量測定。含量，通常也稱之為含量測定。 定量分析的前提是必須先要明確和肯定是何種定量分析的前提是必須先要明確和肯定是何種藥毒物，也就是先定性分析，然后才進行定量分析。藥毒物，也就是先定性分析，然后才進行定量分析。并非所有的毒物分析都需含量測定。一般為了必須并非所有的毒物分析都需含量測定。一般為了必須驗證是否為正常人體組分或藥物是否超劑量、以及驗證是否為正常人體組分或藥物是否超劑量、以及用含量來區分事件的性質、當事人法律責任等時，用含量來區分事件的性質、當事人法律責任等時，才根據需要進行定量

25、分析。才根據需要進行定量分析。常用計量單位：常用計量單位： %； mg/100mL、mg/g、g/g、ng/g、pg/g；mg/mL、g/mL、ng/mL、pg/mL等。外標法：配置一系列已知濃度的標準物或對照品溶液， 制定響應值與濃度之間對應關系的工作曲線， 由樣品中待測物的響應值反求出其濃度。內標法：由已知濃度內標物和標準物與其對應響應值之 間的比例關系，通過測定樣品中已知濃度內標 物和未知濃度待測物的響應值，計算出待測物 濃度。定量結果的解釋：定量結果的解釋： 與正常值相比較 與治療濃度相比較，結合臨床癥狀與尸解特征 慎重使用相關數據庫（僅供參考）定量分析方法：1.常見毒（藥）物臨床治療

26、血液濃度、中毒例血液常見毒（藥）物臨床治療血液濃度、中毒例血液濃度、中毒死亡血液濃度以及人體內半衰期濃度、中毒死亡血液濃度以及人體內半衰期毒（藥）物中毒鑒定理論與實踐典型案例分析毒（藥）物中毒鑒定理論與實踐典型案例分析 司法部司法鑒定科學技術研究所司法部司法鑒定科學技術研究所2.Drug and chemical blood-lever data 2001 Charles L. Winke,et al.Forensic Science International 122 (2001),107-123相關數據庫第四節第四節 分析方法類別分析方法類別 一、形態學方法 主要是適用于體外檢材的辨認，包

27、主要是適用于體外檢材的辨認，包括形狀、大小、色澤、氣味、劑量、濃度、括形狀、大小、色澤、氣味、劑量、濃度、包裝等方面的特征，有時尚需借助放大鏡包裝等方面的特征，有時尚需借助放大鏡或顯微鏡來觀察。或顯微鏡來觀察。（1）急性毒性實驗急性毒性實驗將檢驗材料喂飼或灌注小動物，觀察動物是將檢驗材料喂飼或灌注小動物，觀察動物是否有明顯的中毒反應或于短時間內死亡。適用于否有明顯的中毒反應或于短時間內死亡。適用于方向不明，檢材充足的情況。方向不明，檢材充足的情況。（2）毒效實驗）毒效實驗利用某些藥毒物具有易于觀察的特殊毒性效利用某些藥毒物具有易于觀察的特殊毒性效應來進行實驗的方法。應來進行實驗的方法。二、動物

28、實驗方法二、動物實驗方法 利用毒物的毒性作用而采用動物進行的簡利用毒物的毒性作用而采用動物進行的簡易實驗方法。易實驗方法。三三.免疫法免疫法（一）基本概念1.1. 抗體：抗體：分子結構上具有能專一識別藥物的特分子結構上具有能專一識別藥物的特征性基團或結構的某種特殊蛋白質。征性基團或結構的某種特殊蛋白質。2.2. 標記毒藥物：標記毒藥物：指加有標記的被檢測物對照品指加有標記的被檢測物對照品或一定量性質與被測毒藥物相同的加有標記或一定量性質與被測毒藥物相同的加有標記的物質。的物質。3.3. 非標記毒藥物：非標記毒藥物：即為毒藥物標準品或待檢藥即為毒藥物標準品或待檢藥毒物。毒物。（二）基本原理（三）

29、方法類別毒物分析常用膠體免疫金法檢測試劑盒：原理：原理：采用高度特異性的抗原抗體反應及免疫層采用高度特異性的抗原抗體反應及免疫層析技術，使單克隆抗體競爭結合被檢藥物偶聯物和析技術，使單克隆抗體競爭結合被檢藥物偶聯物和樣品中可能含有藥物。適于尿、血清。樣品中可能含有藥物。適于尿、血清。操作示意圖操作示意圖（四）交叉免疫反應 與待測毒物結構相近的類似毒物或化與待測毒物結構相近的類似毒物或化合物，在毒物同抗體的結合反應中常會引合物，在毒物同抗體的結合反應中常會引起干擾而產生的非專一性結合反應，稱為起干擾而產生的非專一性結合反應，稱為交叉免疫反應。交叉免疫反應。 試劑盒在應用前必須先作交叉免疫實試劑盒

30、在應用前必須先作交叉免疫實驗，評價其特異性。驗，評價其特異性。（一）物理常數的測定 測熔點、沸點、折光率等，但測定物理常數測熔點、沸點、折光率等，但測定物理常數只對純物質的定性具有意義。只對純物質的定性具有意義。四.理化分析法（二）微量化學方法（二）微量化學方法 利用化學反應的微量檢驗方法。 1.微量顯色反應微量顯色反應加入試劑觀察顏色變化，判斷是否存在被檢物或根據顏色的深加入試劑觀察顏色變化，判斷是否存在被檢物或根據顏色的深淺程度，大致測量被檢物的量。淺程度，大致測量被檢物的量。2.微量沉淀反應與顯微結晶實驗微量沉淀反應與顯微結晶實驗沉淀反應即加入沉淀劑生成難溶性化合物從溶液中析出的化學沉淀

31、反應即加入沉淀劑生成難溶性化合物從溶液中析出的化學反應。有些沉淀及其他方法得到的結晶物質，可在顯微鏡下觀察到反應。有些沉淀及其他方法得到的結晶物質，可在顯微鏡下觀察到結晶的形狀和色澤，稱為顯微結晶實驗。結晶的形狀和色澤，稱為顯微結晶實驗。五五.儀器分析方法儀器分析方法目前儀器分析已被廣泛應用于各領域中的研目前儀器分析已被廣泛應用于各領域中的研究工作和實踐工作。法醫毒物分析應用較多的儀究工作和實踐工作。法醫毒物分析應用較多的儀器分析法是光譜分析和色譜分析、色質聯用分析器分析法是光譜分析和色譜分析、色質聯用分析等。等。 使用儀器分析方法多數情況下，須檢材處理使用儀器分析方法多數情況下，須檢材處理除

32、去雜質，制備成檢液后才能進行儀器檢測。除去雜質，制備成檢液后才能進行儀器檢測。目前也有直接用檢材進行分析的藥物分析儀，目前也有直接用檢材進行分析的藥物分析儀，BIO-RADBIO-RAD公司的公司的REMEDYREMEDY系統，分析檢材僅適合于系統，分析檢材僅適合于尿液、血清等。尿液、血清等。第五節第五節 各類分析方法的效用各類分析方法的效用 一、分類效用 根據實驗結果判別被檢測物的類別的試根據實驗結果判別被檢測物的類別的試驗效應，所用方法亦稱類別實驗。毒物分析驗效應，所用方法亦稱類別實驗。毒物分析中所應用的實驗方法絕大多數是具有分類效中所應用的實驗方法絕大多數是具有分類效用的。檢材根據分類效

33、用經過處理后的檢液，用的。檢材根據分類效用經過處理后的檢液，進行檢驗時還需用類別實驗，根據其使用的進行檢驗時還需用類別實驗，根據其使用的場合或目的不同又可分為預實驗和篩選實驗。場合或目的不同又可分為預實驗和篩選實驗。（一）預實驗：（一）預實驗： 當檢驗方向不明時，用一些簡單的試驗當檢驗方向不明時，用一些簡單的試驗來探索是否具有某些類別的藥毒物存在的可來探索是否具有某些類別的藥毒物存在的可能性。能性。（二）篩選實驗（二）篩選實驗篩選實驗是在有比較方向的情況下應用篩選實驗是在有比較方向的情況下應用的類別實驗，通過陰性結果排除而進一步縮的類別實驗，通過陰性結果排除而進一步縮小檢測范圍。小檢測范圍。

34、二、確證效用 根據實驗結果可以準確無誤地判斷是否含有某藥毒物的試驗效果稱確證效用，具有確證效用的試驗稱為確證實驗。（一）專屬實驗：是被檢物特有的屬性而可確定決不可能是另一種物質的檢驗方法。（二）鑒別實驗：鑒別試驗是指從形狀很相似的物品或性質相近的物質中區分是哪一種的試驗。第六節第六節 毒物分析可靠性控制毒物分析可靠性控制 采取措施保證分析工作的可靠性對毒物分析是非常重要的，尤其是在采取措施保證分析工作的可靠性對毒物分析是非常重要的，尤其是在建立新方法時，更應注重對方法效能的驗證。建立新方法時，更應注重對方法效能的驗證。 一、驗證分析方法效能的主要項目一、驗證分析方法效能的主要項目（一）純度和回

35、收率（收得率）（一）純度和回收率（收得率） 純度表明經分離凈化后檢液中雜質的純度表明經分離凈化后檢液中雜質的含量多少，雜質含量越低，則純度越高。純含量多少，雜質含量越低，則純度越高。純度越高，對檢測有利，但會損失回收率。法度越高，對檢測有利，但會損失回收率。法醫毒物分析中，不宜過分追求高純度。醫毒物分析中，不宜過分追求高純度。 回收率是指經分離凈化后所測得含量與檢回收率是指經分離凈化后所測得含量與檢材中原有的實際含量之間的比值。材中原有的實際含量之間的比值。1. 認證準確性：檢材中確實存在，證實不是別的物質，而且必須是檢材中原本存在的。2. 測值準確性：包括精密度和準確度。準確度是多次測得值與

36、真實值之間相互接近的程度。精密度是多次測得值之間相互接近的程度，精密度常以多次測量的相對標準偏差（RSD）表示，其值越小，精密度越高，重現性也越好。1n)XX(SD2iXSDRSD （二）方法的準確性評價指標：靈敏度與檢測限 靈敏度靈敏度是響應值隨被測物含量變化而變是響應值隨被測物含量變化而變化，二者變量之間比值。其值越大，分析化，二者變量之間比值。其值越大，分析方法越靈敏。方法越靈敏。檢測限檢測限是達到一定信噪比是達到一定信噪比（S/NS/N）時，能檢出物質的最小量或最低時，能檢出物質的最小量或最低濃度。濃度。一般為一般為S/N=3S/N=3。（三）分析方法的靈敏性（四）線性與檢測范圍（四）

37、線性與檢測范圍 定性檢測和定量分析有其適宜的濃度檢定性檢測和定量分析有其適宜的濃度檢測范圍，在定量檢測時也常稱之為線性范圍。測范圍，在定量檢測時也常稱之為線性范圍。當濃度超出范圍時，定性檢測的認定不能明當濃度超出范圍時，定性檢測的認定不能明確；定量測定時，則線性關系受影響而使測確；定量測定時，則線性關系受影響而使測定結果不準確。定結果不準確。一般要求回歸線包括一般要求回歸線包括5 57 7個個濃度，線性相關系數濃度，線性相關系數不低于不低于0.990.99。（五）專屬性（五）專屬性 專屬性和方法的準確性是分析方法專屬性和方法的準確性是分析方法可靠性的主要指標。可靠性的主要指標。（六）再現性（六

38、）再現性 相同分析方法在不同實驗室操作，相同分析方法在不同實驗室操作，分析結果的穩定性。分析結果的穩定性。 二、可靠性論證的實施方法二、可靠性論證的實施方法（一）模擬實驗（一）模擬實驗1.動物模擬試驗動物模擬試驗 選用合適的動物，以適量藥毒物使之中毒，選用合適的動物，以適量藥毒物使之中毒，研究其在體內的吸收分布和代謝等情況，對研究其在體內的吸收分布和代謝等情況，對檢驗方法予以研究與驗證。檢驗方法予以研究與驗證。2.檢材模擬試驗檢材模擬試驗 選用與實際檢材相同或基本相近的材料選用與實際檢材相同或基本相近的材料為模擬檢材，對檢驗方法進行驗證的試驗為模擬檢材，對檢驗方法進行驗證的試驗。不加入已知欲檢

39、測物，其他所用檢驗材料、試不加入已知欲檢測物，其他所用檢驗材料、試劑、器皿、分析方法等與被檢物的檢驗完全相同，劑、器皿、分析方法等與被檢物的檢驗完全相同，也稱空白對照試驗。也稱空白對照試驗。（1）單純空白實驗）單純空白實驗 ：指不用檢材的空白試驗。指不用檢材的空白試驗。單純驗證試劑和操作的可靠性。單純驗證試劑和操作的可靠性。（2）模擬空白實驗）模擬空白實驗 ：用模擬材料作檢材的空用模擬材料作檢材的空白試驗。主要用于驗證是否有來自檢材的干擾因素白試驗。主要用于驗證是否有來自檢材的干擾因素或存在可設法排除的干擾。或存在可設法排除的干擾。（3）干擾物空白實驗）干擾物空白實驗 ：在上述兩種空白試驗在上

40、述兩種空白試驗中預先加入性質與欲檢測物相似或可能產生干擾的中預先加入性質與欲檢測物相似或可能產生干擾的物質，以驗證檢驗方法能否區分添加物與欲檢測物。物質，以驗證檢驗方法能否區分添加物與欲檢測物。 （二）空白試驗 （三）已知對照實驗 在上述空白試驗中預先加入一定量欲檢測物在上述空白試驗中預先加入一定量欲檢測物的已知品后再實行驗證的試驗。的已知品后再實行驗證的試驗。單純已知品實驗單純已知品實驗已知品模擬檢材實驗已知品模擬檢材實驗干擾物存在的已知品模擬檢材實驗干擾物存在的已知品模擬檢材實驗 1.定性驗證定性驗證 加入已知品觀察試驗結果出現應有的加入已知品觀察試驗結果出現應有的特征性現象以驗證檢驗的可

41、靠性，逐步減少特征性現象以驗證檢驗的可靠性，逐步減少量直至不出現識別特征以測知檢驗的檢測限。量直至不出現識別特征以測知檢驗的檢測限。 2.定量驗證定量驗證 以空白溶劑為零，再將已知品溶液制以空白溶劑為零，再將已知品溶液制備成系列溶液進行測定，考察測得值與已知備成系列溶液進行測定，考察測得值與已知量之間的函數關系是否適于測定，及確定適量之間的函數關系是否適于測定，及確定適用的檢測范圍和檢測限。用的檢測范圍和檢測限。 3.回收實驗 在模擬材料中按適當比例加入一定量在模擬材料中按適當比例加入一定量欲檢測物的已知品，按預定的方法進行處理欲檢測物的已知品，按預定的方法進行處理并測定，測得值與加入量的比值

42、即為回收率。并測定，測得值與加入量的比值即為回收率。 對于毒物分析，體內檢材中藥毒物的對于毒物分析，體內檢材中藥毒物的含量較低，不易得到很高的精密度和回收率，含量較低，不易得到很高的精密度和回收率，一般而言，回收率應不低于一般而言，回收率應不低于60%60%，相對標準，相對標準偏差不超過偏差不超過10%10%。（四）隨行標準參比法（四）隨行標準參比法 選擇一種適合的純化合物，添加于實際檢材中，選擇一種適合的純化合物，添加于實際檢材中，與被檢物一起經過整個處理過程及檢驗，同被分別與被檢物一起經過整個處理過程及檢驗，同被分別檢出的方法稱為隨行參比法。檢出的方法稱為隨行參比法。 根據參比物的回收情況

43、可觀測實際檢測方法的根據參比物的回收情況可觀測實際檢測方法的回收率。如參比物的測得值可用作被測物測定值的回收率。如參比物的測得值可用作被測物測定值的參比依據時，參比物具有檢材內部標準的作用，稱參比依據時，參比物具有檢材內部標準的作用，稱為內標。為內標。 我國法醫毒物分析實驗室的現狀：我國法醫毒物分析實驗室的現狀： 操作程序尚未規范化。操作程序尚未規范化。 技術方法尚未標準化。技術方法尚未標準化。 鑒定質量控制體系尚未建立，不同實驗鑒定質量控制體系尚未建立，不同實驗 室及不同操作人員之間操作隨意性大室及不同操作人員之間操作隨意性大。三、毒物分析實驗室規范管理和質量控制1.1.專家、技術人員資格認證專家、技術人員資格認證2.2.實驗室認證實驗室認證毒物分析實驗室規范管理和質量控制人員人員1設施與環境設施與環境2儀器與設備儀器與設備3標準操作步驟標準操作步驟41. 管理人員管理人員2.鑒定人員鑒定人員3.技術員技術員1.監測、控制和記錄環境條件監測、控制和記錄環境條件2.不相容活動區域隔離不相容活動區域隔離3.檢測區域進入和使用控制檢測區域進入