1、小鼠髓過氧化物酶（MPO）1聯免疫分析（ELISA）試劑盒使用說明書本試劑僅供研究使用目的：本試劑盒用于測定小鼠血清，血漿及相關液體樣本中髓過氧化物酶（MPO）的含量。試劑盒性能：1 .樣品線性回歸與預期濃度相關系數R值為0.95以上。2 .批內與批見應分別小于 9%和11% 檢測范圍：請來電咨詢 保存條件及有效期： 1.試劑盒保存：；2-8 C。 2.有效期：6個月 注意事項：1 .試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。2 .濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。3 .各步加樣均應使用加樣

2、器，并經常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間最好 控制在5分鐘內，如標本數量多，推薦使用排槍加樣。4 .請每次測定的同時做標準曲線，最好做復孔。如標本中待測物質含量過高（樣本OD值大于標準品孔第一孔的 OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數（ n倍）后再測定，計 算時請最后乘以總稀釋倍數（XnX5）o5 .封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。6 .底物請避光保存。7 .嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準8 .所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。9 .本試劑不同批號組分不得混用。10 .如與英文說明書有異，以英文說明書為準。 實驗原理：本試劑盒應用雙抗

3、體夾心法測定標本中小鼠髓過氧化物酶（MPO）水平。用純化的小鼠髓過氧化物酶（MPO）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入髓過氧化 物酶（MPO）,再與HRP標記的髓過氧化物酶（MPO）抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合 物，經過徹底洗滌后加底物 TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作 用下轉化成最終的黃色。 顏色的深淺和樣品中的髓過氧化物酶（MPO）呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中小鼠髓過氧化物酶（MPO）濃度。樣本處理及要求：1 .血清：室溫血液自然凝固 10-20分鐘，離心20分鐘左右（2000-3

4、000轉/分）。仔細收集上 清，保存過程中如出現沉淀，應再次離心。2 .血漿：應根據標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合 10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應該再次 離，3 .尿液：用無菌管收集，離心 20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清，保存過程 中如有沉淀形成，應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。4 .細胞培養上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心 20分鐘左右（2000-3000轉/ 分）。仔細收集上清。檢測細胞內的成份時，用 PBS （PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞 濃度達到

5、100萬/ml左右。通過反復凍融，以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心 20分 鐘左右（2000-3000車t/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。5 .組織標本：切割標本后，稱取重量。加入一定量的PBS, PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化后仍然保持2-8C的溫度。加入一定量的PBS （PH7.4）,用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。6 .標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上 進行試驗，可將標本放于 -20 C保存，但應避免反復凍融 .7

6、 .不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。 試劑盒組成：試劑盒組成48孔配置96孔配置保存說明書1份1份封板膜2 片(48)2 片(96)密封袋1個1個酶標包被板1X481X 962-8 C保存標準品：2700ng/L0.5ml X 1 瓶0.5ml X 1 瓶2-8 C保存標準品稀釋液1.5ml X 1 瓶1.5ml X 1 瓶2-8 C保存酶標試劑3 ml X 1 瓶6 ml X 1 瓶2-8 C保存樣品稀釋液3 ml X 1 瓶6 ml x 1 瓶2-8 C保存顯色劑A液3 ml x 1 瓶6 ml x 1 瓶2-8 C保存顯色劑B液3 ml x 1 瓶

7、6 ml x 1 瓶2-8 C保存終止液3ml x 1 瓶6ml x 1 瓶2-8 C保存濃縮洗滌液(20ml X 20 倍)X 1 瓶(20ml x 30 倍)x 1 瓶2-8 C保存操作步驟1 .標準品的稀釋與加樣：在酶標包被板上設標準品孔10孔，在第一、第二孔中分別加標準品100M,然后在第一、第二孔中加標準品稀釋液50 4,混勻；然后從第一孔、第二孔中各取100 d分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50小混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取50M棄掉，再各取50 M分別加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul,混勻；混勻后從第五、第六孔中各

8、取50 M分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50人混勻后從第七、第八孔中分別取50 M加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50 口，混勻后從第九第十孔中各取50 M棄掉。（稀釋后各孔加樣量都為50 M,濃度分別為 1800ng/L, 1200ng/L , 600ng/L , 300ng/L , 150ng/L）。2 .加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40 M,然后再加待測樣品10 U （樣 品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動

9、混 勻。3 .溫育:用封板膜封板后置 37 c溫育30分鐘。4 .配液：將30 （48T的20倍）倍濃縮洗滌液用蒸儲水30 （48T的20倍）倍稀釋后備用。5 .洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30秒后棄去，如此 重復5次，拍干。6 .加酶：每孔加入酶標試劑 50 4,空白孔除外。7 .溫育:操作同3。8 .洗滌：操作同5。9 . 顯色：每孔先加入顯色劑 A50U,再加入顯色劑 B50M,輕輕震蕩混勻，37c避光顯色 15分鐘.10 .終止：每孔加終止液 50此 終止反應（此時藍色立轉黃色）。11 .測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（ OD值）。測定應在加終止 液后