1、醫療污染物排放標準Discharge standard of medical pollutants（山東省地方標準DB37/ 596 2006）醫療污染物排放標準Discharge standard of medical pollutants（山東省地方標準DB37/ 596 2006）2006-01-04發布2006-01-10實施山東省環境保護局山東省質量技術監督局發布、八 刖 言本標準的全部技術內容為強制性。為了貫徹中華人民共和國環境保護法、中華人民共和國水污染防治法中華人民共和國海洋環境保護法、中華人民共和國大氣污染防治法、中華人民共和國固體廢物污染環境防治法、中華人民共和國傳染病防治

2、法以及醫療廢物管理條例，促進醫療廢物處置系統的建設和管理，加強醫 療衛生機構廢物的排放控制，保障人民身體健康，維護良好的生態環境。特制定本地方標準。本標準的附錄A、附錄B、附錄C、附錄D為規范性附錄。本標準由山東省環境保護局提出。本標準委托濟南市環境工程設計院、濟南市環保局直屬分局起草。本標準主要起草人：張成志、高旭光、遲智香、張建國、周蓬、徐志浩本標準于2006年1月4日首次發布。本標準由山東省環境保護局負責解釋。醫療污染物排放標準1范圍本標準規定了山東省醫療衛生機構醫療污水排放和醫療廢物處置（控制）的污染物限值。本標準適用于山東省醫療衛生機構醫療污水排放和醫療廢物處置（控制）的管理，也適用

3、于獸醫院的 污水和醫療廢物的排放管理。2規范性引用文件下列文件中的條款通過本標準的引用而成為本標準的條款。凡是注日期的引用文件，其隨后所有的修 改單（不包括勘誤的內容）或修訂版均不適用于本標準，然而，鼓勵根據本標準達成協議的各方研究是否 可使用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本適用于本標準。GB 3097海水水質標準GB 3838地表水環境質量標準GB 5085.3危險廢物鑒別標準浸出毒性鑒別GB 15981消毒與滅菌效果的評價方法與標準GB 15982醫院消毒衛生標準GB 18466醫療機構水污染物排放標準GB 18484危險廢物焚燒污染控制標準GB 18598危險廢物填

4、埋污染控制標準GB 18918城鎮污水處理廠污染物排放標準GB 19218醫療廢物焚燒爐技術要求（試行）HJ/T 91地表水和污水監測技術規范醫療廢物集中處置技術規范（試行） （環發2003206號）3術語及定義下列術語及定義適用于本標準。3.1醫療衛生機構從事與醫療、預防、保健以及其他相關活動的，由各級衛生行政主管部門負責管理或監管的單位。3.2醫療污水醫療機構門診、病房、手術室、各類檢驗室、病理解剖室、放射室、洗衣房、太平間等處排出的診療、 生活及糞便污水。當醫療機構其他污水與上述污水混合排出時一律視為醫療機構污水。3.3醫療廢物醫療衛生機構在醫療、預防、保健以及其他相關活動中產生的具有直

5、接或者間接感染性、毒性以及其 他危害性的廢物。具體分類名錄依照國家危險廢物名錄和國務院衛生行政主管部門和環境保護行政主 管部門共同制定的醫療廢物分類目錄執行。3.4醫療廢物集中處置中心具有環境保護行政主管部門頒發的醫療廢物處置資格的區域性醫療廢物集中處置單位。4技術內容4.1水污染物排放標準4.1.1處理要求4.1.1.1醫療衛生機構應將傳染病房的污水與其他污水分別收集。傳染病醫院（包括設傳染病房的綜合性醫院）應設專用化糞池，進行預消毒處理。4.1.1.2醫療衛生機構的各種特殊排水，如含重金屬廢水、含油廢水、洗印廢水等應單獨收集，分 別采取不同的預處理措施后排入醫療污水處理系統。4.1.1.3

6、同位素治療和診斷產生的放射性廢水，必須單獨收集處理。4.1.1.4醫療污水不得排入GB 3838中的I、II類水域和ID類水域的集中式生活飲用水地表水源地二級保護區、游泳區以及GB 3097中的一、二類海域。4.1.2排放要求4.1.2.1根據水污染物的來源及性質，將水污染物控制項目分為必測項目和選測項目兩類。必測項 目為環境保護行政主管部門為了保護水環境，在日常監測過程中必須監測的水污染物控制項目，主要包括影響水環境和污水處理系統一般處理工藝可以去除的基本控制項目及部分一類污染物，共15項。選測項目為地方環境保護行政主管部門根據當地醫療衛生機構的污染狀況及水環境保護狀況對污水排放可以選 擇監

7、測的控制項目，共計4項。4.1.2.2必測項目必須執行。選測項目由縣級及其以上人民政府環境保護行政主管部門根據當地醫 療衛生機構的具體情況和水環境質量要求選擇控制。4.1.3標準分級根據醫療衛生機構排入地表水域環境功能和保護目標，將必測項目的常規污染物標準值分為一級標 準、二級標準、三級標準、四級標準。一類重金屬污染物和選測項目不分級。4.1.3.1排入GB3838II類水域中除集中式生活飲用水地表水源地二級保護區及游泳區之外的區域， 執行一級標準。4.1.3.2排入GB383印、V類水域或排入GB3097中三類海域以及排入未設置城鎮污水處理廠的城鎮 污水排放系統的醫療污水，執行二級標準。4.

8、1.3.3排入設置城鎮污水處理廠的城鎮污水排放系統的醫療污水，執行三級標準。4.1.3.4床位小于20床以及不設床位的醫療衛生機構產生的醫療污水，應當設消毒處理設施，執行 四級標準。4.1.3.5傳染病爆發期間，應當根據環境保護行政主管部門和醫療衛生行政主管部門的要求執行應急處置措施要求。4.1.4標準值4.1.4.1醫療衛生機構水污染物排放，必測項目執行表1和表2的規定。4.1.4.2選測項目按表3的規定執行。表1一類污染物最高允許排放濃度（日均值）單位為毫克每升序號污染物最高允許排放濃度1總汞0.052總神0.5b括號外數值為水溫12C時的控制指標，括號內數值為水溫 V12C時的控制指標。

9、序號基本控制項目一級標準二級標準三級標準四級標準1糞大腸菌群數（MPN/D5010050050002腸道致病菌不得檢出不得檢出3腸道病毒不得檢出不得檢出4結核桿菌不得檢出不得檢出5化學需氧量（CODr）40601206生化需氧量（BOD）1020307懸浮物（SS）a10(5)20608動植物油1.05159揮發酚0.10.50.510氨氮b5(8)15(20)25(30)11磷酸鹽（以P計）0.50.5二1.0士12余氯c0.50.5匚8二13pH69a括號內為用于沖洗地面及洗車用水水質指標。序號污 染物最高允許排放濃度1氟化物102氯化物2503甲醛類1.04總有機碳（TOC）30表3選測

10、項目最高允許排放濃度（日均值）單位為毫克每升4.1.4.3污水處理過程中產生的廢氣按照GB18466執行表2基本控制項目最高允許排放濃度（日均值）單位為毫克每升c消毒接觸池接觸時間 A1h,接觸池出口總余氯3mg/l 10mg/l。4.1.5取樣與監測4.1.5.1水質取樣在污水處理站處理工藝末端排放口。其中一類污染物的取樣按照HJ/T 91執行。4.1.5.2檢測取樣頻率為至少每2h一次，取24h混合樣，以日均值計。4.1.5.3監測分析方法按表4或國家環境保護總局認定的替代方法、等效方法執行。表4水污染物監測分析方法序號控制項目測定萬法測定下限（mg/l）方法來源1總汞冷原子吸收分光光度法

11、0.0001GB7468雙硫月宗分光光度法0.002GB74692總神乙基硫代氨基甲酸銀 分光光度法0.007GB74853糞大腸菌群數多管發酵法-附錄A4沙門氏菌-附錄B5志賀氏菌-附錄C6結核桿菌-附錄D7化學需氧量（COB）重銘酸鹽法30GB119148BOD稀釋與接種法2GB7488微生物傳感器快速測定法1HJ/T869懸浮物（SS）重量法-GB1190110動植物油紅外分光光度法0.1GB/T1648811揮發酚4-氨基安替比林分光光度去0.002GB749012總氮（以N計）堿性過硫酸鉀-消解紫外分 光光度法0.05GB1189413磷酸鹽（以P計）鑰酸鉉分光光度法0.01GB11

12、89314pH玻璃電極法-GB692015F離子選擇電極法0.05GB7484西素磺酸錯目視比色法-GB7482氟試劑分光光度法-GB748316氯化物硝酸銀滴定法-GB1189617甲醛乙酰丙酮分光光度法0.05GB1319718TOC非紅外吸收法0.5GB1318319余氯N,N-二乙基-1,4-苯二胺滴定法-GB11897N,N-二乙基-1,4-苯二胺分光光度法-GB118984.2醫療廢物控制標準4.2.1醫療衛生機構不得將醫療廢物隨意棄置。4.2.2醫療衛生機構應將醫療廢物與生活垃圾分開收集；醫療廢物應進行無害化集中處置，生活垃圾按城 市生活垃圾處理原則進行處理。4.2.3醫療衛生機

13、構應對醫療廢物進行分類，并采用醫療廢物集中處置技術規范（試行）中要求的容 器、轉運器械進行包裝、轉運，包裝、轉運期間應注意防護措施。4.2.4醫療衛生機構應設置醫療廢物的暫存場所。具有100張床位以上的醫療衛生機構應建立專門的醫療廢物暫存庫房，暫存庫房必須滿足醫療廢物集中處置技術規范（試行）中關于暫存庫房的設計要求； 具有100張床位以下的醫療衛生機構及門診、部、所應設立專門的醫療廢物暫存場所，并滿足醫療廢物 集中處置技術規范（試行）中暫存場所的要求。4.2.5醫療廢物可以根據當地情況采用表5的處置方法進行處置。表5醫療廢物處置方法序號醫療廢物種類醫療廢物處置方法備注1病理性廢物（包括人體組織

14、、死胎、器官、肢體和動物尸體、血液、體液）火化或焚燒按國家有關法律法規處置2感染性廢物（包括傳染病人手術或尸 解后的廢棄物，如污染的材料和儀器；來自傳染病房的廢棄物，如排泄物、 手術或感染傷口的敷料、嚴重污染的 衣物；傳染病人血透析中廣生的廢棄 物；實驗室感染的動物；傳染病人或 動物接觸過的任何其他設備和材料；實驗室所用的菌落及病原株培養基和 保菌液； 使用過的一次性注射器、 輸 液器、輸血器等廢棄物）焚燒或消毒3鋒利物（銳器）（包括針頭、手術刀、 解剖刀、司官、手術鋸、玻璃制品等 易對人體造成損傷的廢物）焚燒4藥物性廢物（包括過期、被淘汰、壓 碎或污染的藥品、疫苗、血清）焚燒5遺傳病毒性廢棄

15、物（包括已明確的抑 制細胞的藥物，化學或放射治療病人 的嘔吐物、尿或糞便。如苯、環抱霉 素、環磷酰胺等）焚燒對環磷酰胺、異環磷酰胺、 硫酸長春新堿等可米用化學 降解法或封存或使之自動失 效6化學性廢棄物（包括在診斷、試驗、清潔、管理、消毒過程中產生的， 具 有毒性、 腐蝕性、 易燃性、反應性或 遺傳毒性的物質。如甲醛、攝影用劑、有機化合物等）焚燒或化學處理對于一般的化學廢棄物，如 糖、氨基酸和特定的鹽類可 按城市生活垃圾進行處置或 排入下水道。7低放射性廢物（包括診斷或治療用的 棉簽、注射器、輸液器等）焚燒8污水處理過程中產生的污泥焚燒4.2.6醫療廢物進行無害化處置的技術要求4.2.6.1采

16、用高溫熱處理技術要求按GB19218執行。4.2.6.2高溫蒸汽滅菌按GB15982執行4.2.6.3其他處理技術采用微波處理法、化學消毒法、電熱去活技術（EDT等其它經環境保護行政主管部門及衛生行政主管部 門認可的醫療廢物處理技術時，污染物的排放應當達到環境保護行政主管部門及衛生行政主管部門的要 求。4.2.7無害化處置后的醫療廢物應達到的排放標準4.2.7.1采用焚燒法處置醫療廢物，其焚燒爐排放氣體的排放限值不應高于GB18484規定的限值。檢測方法按GB18484執行。4.2.7.2采用焚燒法處置醫療廢物，其焚燒殘留物中的含菌量應為零。4.2.7.3醫療廢物焚燒過程中除塵設備收集到的飛灰

17、必須密閉收集貯存，并按照GB18598固化填埋處理；焚燒產生的爐渣可以送生活垃圾填埋場填埋處理；其他煙氣凈化裝置產生的固體廢物按GB 5085.3進行鑒別，并確定是否屬于危險廢物，如屬于危險廢物，按危險廢物處置，否則可以送生活垃圾填埋場填埋處理，無法進行鑒別實驗的，按危險廢物處置。4.2.7.4采用高溫蒸汽滅菌法處置醫療廢物產生的固體廢物將其粉碎后按城市生活垃圾進行處置。4.2.7.5采用高溫蒸汽滅菌法處置醫療廢物，生物指示劑應選擇耐熱的嗜熱性脂肪桿菌芽孑包（Bacillusstearothermophilus spores），檢測方法按GB 15981執行。4.2.7.6每批醫療廢物進行高溫

18、蒸汽滅菌處置需用化學檢測方法對滅菌效果進行檢測，可采用化學指示 管（卡）檢測方法或化學指示膠帶檢測法，檢測需將化學指示管（卡）放入滅菌室內滅菌效果最難保證的空間位置，或將化學指示膠帶粘貼于每一待滅菌物品包外，經一個滅菌周期后，觀察所放置的指示管（卡）或膠帶的性狀或顏色，如果均變至規定的條件，判為滅菌合格；若未達到規定的條件，則滅菌過程不合格。5標準的實施與監督本標準由縣級以上人民政府環境保護行政主管部門負責監督實施。附錄A（規范性附錄）醫療污水中糞大腸菌群的檢驗方法A.1A.1.1A.1.2A.1.3A.1.4A.1.5A.1.6A.1.7A.1.8A.1.9A.2A.2.1A.2.1.1蛋

19、白 月東 豬膽鹽 乳糖儀器和設備高壓蒸汽滅菌器干燥滅菌箱培養箱：37 C恒溫水浴箱電爐天平滅菌平皿滅菌刻度吸管酒精燈培養基和試劑乳糖膽鹽培養液成分20g（或牛、羊膽鹽）5g5g2.5mL0.4%漠甲酚紫水溶液蒸儲水1000mLA.2.1.2制法將蛋白腺、豬膽鹽及乳糖溶解于1000mL蒸儲水中，調整pH到7.4 ,加入指示劑，充分混勻，分裝于內有倒管的試管中。115C下滅菌20min。貯存于冷暗處備用。A.2.2A.2.2.1蛋白月東豬膽鹽乳糖三倍濃度乳糖膽鹽培養液成分60g（或牛、羊膽鹽）15g15g7.5mL0.4%漠甲酚紫水溶液蒸儲水1000mLA.2.2.2制法制法同附錄A.2.1.2。

20、A.2.3伊紅美蘭培養基（EMB培養基）A.2.3.1成分蛋白月東乳糖磷酸氫二鉀瓊脂2%伊紅水溶液0.5%美藍水溶液蒸儲水A.2.3.2制法將瓊脂加到900mL蒸儲水中，加熱溶解，然后加入磷酸氫二鉀和蛋白月東，混勻使溶解，再加入蒸儲水補足至1000ml,調整pH至7.27.4。趁熱用脫脂棉和砂布過濾，再加入乳糖，混勻，定量分裝于燒瓶內，115C火菌20min。作為儲備培養基貯存于冷暗處備用。10g10g2g20g20mL13mL1000mL臨用時，加熱融化儲備培養基，待冷至60 C左右，根據燒瓶內培養基的容量，加入一定量的已滅菌的2%伊紅水溶液和0.5%美藍水溶液，充分搖勻（防止產生氣泡）。傾

21、注平皿備用。A.2.4乳糖蛋白月東培養液A.2.4.1成分蛋白月東10g牛肉膏3g乳糖5g氯化鈉5g1.6%漠甲酚紫乙醇溶液1mL蒸儲水1000mLA.2.4.2制法將蛋白月東、牛肉膏、乳糖及氯化鈉加熱溶解于1000mL蒸儲水中，調整pH到7.27.4，加入1.6%漠甲酚紫乙醇溶液1mL充分混勻，分裝于內有倒管的試管中。115C下滅菌20min。貯存于冷暗處備用。A.2.5革蘭氏染色液A.2.5.1結晶紫染色液結晶紫1g95%乙醇溶液20mL1%草酸鉉水溶液1000mL將結晶紫溶于乙醇中，然后與草酸鉉水溶液混合。A.2.5.2革蘭氏碘液碘1g碘化鉀2g蒸儲水300mL將碘與碘化鉀混合，加入蒸儲

22、水少許，充分搖勻，待完全溶解，再加入蒸儲水至300ml.A.2.5.3脫色液95%乙醇A.2.5.4沙黃復染液沙黃1g95%乙醇2g蒸儲水90mL將沙黃溶于95%乙醇中，然后用蒸儲水稀釋。A.2.6染色法染色的基本步驟為：a）涂片：在載玻片上滴加一滴生理鹽水，用滅菌的接種環取菌落少許，與生理鹽水混勻，涂布成薄膜；b）干燥：在室溫中使自然干燥；c）固定：將涂片迅速通過火焰23次，以載玻片反面接觸皮膚，熱而不燙為度；d）染色：滴加結晶紫染色液，染色1min,水洗；e）媒染：滴加革蘭氏碘液，作用1min,水洗；f）脫色：滴加95%乙醇脫色，約30s,水洗；g）復染：滴加復染液，復染1min,水洗。革

23、蘭氏陽性菌染色后呈紫色，革蘭氏陰性菌染色后呈紅色。亦 可用1: 10稀釋的石炭酸復紅染色液作復染劑，復染時間為10s。A.3檢驗程序檢驗程序見圖A.1 o樣品處理：確定樣品接種量A 1污水中蓑大腸菌程檢驗程序 4A.4操作步驟A.4.1樣品準備污水樣品應至少取200mL使用前應充分混勻。若樣品為經過氯消毒的污水，應在采樣后立即用5%硫代硫酸鈉溶液充分中和余氯。根據預計的污水樣品中糞大腸菌群數確定污水樣品接種量。糞大腸菌群數量相對較少的接種量一般為10mL1mL 0.1mL。糞大腸菌群數較多時接種量為1mL 0.1mL、0.01mL或0.1mL、0.01mL、0.001mL等。接種量少于1mL時

24、，水樣應制成稀釋樣品后供發酵試驗使用。接種量為0.1mL、0.01mL時，取稀釋比分別為1:10、1:100。其它接種量的稀釋比依此類推。1:10稀釋樣品的制作方法為：吸取1mL水樣，注入到盛有9mL滅菌水的試管中，混勻，制成1:10稀釋樣品。因此，取1mL1:10稀釋樣品，等于取0.1mL污水樣品。其它稀釋比的稀釋樣品同法制作。A.4.2發酵試驗 將樣品接種于裝有乳糖膽鹽培養液的試管（內有小倒管）中，44C培養24h。樣品接種體積以及管內乳糖膽鹽培養液的濃度與體積根據以下條件確定：取三個接種量、每個接種量的樣品分別接種于5個試管內，共需15個試管。試管內乳糖膽鹽培養液的濃度與體積應根據接種量

25、確定。若接種量為10mL,吸取10mL樣品接種于裝有5mL三倍濃度乳糖膽鹽培養液的試管內；若接種量為1mL時，吸取1mL樣品接種于裝有10mL普通濃度乳糖膽鹽培養液的試管內；若接種量少于1mL時，吸取1mL稀釋樣品接種于裝有10mL普通濃度乳糖膽鹽培養液的試管內。A.4.3平板分離大腸桿菌分解乳糖產酸時培養液變色、產氣時小倒管內出現氣泡。經24h培養后，將產酸的試管內培養液分別劃線接種于EMB培養基上。置于37C培養箱中，培養18h24h。A.4.4鑒定挑選可疑糞大腸菌群菌落，進行革蘭氏染色和鏡檢。可疑菌落有：a）深紫黑色，具有金屬光澤的菌落；b）紫黑色，不帶或略帶金屑光澤的菌落；c）淡紫紅色

26、，中心色較深的菌落。上述涂片鏡檢的菌落如為革蘭氏陰性無芽抱桿菌，則挑取上述典型菌落13個接種于盛有5mL乳糖蛋白彌培養液倒管和倒管的試管內，置于44C培養箱中培養24h。產酸產氣試管為糞大腸菌群陽性管。A.5計數根據證實有糞大腸菌群存在的陽性管數，查表A.1可得100mL污水中糞大腸菌群MPN值。由于表A.1是按一定的三個10倍濃度差接種量設計的（接種量為10mL 1mL和0.1mL）,當采用其他三個10倍濃度差接種量時，需要修正表內MPN值，具體方法如下：表內所列污水最大接種量增加10倍時表內MPN值相應降低10倍；污水最大接種量減少10倍時表內MPN值相應增加10倍。如污水接種量改為1mL

27、 0.1mL和0.01mL時，表A內MPN值相應增加10倍。其它的 三個10倍濃度差接種量的MPN值相應類推。由于表A.1內MPN值的單位為每100mL污水樣品中MPN值，而污水以1L為報告單位，因此需將查表A.1得到的MPN值乘上10,換算成1L污水樣品中的MPN值。表A.1污水中糞大腸菌群最可能數（MPN檢索表（污水樣品接種量為5份10ml水樣，5份1ml水樣和0.1ml水樣）陽性管數每陽性管數每陽性管數每接種接種接種100ml接種接種接種100ml接種接種接種100ml100ml10ml0.1ml水100ml10ml 0.1ml水100ml10ml0.1ml水水樣水樣樣水樣中水樣水樣樣水

28、樣中水樣水樣樣水樣中MPNMPNMPN0000200540013001220174011700242029402210035203124032500472041440430005920516405360102210741017011421194112101252121241226表A.1（續）陽性管數每陽性管數每陽性管數每接種接種接種100ml接種接種接種100ml接種接種接種100ml100ml10ml0.1ml水100ml10ml 0.1ml水100ml10ml0.1ml水水樣水樣樣水樣中水樣水樣樣水樣中水樣水樣樣水樣中MPNMPNMPN|0137213144133101492141741

29、436015112151941542020422094202202162211242126022722214422320239223174233802411224194244402513225224255003062301243027031723114431330329232174323903311233204334503413234224345203515235254355904082401544034041924117441400421124220442470431324323443540441524425444620451724528445690509250174504105111251

30、20451480521325223452560531525326453640541725429454720551925532455811002300850023101430111501311026302135024310383031650358104103042050476105123052350595110431011510331116311145114611283121751263113103132051384表A.1（續）陽性管數每陽性管數每陽性管數每接種100ml水樣接種10ml水樣接種0.1ml水樣100ml水樣中MPN接種100ml水樣接種10ml水樣接種0.1ml水樣100ml水

31、樣中MPN接種100ml水樣接種10ml水樣接種0.1ml水樣100ml水樣中MPN114123142351411011514315275151301206320145204912183211752170122103222052294123123232452312012415324275241501251732531525180130833017530791311033121531110132123322453214013315333285331801341733432534210135193353653525014011340215401301411334124541170142153422

32、854222014317343325432801441934436544350145223454054543015013350255502401511535129551350152173523255254015319353375539201542235441554160015524355455551600附錄B（規范性附錄）醫療污水中沙門氏菌的檢驗B.1儀器和設備B.1.1高壓蒸汽滅菌器B.1.2干燥滅菌箱B.1.3培養箱B.1.4恒溫水浴箱B.1.5電爐B.1.6天平B.1.7滅菌平皿B.1.8滅菌刻度吸管B.1.9酒精燈B.2培養基和試劑B.2.1亞硒酸鹽增菌液（SF增菌液）B.2.1.1

33、成分胰蛋白腺（或多價腺）10g磷酸氫二鈉（Na2HPO3）16g磷酸二氫鈉（NaH2PO3）2.5g乳糖4g亞硒酸氫鈉4g蒸儲水1000mLB.2.1.2制法除亞硒酸氫鈉外，將以上各成分放入蒸儲水中，加熱溶化。再加入亞硒酸氫鈉，待完全溶解后，調整pH到7.07.1，分裝于三角燒杯內。121C下滅菌15min備用。B.2.2二倍濃度亞硒酸鹽增菌液（二倍濃度SF增菌液）B.2.2.1成分除蒸儲水改為500mL外，其它成分同附錄B.2.1.1。B.2.2.2制法制法同附錄B.2.1.2。B.2.3 SS培養基B.2.3.1基礎培養基B.2.3.1.1成分牛肉膏5g示月東5g三號膽鹽3.5g瓊脂17g

34、蒸儲水1000mLB.2.3.1.2制法將牛肉膏、示腺和膽鹽溶解于400mL蒸儲水中。將瓊脂加到600mL蒸儲水中，煮沸使其溶解。再將二者混合，121C下滅菌15min,保存備用。B.2.3.2完成培養基B.2.3.2.1成分基礎培養基1000mL乳糖10g檸檬酸鈉8.5g硫代硫酸鈉10%寧檬酸鐵溶液19仲性紅溶液0.1%煌綠溶液B.2.3.2.2制法加熱溶化基礎培養基，按比例加入除中性紅和煌綠溶液以外的各成分，充分混合均勻，調整 加入中性紅和煌綠溶液，傾注平板。制好的培養基宜當日使用，或保存于冰箱內于18h內使用。煌綠溶液配好后應在B.2.4亞硫酸鉗瓊脂培養基（BS培 養基）B.2.4.1B

35、.2.4.1.1蛋白月東牛肉膏氯化鈉瓊脂蒸儲水B.2.4.1.2加熱溶解各成分，按每份B.2.4.2亞硫酸鉗貯備液B.2.4.2.1成分檸檬酸鉗鉉亞硫酸鈉磷酸氯二鈉葡萄糖蒸儲水B.2.4.2.2制法將檸檬酸鉗鉉溶解于入磷酸氯二鈉攪拌至溶解。冷卻后，加入剩余的8.5g10mL2.5mL0.33mLpH到7.0 ,10天以內使用。亞硫酸鉗瓊脂培養基（BS培妾宜基礎培養基成分10g5g5g20g1000mL制法100mL的量分裝于250mL三角瓶中，121C下滅菌20min備用。2g20g10g10g200mL50mL沸水中，同時將壓硫酸鈉溶解于100mL沸水中，混合兩液并煮沸3min,趁熱加50m

36、L葡萄糖水溶液，貯存于冰箱中。B.2.4.3檸檬酸鐵煌綠貯備液B.2.4.3.1成分檸檬酸鐵2g煌綠（1%水溶液）25mL蒸儲水200mLB.2.4.3.2制法將上述成分溶解于水中，盛于已滅菌的玻璃瓶內，貯存于冰箱。B.2.4.4完成培養基B.2.4.4.1成分基礎培養基100mL亞硫酸鉗貯備液20mL檸檬酸鐵煌綠貯備液4.5mLB.2.4.4.2制法加熱融化基礎培養基并冷卻至50C，同時分別加熱亞硫酸鉗貯備液和檸檬酸鐵煌綠貯備液至50Co在無菌操作下將后者加入到前者去，充分混合，無菌傾入已滅菌的培養皿中。B.2.5三糖鐵瓊脂培養基（TSI培 養基）B.2.5.1成分蛋白月東20g牛肉膏5g乳

37、糖10g蔗糖10g葡萄糖1g氯化鈉5g硫酸亞鐵俊0.2g硫代硫酸鈉0.2g瓊脂12g酚紅0.025g蒸儲水1000mLB.2.5.2制法將除瓊脂和酚紅以外的各成分溶解于蒸儲水中，調pH到7.4。加入瓊脂，加熱煮沸，再加入0.2%酚紅水溶液12.5mL,搖勻。分裝試管，裝量宜多些，以便得到較高的底層。121C下滅菌15min。放置高層斜面備用。B.2.6沙門氏菌診斷血清B.3檢驗程序檢驗程序見圖B.1 oaB. 1污水中沙門氏菌檢驗程序/B.4操作步驟B.4.1樣品處理和增菌取200mL污水，用滅菌濾膜進行抽濾。用100mL二倍濃度SF增菌液把濾膜上截留的雜質洗脫到滅菌三角燒瓶內，充公搖勻，置于

38、37 C恒溫培養箱，增菌培養1224h。若樣品為經過氯消毒的污水，應在采樣后立即用5%硫代硫酸鈉溶液充分中和余氯。B.4.2平板分離取上述增菌培養液，分別接種于SS培養基平板和BS培養基平板，置于37C培養箱中，培養24 h48h。觀察各平板上生長的菌落形態。挑取在SS培養基平板上呈無色透明或中間有黑心，直徑12mm的菌落；挑取在BS培養基平板上呈黑色的菌落或灰綠色的可疑腸道病原菌菌落。每個平板最少挑取5個菌落，接種于TSI培養基中，置于37 C培養箱中，培養18h24h。B.4.3鑒定B.4.3.1血清學試驗在TSI培養基中，如不發酵乳糖，發酵葡萄糖產酸產氣或只產酸不產氣，一般產生硫化氫，有

39、動力者，先與沙門氏A-F群。多價血清作玻璃片凝集，凡與多價O血清凝集者，再與。因子血清凝集，以確定所屬群別，然后用H因子血清，確定血清型。雙向菌株應證實兩相的H抗原，有Vi抗原的菌型（傷寒和丙型副傷寒沙門氏菌）應用Vi因子血清檢驗。B.4.3.2生化試驗應進行葡萄糖、甘露醇、麥芽糖、乳糖、蔗糖、靛基質、硫化氫、動力、尿素試驗。沙門氏菌屬中除傷寒沙門氏菌和雞沙門氏菌不產氣外，通過發酵葡萄糖、產氣、均發酵甘露醇和麥芽糖（但豬沙門氏菌、雛沙門氏菌不發酵麥芽糖），不分解乳糖、蔗糖，尿素酶和靛基質為陰性，通常產生硫化氫。除雞、雛沙門氏 菌和傷寒沙門氏菌的O型菌株無動力外，通常均有動力。如遇多價。血清不凝

40、集而一般生化反應符合上述情況時，可加做側金盞花醇、水楊素和割化鉀試驗，沙門 氏菌均為陰性。B.5檢驗結果報告根據檢驗結果，報告一定體積的樣品中存在或不存在沙門氏菌。附錄C（規范性附錄）醫療污水中志賀氏菌的檢驗方法C.1儀器和設備C.1.1高壓蒸汽滅菌器C.1.2干燥滅菌箱C.1.3培養箱C.1.4恒溫水浴箱C.1.5電爐C.1.6天平C.1.7滅菌平皿C.1.8滅菌刻度吸管C.1.9酒精燈C.2培養基和培養液C.2.1革蘭氏陰性增菌液（GN增菌液）C.2.1.1成分胰蛋白腺（或多價腺）20g葡萄糖1g甘露醇2g枸椽酸鈉5g去氧膽酸鈉0.5g磷酸氫二鉀16g磷酸二氫鉀2.5g氯化鈉5g蒸儲水10

41、00mLC.2.1.2制法將以上各成分加入蒸儲水中溶化，調整pH至7.0，煮沸過濾，115C下滅菌20min。貯存于冷暗處備用。C.2.2二倍濃度革蘭氏陰性增菌液（二倍濃度GN增菌液）C.2.2.1成分除蒸儲水改為500mL外，其它成分同附錄C2.1.1 oC.2.2.2制法制法同附錄C.2.1.2。C.2.3 SS培養基同附錄B.2.3。C.2.4伊紅美藍瓊脂培養基（EMB培）同附錄A.2.3。C.2.5三糖鐵瓊脂（TSI培）同附錄B.2.5。C.2.6志賀氏菌診斷血清C.3檢驗程序檢驗程序見圖C.1 o圈C1污水史袤襄氐圓椎驗程序 5C.4操作步驟C.4.1樣品處理和增菌培養取200mL污

42、水，用滅菌濾膜進行抽濾。若樣品為經過氯消毒的污水，應在采樣后立即用5%硫代硫酸鈉溶液充分中和余氯。用100mL二倍濃度GN增菌液把濾膜上截留的雜質洗脫到已滅菌的三角燒瓶內，搖勻， 置于37C恒溫培養箱，增菌培養68h。C.4.2分離取上述增菌培養液，分別接種SS培養基平板和EMB培養基平板，置于37C培養箱中培養24h。挑取在SS培養基平板和EMB培養基平板上呈無色透明，直徑11.5mL的可疑腸道病原菌菌落。每個平板最少挑取5個菌落，接種于TSI培養基，置于37C培養箱中培養1824h。挑取在TSI中，葡萄糖產 酸不產氣，無動力，不產生硫化氫，上層斜面乳糖不分解的菌株，可做血清學和生化試驗。C

43、.4.3鑒定C.4.3.1血清學試驗志賀氏菌屬分為四個群，先與多價血清作玻璃片凝集試驗，如為陽性，再分別與A、8 G D群血清凝集,并進一步與分型血清做玻璃片凝集，最后確定其血清型。C.4.3.2生化試驗應進行葡萄糖、甘露醇、麥芽糖、乳糖、蔗糖、靛基質、硫化氫、動力、尿素試驗。志賀氏菌屬能分解葡萄糖，但不產氣（福氏志賀氏菌6型有時產生少量氣體），一般不能分解乳糖和蔗糖，宋內氏志賀氏菌對乳 糖和蔗糖遲緩發酵產酸。志賀氏菌屬均不產生硫化氫，不分解尿素，無動力。對甘露醇、麥芽糖的發酵及 靛基質的產生，則因菌株不同而異。如遇多價血清玻璃片凝集試驗為陰性，而生化反應符合上述情況時，可加做肌醇、水楊酸、V-P、椽酸鹽、停化鉀等試驗。志賀氏菌屬均為陰性反應。C. 5檢驗結果報告根據檢驗結果，報告一定體積的樣品中存在或不存在志賀氏菌。附錄D（規范性附錄）醫療污水中結核桿菌的檢驗方法D. 1儀器和設備D.1.1電爐D.1.2恒溫水