1、ABO血型系統及定型血型系統及定型上海市血液中心 郭忠慧l正定型細胞定型）l用已知抗體特異性的試劑血清檢查紅細胞的抗原l 玻片法 試管法 微量板法ABO常規定型常規定型ABO常規定型常規定型l反定型血清定型）l用已知血型的試劑紅細胞檢查血清中的抗體l 試管法 微量板法正反定型結果相符時，才可以記錄血型結果。ABO正反不符時正反不符時l受檢紅細胞是洗滌后懸浮于NS.嗎?l是用最敏感的試管法嗎?l受檢者年齡60嗎?l病人的丙種球蛋白減低嗎?l病人血清與O型普檢紅細胞的反應與試劑紅細胞一樣嗎?l病人是白血病、腸道阻塞、胃癌、結腸或直腸癌嗎？l混合視野反應是輸血后標本嗎？技術上錯誤的常見來源技術上錯誤

2、的常見來源l血液標本或試管鑒定不當l紅細胞懸浮液過濃或過淡及纖維蛋白、小血凝塊的干擾l人為的書寫錯誤l標本混亂l忽略觀察溶血現象l未加入試劑l未按照試劑生產商的說明操作l離心機校準不良l試劑受到污染l溫度在離心過程中增高造成正反定型不符的造成正反定型不符的4種變異情況種變異情況l減弱的或減少的抗原反應l未知的抗原反應l減弱的或缺少的抗體反應l未知的抗體反應減弱或減少的抗原反應減弱或減少的抗原反應lA或B抗原的亞血型lA、B及AB型RBC與試劑抗血清作實驗時，預期反應：4l細胞分型法減弱的凝集反應：健康獻血員可能A/B亞型l抗AB 血清能檢出某些不與抗A/抗B試劑發生反應的A/B亞型減弱或減少的

3、抗原反應減弱或減少的抗原反應l疾病狀態下,抗原強度減弱l如:A型白血病/腫瘤患者在疾病活動期改變為A2或A3亞型 ,疾病緩解期復原l疾病狀態下,血型物質過量,中和抗A/抗B試劑,造成假陰性/弱凝集: 卵巢囊腫 胃癌 胰腺癌 腸道阻塞l對策:試管法 紅細胞三洗未知抗原反應未知抗原反應l獲得性Al奇異變形桿菌感染的O/B:l 與抗A反應呈混合視野未知抗原反應未知抗原反應l獲得性BlRBC反應象AB型,血清中有抗B抗體l細胞分型法: A抗原B抗原獲得性獲得性B的成因的成因lGerbal等假設細菌的脫乙酰基酶deactetylases可以將A的免疫結構域糖N乙酰氨基半乳糖胺轉化為半乳糖胺。l這個半乳糖

4、胺與B的免疫多糖半乳糖非常的相似，可以與某些抗B發生反應。 抗體致敏的紅細胞抗體致敏的紅細胞l抗體吸附于紅細胞表面，可顯示直抗陽性l自身免疫性溶血性貧血l抗高血壓藥物l輸血反應l新生兒溶血病l放散技術移去抗體減弱或缺少抗體反應減弱或缺少抗體反應l年齡70l丙球蛋白過低血癥l丙球蛋白缺乏血癥未知的抗體反應未知的抗體反應l緡錢狀凝集l冷自身抗體l未知的ABO同種抗體l未知的其它同種抗體ABO抗體的區別抗體的區別特異性血清其它來源血型頻率性 質抗BA全部常屬IgM效價 8-512初乳 唾液淚液(IgA)抗ABO、 Oh全部常屬IgG,與Ax,A3凝集抗A在蝸牛魚卵中也可發現抗AB全部常屬IgM效價

5、32-2048抗A1A2B A2Ax22-35%1-8%大多數少數報告有輸血反應用A2細胞吸收過的抗A血清;雙花扁豆(Doliekos biflorus)抗HOh 非Oh全部部分被H物質抑制歐洲荊豆(Ulex europaeus)天然抗體和免疫抗體天然抗體和免疫抗體l天然抗體l未經可察覺的抗原刺激而產生的抗體lO型血清中多為IgG抗A和抗BlA/B型血清中大多為IgM抗體l免疫抗體l妊娠/輸血等緡錢狀凝集緡錢狀凝集l球蛋白濃度增高:多發性骨髓瘤/原發性巨球蛋白血癥l纖維蛋白原增高l血管擴張劑l霍奇金淋巴瘤l新生兒臍帶血中的華爾道膠冷自身抗體冷自身抗體l抗I是反定型中最常見的自身抗體l有時也見抗

6、i和抗Prl抗I通常凝集所有供者RBC包括患者自身及反定型所用RBCl抗I引起的凝集比抗A抗B所引起的凝集弱l臍帶血所帶的I抗原量少通常不被凝集抗抗HIl與冷凝集有關的最常見的特異性抗體是抗Il有些冷抗體與I和H抗原強的細胞如O和A2細胞反應最強，稱之為抗HI聯合抗體。冷自身抗體之鑒別冷自身抗體之鑒別l 抗I 抗i 抗H 抗HI 抗Prl 成OI + - + + +l 成AI + - - - +l 臍Oi - + + - +l酶OI + - + + +l抗HI： O成A2成B/A成臍O臍AB未知的同種抗體未知的同種抗體lABO同種抗體:A2/A2B中的抗A1l A1/A1B中的抗Hl未知的同種

7、抗體:l篩選細胞及反定型中的O細胞l一組譜細胞鑒定抗體特異性ABO亞型亞型lA抗原中主要為A1和A2 l其它A亞型：A3、Ax、Aend、Am、Ay、和AellB亞型一般比A亞型更少：B3、Bx、Bm和Bel等判斷判斷ABO亞型亞型:1 紅細胞與抗A抗A1抗B及抗AB的凝集程度2 紅細胞上H物質活性的強弱3 血清中是否存在抗A14 分泌型人的唾液中A、B和H物質A1和和A2的鑒別的鑒別項目A1細胞A2細胞與抗A反應42與抗A1反應成人抗原位點100萬25萬臍血抗原位點31萬25萬乙酰D半乳糖胺轉移酶PH 6時最多PH 7時最多各種弱各種弱A亞型的鑒別程序亞型的鑒別程序紅細胞弱凝集混合外觀(Mf

8、）A60A3與抗AA3 Ax10 紅細胞呈十分弱的mf凝集Aend及/或抗Aend只與抗AB呈弱凝集AxA1B反應不凝集容易吸附放散抗AAm能吸附分泌型唾液中有一定量的A物質及放散不容易吸附放散抗AAy抗A分泌型唾液含少量的A物質Am Ay 吸附放散抗AAelAel分泌型唾液只含H物質無A物質A2l與人源性抗A試劑的反應強度為4, 與抗H+/2+l可能有不規則抗A1存在 (sometimes)l1-8% A2和22-35%的A2B存在抗 A1l血型物質 A Hl舉例 抗A 抗B Ac Bc Ocl 4+ 4+ + - -A2lA1和A2決定簇的區別是僅存在量的差異l還是抗原決定簇結構不同？l用

9、A2細胞重復吸收來源于B型個體的抗A血清可以移去所有抗體，表明二者之間僅是量的差別。lA2和A2B個體常常產生抗A1，說明A2細胞上缺乏A1細胞上的一種決定簇。 血型前體物質：血型前體物質：lType1 Gal13GlcNAc 1R血清）lType2 Gal14GlcNAc 1R （紅細胞）lType3 Gal13GalNAc1R紅細胞）lType4 Gal13GalNAc 1R （紅細胞）lType5 Gal13Gal 1R人工合成）lType6 Gal14Glc 1RA1和和A2同樣存在質的區別同樣存在質的區別lA1細胞出現重復的3型A抗原結構，但A2細胞卻沒有。l抗A1是3型或4型A特異

10、性的，或者抗A1可以優先與3型或4型A反應。l只有A1轉移酶能夠轉化3型H加一個N乙酰氨基半乳糖基成為3型Al因此A2細胞上可以檢測到3型H而不是3型A抗原。l雙花扁豆植物血凝素檢測N乙酰氨基半乳糖胺，當過量的濃度下，它可以凝集A2細胞，因此將它用作A亞型分型試劑更多是依賴A1和A2表現型數量上的差異。A3l最早由Friedenreich在1936年描述l與抗A和抗AB共同孵育時：“混合視野外觀”（mixed field agglutination）。即：小的凝集塊周圍是大量未凝集的細胞。l與抗A反應強度低于A2l與抗AB反應呈混合視野,但并不增強l偶有抗A1 (occasionally) l

11、血型物質 A HlA3不像是A2和O細胞的嵌合體 AendAfinn，Abantu）lAend最早由Weiner 等于1959年描述l類似于A3細胞：它們與一些抗A和抗AB表現很弱的混合視野外觀lAend分泌型的唾液中只有H物質，但是無A物質l抗A1出現在部分Aend個體的血清中l10細胞凝集Mf）AmlAm細胞不能被抗A和抗AB凝集，或者僅能發生很弱的凝集。Am細胞可以吸附放散抗A 。lAm分泌型的唾液中包含正常含量的A和H物質，Am血清中通常無抗A1。lAm作為ABO位點上一個稀有的等位基因遺傳lAm在法國獻血者的頻率是150 000中有1例。（A型人中占0.0015%），中國臺灣的數據是

12、400 000萬人中1例。Aml抗原性較弱 抗A: - / w+l抗H 4+(甚至會超過Oc)l無抗A1產生,與抗AB反應不增強l血型物質: A HAxlAx表現型最初由Fischer和Hahn于1935年報道，它的主要血清學特點是：l紅細胞與多數來源于B型血清的抗A不發生反應，但是可以被大多數來源于O型個體的抗AB凝集，沒有混合視野表現。l血清中含有抗A1，后者有時候可以凝集A1和A2細胞。l除了H物質，Ax分泌型個體唾液中可以撿出痕量的A物質Axl抗A: -/ w+l抗H:4+(與Oc的抗H差不多)l常有抗A1(Frequently) ,比A2 A3都高l與抗A+B的反應比抗A明顯增強l血

13、型物質 HAxAx表現型具有很高的遺傳異質性：許多家系資料表明Ax以ABO位點上一種稀有的等位基因的方式遺傳在一些家庭中遺傳背景不清楚在兩項獨立的研究中，法國Ax的頻率為1/77000 (A型人中的0.003%)和1/44000 Aintl與抗A1反應較弱 2+l與抗A及抗H反應較強 4+/3+l僅有A1和Aint的細胞與抗A1發生反應AintlLandsteiner和Levine：有些A型個體的紅細胞既不能定義為A1也不能定義為A2lAint在黑人中較白人更為常見，lAint是作為ABO位點上的一個等位基因遺傳的。l它的H抗原強度象A2一樣強，甚至更強。Aell在通常的條件下，Ael細胞與抗

14、A和抗AB不發生凝集，雖然它們可以結合這些抗體，結合的抗體可以通過吸收放散技術檢測到lAel分泌型唾液中無A物質，僅有H物質，血清中常含有抗A1，也可以含有能夠凝集A2細胞的抗體Ael l在Ael血清和紅細胞膜上不能檢出A轉移酶。l在法國150000例獻血者中，沒有檢測到Ael表現型，在中國臺灣400000人中撿出5例Ael個體lAel以ABO位點上的一種稀有的等位基因遺傳的。AwlOlsson等l對其它弱A亞型的ABO基因的外顯子、剪切部位和啟動子進行序列測定l那些表現型不太容易被劃分到任何現存的分類中。這些異常的基因被稱作Aw15）。 Subgroups of APheno-typeRed

15、 cellstestedWith anti-seraSerum tested withKnown red cellsSalivaof secretorsAnti-A-B-AB-A1-HA1A2BO A1V_VV_V_A and HAint+_V+_V_A and HA2+_V_+Some-times. +_V_A and HA3+mf_+mf_+Occa-sionally. +_V_A and HAm-/w+_-/w+_V_V_A and HAx-/W+_+/+_VFre-quently +_V_HB亞型亞型l弱的B變異型是很少的。l可能是由于在許多群體中B基因的頻率要相對低得多。l弱B亞型較

16、難以分類。lSalmon做出結論：B亞型最好的分類應參照A變異型：B3、Bx、Bm和Bel，另外加上那些不符合其它4種類型的Bw。 B3l1972年 Wiener和Cioffi首先報道一例ABH非分泌型B3。l它被作為最稀少的一種B亞型 l這種表現型以與抗B和抗AB呈現混合視野反應為特點l血清中缺乏抗Bl唾液中含有正常含量的B抗原lB3通常是由于ABO位點上的稀有等位基因所致。 Bxl一種異質性的血型l典型的Bx紅細胞與抗B和抗AB呈弱凝集。l血清中含有弱的抗BlBx分泌型唾液中含有一些B物質，后者常常僅能通過Bx細胞與抗B的凝集抑制試驗才能檢測到lBx是ABO位點上的一種稀有的等位基因。Bm

17、lBm細胞不能被抗B或抗AB凝集lB抗原僅能通過敏感的技術比如吸收放散抗B才能檢測到。lBm分泌型唾液中B物質的含量接近正常BlBm個體的血清中不含有抗B。l通常Bm是作為ABO位點上一個變異的基因來遺傳的，但是有幾個例外報道。 BellBel紅細胞與抗B和AB不發生凝集反應，但是它們的確可以結合抗B，抗體可以通過放散技術被檢測到。lBel分泌型唾液中不出現B物質，血清中可能存在抗B抗體。lBel作為ABO位點上的稀有基因而遺傳， BwlOlsson等確認了7種新的等位基因，它們與正常B基因相比有1個核苷酸改變，導致一個氨基酸的取代見表2.19Bw2到8），所有這些等位基因與B的弱表達相關，但是沒有做進一步分類。正反不符的解決正反不符的解決正定型中意外陽性或陰性洗滌細胞加入自身對照增加血清/細胞比例降低孵育溫度,延長孵育時間 4 /22 /37 15min-30min鏡檢用不同來源的抗體試驗用人源性試劑作吸收放散(并作相應對照) 吸收放散試驗吸收放散試驗 檢測紅細胞上的弱檢測紅細胞上的弱A/B 抗原抗原lNS.三洗受檢1ml紅細胞l加入等量人源性抗A或抗Bl充分混勻41小時，離心去上清l4冷鹽水充分洗滌