1、用正交法測定幾種要素對酶活力的影響1、正交法簡介在消費實際中,試制新產品、改革新工藝、尋求好的消費條件等,都需求先做實驗。而實驗總要破費時間，消耗人力、物力、因此人們總希望做實驗的次數盡量少，而得到的結果盡能夠的好。要到達這個目的，就必需事先對實驗作合理的安排，也就是要進展實驗設計。實踐問題是復雜的，對實驗有影響的要素往往是多方面的。我們經常需求調查各要素對實驗影響的情況，但在多要素、多程度實驗中，假設對每個要素的每個程度都相互搭配進展全面實驗，需求做的實驗次數就會很多。用正交法測定幾種要素對酶活力的影響 比如對兩個7程度的要素，假設兩要素的各個程度都 相互搭配進展全面實驗，要做72=49次實

2、驗，而3個7程度 的要素要進展全面實驗，要做73=343次實驗。作這么多次 實驗，要破費大量的人力、物力，還要用相當長的時間， 顯然是非常困難的。有時，由于時間過長，條件改動，還 會使實驗失敗。 人們在長期的實際中發現，要得到理想的結果，并 不需求進展全面實驗，即使要素個數、程度都不太多，也 不用作全面實驗。我們總是希望在不影響實驗結果的前提 下，盡能夠的減少實驗次數，正交實驗設計就是處理這個 問題的有效方法。用正交法測定幾種要素對酶活力的影響2、正交法的原理正交實驗設計的主要工具是正交表。正交實驗設計是經過借助于正交表，簡化表格計算，正確分析結果，從而找到實驗的最正確條件，分清要素的主次，這

3、樣就可以通過比較少的實驗次數到達好的實驗效果。實際證明，正交法是一種多、快、好、省的方法，目前已被廣泛運用于工農業消費和科學實驗中。本實驗運用正交法測定底物濃度、酶濃度、溫度、pH值這四個要素對酶活性的影響，并求得在什么樣的底物濃度、酶濃度、溫度和pH值時酶活力最大。3、正交法的設計過程以本實驗為例用正交法測定幾種要素對酶活力的影響 、根據實驗目的，確定要考核的實驗目的。 、確定要調查的實驗要素和各要素程度。 要經過對實踐問題的詳細分析選出主要要素，略去 次要要素，這樣可使要素的個數少些，從而減少實驗次數 和計算。本實驗取四個要素，即底物濃度s、酶濃度 E、溫度、pH值。每個要素選三個程度程度

4、即在要素 的允許變化范圍內，要進展實驗的“點。實驗要素和選 用程度如表1所示。 因素水平 s(ml)E(ml)溫度（）pH10.50.850720.20.537930.80.2608表1 要素、程度表用正交法測定幾種要素對酶活力的影響 作要素、程度表時，各要素的程度最好不要按大小 順序陳列。 如按普通方法，對四個要素三個程度的各種搭配都 要思索，共需做34=81次實驗，而用正交表只需做9次實驗。 、選擇適宜的正交表 首先根據各要素的程度選擇相應程度的正交表，同 程度的正交表有好幾個，終究選哪一個要看要素的個數， 普通只需正交表中要素的個數比實驗要調查的要素的個數 稍大或相等就行了。這樣既能保證

5、到達實驗目的，而實驗 的次數又不至于太多，省工省時。 正交表的表示：正交表 Lntq用正交法測定幾種要素對酶活力的影響 L：正交表的代號； n：處置數實驗次數 t：程度數； q：要素數 實驗次數n=qt-1+1 本實驗選用四要素，每個要素選三個程度，因此可 選用正交表L934。 、在所選的正交表上進展表頭設計 把要素放入正交表頭的任務，叫做表頭設計。如本 實驗是一項四要素各三程度的實驗，因此表頭設計時，可 將四個要素依次放在L934的第1，2，3，4列上。見表 2所示。用正交法測定幾種要素對酶活力的影響正交表都具有以下兩個特性：a、在每一列中，各程度出現的次數相等，即在任何一列中，數字1、數字

6、2和數字3都出現三次幾個程度就均出現幾次1233931238231372132613225321243331322212111114321 程度 要素實驗號表2 表頭設計用正交法測定幾種要素對酶活力的影響 b、任何兩列中，橫行組成的數對出現的次數相等， 均出現一次這里有9個不同的數對，均出現一次，即 1，1、1，2、1，3、2，1、2，2、 2，3、3，1、3，2、3，3各出現一次。 以上這些特點保證了用正交表安排的實驗方案是均 衡搭配的，因此分析數據比較方便，可進展綜合比較，結 果比較可靠。 4、 酶活力的測定原理蛋白質 小片段肽段 銅-肽絡合物 胰蛋白酶Folin-酚試劑甲 (硫酸銅的堿性

7、溶液)Folin-酚試劑乙(磷鉬酸和磷鎢酸的混合液)鉬藍 + 鎢藍藍色，680nm處具特征光吸收，OD680與肽含量成正比，可據此定量測定。用正交法測定幾種要素對酶活力的影響5、實驗安排先將本實驗的四個要素依次填入L9表的要素1，2，3， 4中，再將各列的程度數用該列要素相應的程度寫出來，便可得到如表3所示的實驗安排表。見P109。表中試驗號共9個，表示要做9次實驗，每次實驗的條件如每一縱行所示。實驗的終止及酶活力的測定過程詳見P109。6、實驗結果及分析實驗做好后，把9個數據填入表4實驗結果欄內，按表中數據計算出各要素的一程度實驗結果總和、二程度試驗結果總和、三程度實驗結果總和，再取平均值各

8、自被3除。最后計算極差。用正交法測定幾種要素對酶活力的影響 極差是指同一列中，各程度平均值中的最大值與最 小值之間的差。普通地，各列的極差是不一樣的，這闡明 各要素的程度改動對實驗目的的影響是不同的。極差越大， 闡明這個要素的程度改動對實驗目的的影響越大。極差最 大的那一列，闡明那個要素的程度改動對實驗目的的影響 最大，那個要素就是我們要思索的主要要素。 而在同一列各程度實驗結果的平均值中即某要素 下各程度平均值中，值最大所對應的那個程度即為該因 素的最適條件。各要素最好的程度合在一同就是最好的試 驗條件，同時還要思索要素的主次。用正交法測定幾種要素對酶活力的影響 對于主要要素，一定要按照有利于目的要求選?。?對于次要要素，那么可以思索實踐實驗條件如本錢、實驗 條件等來選取適當程度，而得到符合實驗實踐的最優或 較優實驗條件。這一過程就稱為直觀分析法。見表4。 最后以A/3，/3，/3值為縱坐標，要素的 程度數為橫坐標作圖留意：作圖時，程度數應從小到大 陳列，并經過各圖確定最適的酶促反響條件。0表4 實驗結果分析計算表 水平 因素試驗號1s(ml)2E(ml)3溫度()4pH值試驗結果A6601 0.51 0.81 501 71 0.52 0.52 372 91 0.53 0.23 603 82 0