1、人體瘧原蟲鏡檢技術李李加新加新泰州市人民醫院泰州市人民醫院一、概述一、概述 瘧原蟲屬原生動物亞界的單細胞真核生物。瘧原蟲屬原生動物亞界的單細胞真核生物。在生物界的位置：瘧原蟲為原生動物門、孢子在生物界的位置：瘧原蟲為原生動物門、孢子綱、血孢子目、瘧原蟲科、瘧原蟲屬。瘧原蟲綱、血孢子目、瘧原蟲科、瘧原蟲屬。瘧原蟲有有149149種，自然界感染人體的瘧原蟲只有四種：種，自然界感染人體的瘧原蟲只有四種：即間日瘧（即間日瘧（PvPv）、惡性瘧（）、惡性瘧（PfPf）、三日瘧）、三日瘧（PmPm）、）、卵卵形瘧（形瘧（PoPo）四種。）四種。二、瘧原蟲生活史二、瘧原蟲生活史1、紅細胞外期、紅細胞外期2

2、2、紅細胞內期、紅細胞內期3 3、子孢子增殖期、子孢子增殖期周圍血液中各種血細胞的形態周圍血液中各種血細胞的形態薄血膜瘧原蟲形態特征薄血膜瘧原蟲形態特征1、間日瘧：環狀體、滋養體、裂殖體、配子體2、惡性瘧：環狀體、配子體小滋養體（環狀體）小滋養體（環狀體）間日瘧間日瘧惡性瘧惡性瘧約為紅細胞直徑的約為紅細胞直徑的1/3,1/3,環較粗大；核環較粗大；核1 1個，個，2 2個個核和一個紅細胞寄生核和一個紅細胞寄生2 2個個環狀體不如惡性瘧原蟲環狀體不如惡性瘧原蟲多見。多見。約為紅細胞的約為紅細胞的1/61/6；環纖；環纖細，核細，核1 12 2個，一個紅個，一個紅細胞寄生細胞寄生2 2個環狀體的常

3、個環狀體的常見。見。薄血膜間日瘧環狀體薄血膜間日瘧環狀體服藥后形態改變的間日瘧原蟲服藥后形態改變的間日瘧原蟲薄血膜間日瘧環狀體薄血膜間日瘧環狀體惡性瘧薄血膜環狀體惡性瘧薄血膜環狀體薄血膜惡性瘧環狀體薄血膜惡性瘧環狀體薄血膜惡性瘧環狀體薄血膜惡性瘧環狀體三日瘧原蟲環狀體三日瘧原蟲環狀體卵形瘧原蟲環狀體卵形瘧原蟲環狀體大滋養體大滋養體間日瘧間日瘧惡性瘧惡性瘧蟲體不規則，較大；阿蟲體不規則，較大；阿米巴樣，空泡明顯；瘧米巴樣，空泡明顯；瘧色素細小，黃褐色。色素細小，黃褐色。較小，圓形；空泡小；較小，圓形；空泡小；早期瘧色素細小，金黃早期瘧色素細小，金黃色，晚期結成塊狀，黃色，晚期結成塊狀，黃褐色。褐

4、色。間日瘧滋養體間日瘧滋養體薄血膜間日瘧滋養體薄血膜間日瘧滋養體薄血膜間日瘧滋養體薄血膜間日瘧滋養體間日瘧環狀體、滋養體、間日瘧環狀體、滋養體、三日瘧滋養體（呈帶狀）三日瘧滋養體（呈帶狀）薄血膜間日瘧未成熟裂殖體薄血膜間日瘧未成熟裂殖體裂殖體裂殖體間日瘧間日瘧惡性瘧惡性瘧大于正常紅細胞；裂殖子大于正常紅細胞；裂殖子12122424個，通常個，通常1616個，排個，排列不規則，瘧色素常集于列不規則，瘧色素常集于一側，黃褐色。一側，黃褐色。小于正常紅細胞；裂殖小于正常紅細胞；裂殖子較小，子較小，8 82626個，通常個，通常8 81818個，排列不規則，個，排列不規則，瘧色素成團塊狀，黑褐瘧色素成

5、團塊狀，黑褐色。色。薄血膜間日瘧成熟裂殖體薄血膜間日瘧成熟裂殖體薄血膜間日瘧成熟裂殖體薄血膜間日瘧成熟裂殖體薄血膜間日瘧成熟裂殖體薄血膜間日瘧成熟裂殖體卵形瘧卵形瘧雌配子體雌配子體間日瘧間日瘧惡性瘧惡性瘧大于正常紅細胞，圓形；大于正常紅細胞，圓形；核小，致密，深紅色，核小，致密，深紅色，偏于一側，胞漿深藍色；偏于一側，胞漿深藍色；瘧色素散在。瘧色素散在。新月形，兩端較尖；核新月形，兩端較尖；核小，致密，深紅色，位小，致密，深紅色，位于中央；胞漿深藍色；于中央；胞漿深藍色；瘧色素圍于核周。瘧色素圍于核周。雄配子體雄配子體間日瘧間日瘧惡性瘧惡性瘧大于正常紅細胞，圓形；大于正常紅細胞，圓形；核大，疏

6、松，淺紅色，核大，疏松，淺紅色，多位于中央；胞漿淺藍多位于中央；胞漿淺藍色或淡紅色；瘧色素散色或淡紅色；瘧色素散在。在。臘腸形，兩端鈍圓，核臘腸形，兩端鈍圓，核大，疏松，淡紅色，位大，疏松，淡紅色，位于中央；胞漿淺藍色或于中央；胞漿淺藍色或淺紅色；瘧色素位于核淺紅色；瘧色素位于核周。周。薄血膜配子體薄血膜配子體薄血膜配子體薄血膜配子體惡性瘧配子體惡性瘧配子體惡性瘧配子體惡性瘧配子體惡性瘧配子體惡性瘧配子體大配子體與大滋養體的形態區別大配子體與大滋養體的形態區別間日瘧間日瘧2 2、厚血膜上瘧原蟲形態特征、厚血膜上瘧原蟲形態特征. . 環狀體（環狀體（R R）. . .間日瘧環狀體間日瘧環狀體.

7、. .惡性瘧環狀體惡性瘧環狀體. . 滋養體（滋養體（T T）. . .間日瘧滋養體間日瘧滋養體. . .惡性瘧滋養體惡性瘧滋養體. . 早期裂殖體（早早期裂殖體（早S S）. . .間日瘧裂殖體間日瘧裂殖體. . .惡性瘧裂殖體惡性瘧裂殖體. . 晚期裂殖體晚期裂殖體. . .間日瘧晚期裂殖體間日瘧晚期裂殖體. . .惡性瘧惡性瘧晚期裂殖體晚期裂殖體厚血膜間日瘧原蟲形態厚血膜間日瘧原蟲形態厚血膜間日瘧原蟲形態厚血膜間日瘧原蟲形態厚血膜間日瘧原蟲形態厚血膜間日瘧原蟲形態厚血膜間日瘧原蟲形態厚血膜間日瘧原蟲形態厚血膜間日瘧滋養體厚血膜間日瘧滋養體間日瘧環狀體間日瘧環狀體圖注：本片上、下、左、右各

8、有一個瘧原蟲。上、右、圖注：本片上、下、左、右各有一個瘧原蟲。上、右、左均為大小不同的環狀體；下為大滋養體，蟲體已斷左均為大小不同的環狀體；下為大滋養體，蟲體已斷裂成數塊，但可見有薛氏點的紅細胞殘骸裂成數塊，但可見有薛氏點的紅細胞殘骸間日瘧間日瘧本片中部有兩個白細胞，在其左上方、左下方各有一個大滋養體；其右上方有兩個大滋本片中部有兩個白細胞，在其左上方、左下方各有一個大滋養體；其右上方有兩個大滋養體，胞漿皆已縐縮成數塊，但皆有紅細胞殘骸可見養體，胞漿皆已縐縮成數塊，但皆有紅細胞殘骸可見間日瘧間日瘧蟲體位于本片中部，胞漿皺縮為多塊，色素聚集于蟲體右上方；本蟲上方為一個大滋養體蟲體位于本片中部，胞

9、漿皺縮為多塊，色素聚集于蟲體右上方；本蟲上方為一個大滋養體滋養體滋養體裂殖體裂殖體間日瘧間日瘧厚血膜惡性瘧環狀體厚血膜惡性瘧環狀體厚血膜間日瘧原蟲形態厚血膜間日瘧原蟲形態7個環狀體散在于個環狀體散在于5個白細胞之間，每個蟲體可見一個紅色的核和藍色斷裂的或皺縮的原個白細胞之間，每個蟲體可見一個紅色的核和藍色斷裂的或皺縮的原漿漿惡性瘧惡性瘧.配子體（配子體（G） 2.5.1間日瘧配子體間日瘧配子體 2.5.1.1 完整的配子體完整的配子體 2.5.1.2 漿裂斷收縮，核與色素如常漿裂斷收縮，核與色素如常 2.5.1.3 漿已腐蝕消失，僅有核與色素漿已腐蝕消失，僅有核與色素 2.5.1.4 核消失，

10、僅有漿與色素核消失，僅有漿與色素 2.5.l.5 核漿均已消失。僅有色素顆粒，以其沿邊分布核漿均已消失。僅有色素顆粒，以其沿邊分布 的特點即可確認的特點即可確認 2.5.2 惡性瘧配子體惡性瘧配子體 2.5.2.1 正常配子體正常配子體 2.5.2.2 圓形配子體圓形配子體 2.5.2.3 梭形（槍形）配子體梭形（槍形）配子體 2.5.2.4 腐蝕的配子體腐蝕的配子體厚血膜惡性瘧配子體厚血膜惡性瘧配子體四、瘧原蟲與其它物體的鑒別四、瘧原蟲與其它物體的鑒別1. 血小板血小板2. 染液殘渣染液殘渣3. 幼紅細胞殘骸幼紅細胞殘骸4. 白細胞的破碎殘骸白細胞的破碎殘骸5. 疑似原蟲胞漿疑似原蟲胞漿6.

11、 疑似瘧色素疑似瘧色素7. 疑似瘧原蟲核疑似瘧原蟲核五、鏡檢工作所需注意的事項五、鏡檢工作所需注意的事項1 1、在鏡檢中顯微鏡的使用：油鏡、凹鏡、視野需按一定、在鏡檢中顯微鏡的使用：油鏡、凹鏡、視野需按一定順序逐個檢查。順序逐個檢查。 2 2、瘧原蟲鏡檢工作中，凡是發熱病人。瘧疾、疑似瘧疾、瘧原蟲鏡檢工作中，凡是發熱病人。瘧疾、疑似瘧疾、及不明原因的發熱病人均需進行瘧原蟲鏡檢。及不明原因的發熱病人均需進行瘧原蟲鏡檢。 3 3、做好鏡檢登記：凡是鏡檢瘧原蟲的均需如實登記，陰、做好鏡檢登記：凡是鏡檢瘧原蟲的均需如實登記，陰、陽性片保存待考核。陽性片保存待考核。 4 4、每一個月上報一次鏡檢數。包括

12、鏡檢人數、陽性、陰、每一個月上報一次鏡檢數。包括鏡檢人數、陽性、陰性。性。5 5、如發現惡性瘧以最、如發現惡性瘧以最快的通信方法，在快的通信方法，在2424小時內報縣、小時內報縣、市、省疾病預防控制機構，陽性血片留待上級復核。市、省疾病預防控制機構，陽性血片留待上級復核。 六、血片制作與染色六、血片制作與染色1 1、血片的清潔、血片的清潔 新的載皮片必須洗潔凈后才可直接浸于新的載皮片必須洗潔凈后才可直接浸于 95%95%的酒精中，的酒精中，然后一一取出，用軟而潔凈并沒有棉花毛的細布擦干，然后一一取出，用軟而潔凈并沒有棉花毛的細布擦干，擦亮，妥善放置，勿使灰塵沾污。擦亮，妥善放置，勿使灰塵沾污。

13、 用過的載玻片可用用過的載玻片可用5 5之煮沸肥皂水洗滌，將玻片一之煮沸肥皂水洗滌，將玻片一張一張的放入其中待肥皂水稍冷后，用毛刷或紗布細張一張的放入其中待肥皂水稍冷后，用毛刷或紗布細心拭擦。再用清水漂洗干凈并以紗布擦干，然后浸于心拭擦。再用清水漂洗干凈并以紗布擦干，然后浸于 9595酒精內脫脂，照上述法處理，酒精內脫脂，照上述法處理， 亦可用洗滌液清洗，在整個擦洗過程中，應注意避免亦可用洗滌液清洗，在整個擦洗過程中，應注意避免玻片互相磨擦，而使玻片面磨毛，以致不堪使用。玻片互相磨擦，而使玻片面磨毛，以致不堪使用。采血的部位和方法采血的部位和方法 l以末梢以末梢血為主。血為主。l以以75%75

14、%酒精棉球消毒耳垂待酒精干后，左酒精棉球消毒耳垂待酒精干后，左手拇指和食指緊捏指頭或耳垂手拇指和食指緊捏指頭或耳垂，右手持，右手持一次性采血針迅速刺入，第一滴血不必一次性采血針迅速刺入，第一滴血不必擦掉，即可應用擦掉，即可應用。采血的血量采血的血量l厚血膜血量約為厚血膜血量約為5ul5ul左右左右( (即一小滴即一小滴) )，涂，涂成邊緣光滑之園形，直徑約成邊緣光滑之園形，直徑約0.80.81.01.0厘厘米左右。米左右。l薄血膜血量只需薄血膜血量只需1.0-1.0-1.51.5ulul左右左右, ,過多則過多則血膜過厚過大。薄膜宜涂成舌狀長約血膜過厚過大。薄膜宜涂成舌狀長約2.52.5厘米，

15、寬約厘米，寬約2 2厘米厘米采血的時間采血的時間l進行瘧疾普查時，在同一時間內常常需進行瘧疾普查時，在同一時間內常常需要檢查很多居民，故一般無法考慮取血要檢查很多居民，故一般無法考慮取血的時間。的時間。l但在診斷臨床的瘧疾患者時，就應當考但在診斷臨床的瘧疾患者時，就應當考慮在什么時候取血較為適宜，尤在確定慮在什么時候取血較為適宜，尤在確定不下蟲種和查不到瘧原蟲的疑似瘧疾患不下蟲種和查不到瘧原蟲的疑似瘧疾患者的情況下。者的情況下。采血的時間采血的時間-間日瘧間日瘧l間日瘧原蟲及三日瘧原蟲，在患者剛發冷發熱間日瘧原蟲及三日瘧原蟲，在患者剛發冷發熱以后，大部是在環狀滋養體期，故這一時期區以后，大部是

16、在環狀滋養體期，故這一時期區別瘧原蟲種類是不容易的。雖在別瘧原蟲種類是不容易的。雖在般情況下，般情況下，隨便什么時間檢查感染者的末稍血液隨便什么時間檢查感染者的末稍血液, ,多少能多少能查到各個時期的原蟲，但查到各個時期的原蟲，但適當的取血時間適當的取血時間，一，一般是在患者般是在患者發作數小時至十余小時發作數小時至十余小時，即已滋養，即已滋養發育至具有易于鑒別的晚期滋養體期發育至具有易于鑒別的晚期滋養體期采血的時間采血的時間-惡性瘧惡性瘧l惡性瘧原蟲，從理論上說，因為惡性原蟲的裂體生殖惡性瘧原蟲，從理論上說，因為惡性原蟲的裂體生殖是在內臟的毛細血管內進行的，所以在發作之前，患是在內臟的毛細血

17、管內進行的，所以在發作之前，患者的末稍血液中不易查到。但實際情況不盡如此，一者的末稍血液中不易查到。但實際情況不盡如此，一般在受染者的末稍血液中，隨時能見到少數惡性瘧原般在受染者的末稍血液中，隨時能見到少數惡性瘧原蟲的環狀滋養體，蟲的環狀滋養體，l雖然如此，較理想的取血時間，是在發作后的雖然如此，較理想的取血時間，是在發作后的2020小時小時左右，因為這個時候，環狀滋養體雖已滋長發育至最左右，因為這個時候，環狀滋養體雖已滋長發育至最高峰，但尚未回至內臟的毛細血管中去進行裂體生殖。高峰，但尚未回至內臟的毛細血管中去進行裂體生殖。l環狀滋養體的數量與構造，有助于瘧原蟲種類的鑒別。環狀滋養體的數量與

18、構造，有助于瘧原蟲種類的鑒別。惡性瘧原蟲的配子體很易識別，但在初發時，一般需惡性瘧原蟲的配子體很易識別，但在初發時，一般需要在發作八日后才能在末稍血液中出現，應當注意要在發作八日后才能在末稍血液中出現，應當注意厚、薄血膜的形狀和位置厚、薄血膜的形狀和位置l薄血膜寬薄血膜寬2cm，長，長2.5cml厚血膜直徑厚血膜直徑0.8-1cml假定將玻片劃成三格等分，則厚血膜應位于中假定將玻片劃成三格等分，則厚血膜應位于中格靠右側線處，薄血膜則從玻片中央起至左格格靠右側線處，薄血膜則從玻片中央起至左格中部止，右端空格供記錄姓名，編號或貼標簽中部止，右端空格供記錄姓名，編號或貼標簽之用之用(如圖如圖)標簽血

19、片的制作血片的制作1 1l玻片的執持方法：玻片的執持方法： 無論在拭擦玻片，制作血片或染無論在拭擦玻片，制作血片或染色血片時，手指僅可夾持玻片兩側色血片時，手指僅可夾持玻片兩側緣，切匆觸及玻片之上下面以免手緣，切匆觸及玻片之上下面以免手上油脂污及玻片面，使薄血涂布不上油脂污及玻片面，使薄血涂布不勻，厚血膜易于脫落勻，厚血膜易于脫落4、厚血膜涂制、厚血膜涂制l取潔凈的載玻片和推片各一張載玻片放桌上，推片以右手取潔凈的載玻片和推片各一張載玻片放桌上，推片以右手拇指和食指持其二側，以左端下角從受檢者之耳垂沾取血拇指和食指持其二側，以左端下角從受檢者之耳垂沾取血滴，在載玻片之適當位置，滴，在載玻片之適

20、當位置， 自內向外回轉擴大，涂成厚自內向外回轉擴大，涂成厚血膜，使厚薄均勻。涂畢后用干棉球拭掉推片上和耳垂上血膜，使厚薄均勻。涂畢后用干棉球拭掉推片上和耳垂上之殘留小量血液。之殘留小量血液。血片的制作血片的制作- -厚血膜涂制厚血膜涂制l取潔凈的載玻片和推片各一張載玻片放桌上，取潔凈的載玻片和推片各一張載玻片放桌上，推片以右手拇指和食指持其二側，以左端下角推片以右手拇指和食指持其二側，以左端下角從受檢者之耳垂沾取血滴，在載玻片之適當位從受檢者之耳垂沾取血滴，在載玻片之適當位置，置， 自內向外回轉擴大，涂成厚血膜，使厚自內向外回轉擴大，涂成厚血膜，使厚薄均勻。涂畢后用干棉球拭掉推片上和耳垂上薄均

21、勻。涂畢后用干棉球拭掉推片上和耳垂上之殘留小量血液。之殘留小量血液。血片的制作血片的制作-薄血膜涂制薄血膜涂制l以推片左端中央沾取薄血膜所需之血，與載玻以推片左端中央沾取薄血膜所需之血，與載玻片約成片約成2525一一4545度角，使血滴向二旁擴展至一定度角，使血滴向二旁擴展至一定寬度時，立即向左邊輕輕迅速推出即成薄血膜。寬度時，立即向左邊輕輕迅速推出即成薄血膜。推時速度之快慢和角度均影響血膜的厚薄程度，推時速度之快慢和角度均影響血膜的厚薄程度，最理想的薄血膜是一層血細胞，血細胞的分布最理想的薄血膜是一層血細胞，血細胞的分布排列比較均勻。無裂縫，無空隙。排列比較均勻。無裂縫，無空隙。血片的編號血

22、片的編號l血片編號可根據實際操作進行。血片編號可根據實際操作進行。l號碼必須不易脫落，建議用鉛筆在薄血膜上編號碼必須不易脫落，建議用鉛筆在薄血膜上編號。號。血片的固定和脫膜血片的固定和脫膜l薄血膜用甲醇固定薄血膜用甲醇固定l現場檢查的血片厚血膜可以不脫血膜，直接染現場檢查的血片厚血膜可以不脫血膜，直接染色。色。l保存時間較長的標本片厚血膜要脫血膜后保存。保存時間較長的標本片厚血膜要脫血膜后保存。血片染色前保存的注意事項血片染色前保存的注意事項l平放、平放、 有蓋、有蓋、 防止灰、塵和植物孢子污染。防止灰、塵和植物孢子污染。l防止蒼蠅、蟑螂等昆蟲吮吸防止蒼蠅、蟑螂等昆蟲吮吸l自然干燥，不能太陽曬

23、和火烤自然干燥，不能太陽曬和火烤制作血片的注意事項制作血片的注意事項l制成的血片切勿用制成的血片切勿用火烤、日曬火烤、日曬，以免血紅蛋白凝固無，以免血紅蛋白凝固無法脫除。血片放置待干時不可傾斜，否則厚血膜中血法脫除。血片放置待干時不可傾斜，否則厚血膜中血細細 胞沉在一邊，可使厚薄不勻。此外還要防止蒼蠅胞沉在一邊，可使厚薄不勻。此外還要防止蒼蠅吮吸血膜和灰塵污染血片。吮吸血膜和灰塵污染血片。l 制成的血膜須完全干燥后制成的血膜須完全干燥后( (自然情況下約自然情況下約4-124-12小時才小時才能全干燥；必要時，可置于能全干燥；必要時，可置于3 73 7的暖箱中，促其速的暖箱中，促其速干干) )始可進行