1、會計學1第一頁，共18頁。應用范圍：應用范圍： 1.病毒及亞細胞病毒及亞細胞 組份分離組份分離(fnl) 2.蛋白梯度分離蛋白梯度分離(fnl) 3.脂蛋白分離脂蛋白分離(fnl) 4.RNA梯度沉淀梯度沉淀 5.質粒質粒DNA提純提純 Back第1頁/共17頁第二頁，共18頁。Back第2頁/共17頁第三頁，共18頁。第3頁/共17頁第四頁，共18頁。相對離心力（RCF）由于轉頭(zhun tu)有不同的制造商制造，半徑不同，故用相對離心力來表示離心力的大小。RCF (g) = Fc/F重力 = mG/mg = r2/g = 1.11910-5N2r =11.2r(N/1000)2也有：根據(jù)

2、這個公式，相對離心力（RCF）和每分鐘轉數(shù)（N）之間便可以互換，這種互換關系是很有實用價值的。Back為了為了(wi le)簡便簡便第4頁/共17頁第五頁，共18頁。Back勻漿介質，一般為一定濃度的蔗糖溶液加入其它離子成分勻漿介質，一般為一定濃度的蔗糖溶液加入其它離子成分，可以維持亞細胞，可以維持亞細胞(xbo)組分的滲透壓。組分的滲透壓。第5頁/共17頁第六頁，共18頁。臺式高、超臺式高、超速離心機速離心機0.6-10萬萬rpm離心機離心機制備制備(zhbi)性性分析分析(fnx)性性分析分析(fnx)性超速離性超速離心機心機普通離心機普通離心機冰凍離心機冰凍離心機臺式（或臺式（或地面式）

3、地面式）普通離心普通離心機機大容量冰大容量冰凍離心機凍離心機小于小于0.6萬萬rpm高速冰高速冰凍離心凍離心機機0.6-2.5萬萬超速冰凍超速冰凍離心機離心機2.5-8萬或萬或更高更高( (分析性超速離心主要用于檢測分析性超速離心主要用于檢測大分子物質的沉降特征和結構等大分子物質的沉降特征和結構等) )概述概述Back ！第6頁/共17頁第七頁，共18頁。離心機一般由離心機主機，轉頭離心機一般由離心機主機，轉頭(zhun tu)，離心管三部分，離心管三部分組成。組成。Back第7頁/共17頁第八頁，共18頁。一般一般(ybn)制備制備離心離心 一般制備離心是指在分離、濃縮、提純樣品中，不必制備

4、密度梯度的一次完成(wn chng)的離心操作，實驗室用低、高速離心機可應用于此項技術。臺式或地面臺式或地面(dmin)式普通離式普通離心機心機Back第8頁/共17頁第九頁，共18頁。高速(o s)冰凍離心機Back第9頁/共17頁第十頁，共18頁。缺點是：分離效果差，不能一次缺點是：分離效果差，不能一次得到純顆粒；壁效應嚴重，特得到純顆粒；壁效應嚴重，特別是當顆粒很大或濃度很高時，別是當顆粒很大或濃度很高時，在離心管一側會出現(xiàn)沉淀；顆在離心管一側會出現(xiàn)沉淀；顆粒被擠壓，離心力過大、離心時粒被擠壓，離心力過大、離心時間過長會使顆粒變形、聚集而失間過長會使顆粒變形、聚集而失活。活。細胞器沉降(

5、chnjing)順序依次為：核、線粒體、溶酶體與過氧化物酶體、內質網(wǎng)與高基體、核蛋白體。差速離心法：差速離心法：第10頁/共17頁第十一頁，共18頁。Low speedHigh speed差數(shù)(ch sh)離心法Back第11頁/共17頁第十二頁，共18頁。密度梯度離心法： 用具有梯度的介質來替換離心管中密度均一的介質，使介質分為不同的層次，濃度低的在上層，高的在底層。細胞勻漿加在最上層，隨后離心。這樣，不同大小、形態(tài)、密度的顆粒，就會以不同的速度向下移動，擊中到不同的區(qū)域，可以分別(fnbi)收集。該法的優(yōu)點是：分離效果好，可一次獲得較純顆粒；適應范圍廣，既能分離具有沉淀系數(shù)差的顆粒，又能分

6、離有一定浮力密度的顆粒；顆粒不會積壓變形，能保持顆粒活性，并防止已形成的區(qū)帶由于對流而引起混合。缺點： 離心時間較長；需要制備梯度；操作嚴格，不宜掌握。 Back第12頁/共17頁第十三頁，共18頁。 將離心機轉數(shù)換算為相對離心力時，首先，在 r標尺上取已知的半徑和在 N 標尺上取已知的離心機轉數(shù)。然后，將這兩點間劃一條直線，在圖中間 RCF標尺上的交叉點即為相應的相對離心力數(shù)值。注意(zh y)，若已知的轉數(shù)值處于 N 標尺的右邊，則應讀取 RCF 標尺右邊的數(shù)值；同樣，轉數(shù)值處于 N 標尺左邊，則讀取 RCF標尺左邊的數(shù)值。半徑半徑(bnjng)相對相對(xingdu)離心力離心力轉速轉速

7、方法：方法：兩點一兩點一線法線法Back第13頁/共17頁第十四頁，共18頁。c）樣品應預先平衡，使用離心機微）樣品應預先平衡，使用離心機微量離心時離心套管與樣品應同時量離心時離心套管與樣品應同時平衡。平衡。d）揮發(fā)性或腐蝕性液體離心時，應）揮發(fā)性或腐蝕性液體離心時，應使用帶蓋的離心管，并確保液體使用帶蓋的離心管，并確保液體不外漏以免侵蝕機腔或造成事故。不外漏以免侵蝕機腔或造成事故。e）每次操作完畢，應做好使用情況）每次操作完畢，應做好使用情況記錄，應定期對機器各項性能進記錄，應定期對機器各項性能進行檢修。行檢修。f）離心過程中若發(fā)現(xiàn)異常現(xiàn)象，應）離心過程中若發(fā)現(xiàn)異常現(xiàn)象，應立即關閉電源，報請

8、有關技術人立即關閉電源，報請有關技術人員檢修。員檢修。Back第14頁/共17頁第十五頁，共18頁。第15頁/共17頁第十六頁，共18頁。3000rpm離心離心5min，所得的沉淀，所得的沉淀是葉綠體是葉綠體4用用0.35mol/L NaCl 溶液稀釋，放溶液稀釋，放置于冰箱中保存。在干凈的載玻置于冰箱中保存。在干凈的載玻片上滴加葉綠體懸液，加蓋玻片片上滴加葉綠體懸液，加蓋玻片在顯微鏡下光差葉綠體的形態(tài)在顯微鏡下光差葉綠體的形態(tài)Back第16頁/共17頁第十七頁，共18頁。NoImage內容(nirng)總結會計學。Back。細胞分級分離式一種通過離心從而分離細胞內不同結構成分的細胞器。= 1.11910-5N2r。其優(yōu)點是：操作簡單，離心后用傾倒法即可將上清夜與沉淀分開，并可使用容量較大的角式轉