1、 實驗 胃蛋白酶片的測定實驗目的：掌握以胃蛋白酶測定法測定胃蛋白酶片中胃蛋白酶的效價。實驗原理：精密稱取本品適量，加鹽酸溶液制成每1mL中約含0.2-0.4個單位的溶液，照胃蛋白酶測定法，測定胃蛋白酶的效價。實驗部分：1.材料與設備血紅蛋白試液、三氟醋酸溶液、鹽酸溶液紫外可見分光光度計2.操作步驟1）. 供試品溶液的制備取本品5片，置研缽中，加鹽酸溶液少許，研磨均勻，移至250mL量瓶中，加上述鹽酸溶液稀釋至刻度，搖勻，精密稱取適量，用上述鹽酸溶液稀釋制成每1mL中約含0.2-0.4個單位的溶液，作為供試品溶液。2）. 對照品溶液的制備精密稱取酪氨酸對照品適量，加鹽酸溶液稀釋制成每1mL中約含

2、0.5mg的溶液，作為對照品溶液。3）供試品的測定 取大小相同的試管6支，其中3支精密加入對照品溶液1mL，另3支精密加入供試品溶液1mL，置37±0.5水浴中，保溫5分鐘，精密加入預熱至37±0.5的血紅蛋白試液5mL，搖勻，并準確計時，在37±0.5水浴中反應10分鐘，立即精密加入5%三氟醋酸溶液5mL，搖勻，濾過，取續(xù)濾液備用。另取試管2支，各精密加入血紅蛋白試液5mL，置37±0.5水浴中保溫10分鐘，再精密加入5%三氟醋酸溶液5mL，其中一支加供試品溶液1mL，另一支加上述鹽酸溶液1mL，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，分別作為供試品和對照品的空白對照，

3、照紫外-可見分光光度法，在275nm的波長處測定吸光度，按下列公式計算，即得。注意事項：思考題： 實驗 三磷酸腺苷二鈉片總核苷酸含量測定實驗目的：掌握以胃蛋白酶測定法測定胃蛋白酶片中胃蛋白酶的效價。實驗原理：精密稱取本品適量，加鹽酸溶液制成每1mL中約含0.2-0.4個單位的溶液，照胃蛋白酶測定法，測定胃蛋白酶的效價。實驗部分：1.材料與設備血紅蛋白試液、三氟醋酸溶液、鹽酸溶液紫外可見分光光度計2.操作步驟1）. 供試品溶液的制備取本品5片，置研缽中，加鹽酸溶液少許，研磨均勻，移至250mL量瓶中，加上述鹽酸溶液稀釋至刻度，搖勻，精密稱取適量，用上述鹽酸溶液稀釋制成每1mL中約含0.2-0.4

4、個單位的溶液，作為供試品溶液。2）. 對照品溶液的制備精密稱取酪氨酸對照品適量，加鹽酸溶液稀釋制成每1mL中約含0.5mg的溶液，作為對照品溶液。3）供試品的測定 取大小相同的試管6支，其中3支精密加入對照品溶液1mL，另3支精密加入供試品溶液1mL，置37±0.5水浴中，保溫5分鐘，精密加入預熱至37±0.5的血紅蛋白試液5mL，搖勻，并準確計時，在37±0.5水浴中反應10分鐘，立即精密加入5%三氟醋酸溶液5mL，搖勻，濾過，取續(xù)濾液備用。另取試管2支，各精密加入血紅蛋白試液5mL，置37±0.5水浴中保溫10分鐘，再精密加入5%三氟醋酸溶液5mL，

5、其中一支加供試品溶液1mL，另一支加上述鹽酸溶液1mL，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，分別作為供試品和對照品的空白對照，照紫外-可見分光光度法，在275nm的波長處測定吸光度，按下列公式計算，即得。注意事項：思考題： 實驗七 藥物的一般雜質檢查一、實驗目的：1. 掌握藥物的一般雜質檢查原理與實驗方法。2. 熟悉一般雜質檢查項目與意義。二、實驗原理： 藥物的一般雜質：是指在自然界中分布較廣泛，在多種藥物的生產和貯藏過程中容易引入的雜質，如酸、堿、水分、氯化物、硫酸鹽、砷鹽、鐵鹽、重金屬等。 1.比色法(colorimetry)是通過比較或測量有色物質溶液顏色深度來確定待測組分含量的方法。比濁法是指測量透

6、過懸浮質點介質的光強度來確定懸浮物質濃度的方法，本法主要是用于測定能形成懸浮體的沉淀物質。a、酸堿度檢查：是用藥典規(guī)定的方法對藥物中的酸度、堿度及酸堿度等酸堿性雜質進行檢查。檢查時應以新沸并放冷至室溫的水為溶劑。不溶于水的藥物，可用中性乙醇等有機溶劑溶解。常用的方法有酸堿滴定法，指示劑法以及pH值測定法。b、氯化物檢查法：氯化物在硝酸溶液中與硝酸銀作用，生成氯化銀沉淀而顯白色渾濁，與一定量的標準氯化鈉溶液和硝酸銀在同樣條件下用同法處理生成的氯化銀渾濁程度相比較，測定供試品中氯化物的限量。反應離子方程式：Cl- + Ag+ AgCl（白色）c、鐵鹽檢查法：三價鐵鹽在硝酸酸性溶液中與硫氰酸鹽生成紅

7、色可溶性的硫氰酸鐵絡離子，與一定量標準鐵溶液用同法處理后進行比色。反應離子方程式：Fe3+ + 3SCN- Fe（SCN）3（紅棕色）。2.限量計算:雜質限量%=(V標準×C標準)/W樣)×100%。式中V標準為標準液體積，C標準為標準液濃度，W樣為樣品取樣量。三、實驗內容：1.實驗材料、設備：葡萄糖、氯化鈉原料藥。25ml、50mL納氏比色管、刻度吸管、電子天平。2.實驗操作步驟：（一）葡萄糖1、酸度 取本品2.0g，加水20mL溶解后，加酚酞指示液3滴與氫氧化鈉滴定液（0.02mol/L）0.20mL，應顯粉紅色。2、溶液的澄清度與顏色 取本品5g，加熱水溶解后，放冷，

8、用水稀釋至10mL，溶液應澄清無色；如顯渾濁，與1號濁度標準液（附錄H）比較，不得更濃；如顯色，與對照液（取比色用氯化鈷液3mL、比色用重鉻酸鉀液3mL與比色用硫酸銅液6mL，加水稀釋成50mL）1.0mL加水稀釋至10mL比較，不得更深。3、乙醇溶液的澄清度 取本品1.0g，加90%乙醇30mL，置水浴上加熱回流約10分鐘，溶液應澄清。4、氯化物 取本品0.6g，加水溶解使成25mL，再加稀硝酸10mL；溶液如不澄清，應濾過；置50mL納氏比色管中，加水使成約40mL，搖勻，即得供試溶液。另取標準氯化鈉溶液6.0mL，置50mL納氏比色管中，加稀硝酸10mL，加水使成40mL，搖勻，即得對照

9、溶液。于供試溶液與對照溶液中，分別加入硝酸銀試液1.0mL，用水稀釋，使成50mL，搖勻，在暗處放置5分鐘，同置黑色背景上，從比色管上方向下觀察、比較。供試溶液所顯渾濁度不得較對照液更濃（0.01%）。5、干燥失重取本品，在105干燥至恒重，減失重量不得過9.5%。6、硫酸鹽 取本品2.0g，加水溶解使成約40mL；溶液如不澄清，應濾過；置50mL納氏比色管中，加稀鹽酸2mL，搖勻，即得供試溶液。另取標準硫酸鉀溶液2.0mL，置50mL納氏比色管中，加水使成約40mL，加稀鹽酸2mL，搖勻，即得對照溶液。于供試溶液與對照溶液中，分別加入25%氯化鋇溶液5mL，用水稀釋至50mL，充分搖勻，放置

10、10分鐘，同置黑色背景上，從比色管上方向下觀察、比較。供試溶液所顯渾濁度不得較對照液更濃（0.01%）。7、亞硫酸鹽與可溶性淀粉 取本品1.0g，加水10mL溶解后，加碘試液1滴，應即顯黃色。8、鐵鹽 取本品2.0g，加水20mL溶解后，加硝酸3滴，緩緩煮沸5分鐘，放冷，加水稀釋使成45mL，加硫氰酸銨溶液（30100）3mL，搖勻，如顯色，與標準鐵溶液2.0mL用同一方法制成的對照液比較，不得更深（0.001%）。9、 蛋白質 取本品 1.0g，加水 10ml 溶解后，加磺基水楊酸溶液（15）3ml，不得發(fā)生沉淀。（二）氯化鈉雜質檢查1、溶液的澄清度 取本品5.0g，加水25ml溶解后，溶液

11、應澄清。2、碘化物取本品的細粉5.0g，置瓷蒸發(fā)皿內，滴加新配制的淀粉混合液適量使晶粉濕潤，置日光下（或日光燈下）觀察，5分鐘內晶粒不得顯藍色痕跡。3、硫酸鹽 取本品5.0g，加水溶解成約40ml（溶解如顯堿性，可滴加鹽酸使成中性），溶液如不澄清，應濾過，置50ml納氏比色管中，加稀鹽酸2ml，搖勻，即得供試溶液。另取標準硫酸鉀溶液1.0ml置50ml納氏比色管中，加水使成約40ml，加稀鹽酸2ml，搖勻，即得對照溶液。于供試溶液與對照溶液中，分別加入25%氯化鋇溶液5ml，用水稀釋使成50ml，充分搖勻，放置10分鐘，同置黑色背景上，從比色管上方向下觀察，比較，供試品管不得更濃（0.002%

12、）。4、鋇鹽取本品4.0g，加水20ml，溶解后，濾過，濾液分為兩等份，1份中加稀硫酸2ml，另一份中加水2ml，靜置15分鐘，兩液應同樣澄清。四、實驗注意事項：1、比色管的正確使用選擇配對的兩支納氏比色管，用清潔液蕩洗除去污物，再用水沖洗干凈。采用旋搖的方法使管內液體混合均勻。2、平行操作標準與樣品必須同時進行實驗，加入試劑量等均應一致。觀察時，兩管受光照的程度應一致，使光線從正面照入，比色時置白色背景上，比濁時置黑色背景上，自上而下地觀察。 五、思考題 4.1 中國藥典（2000 年版）在葡萄糖雜質檢查中規(guī)定檢查十二項，是根據什么原則制訂的？目的何在？4.2 重金屬與砷鹽檢查的原理是什么？

13、如何計算其限量？5 參考文獻 5.1 葡萄糖：中國藥典（2000 年版）二部，第 815 頁實驗 過氧化氫酶活性測定（高錳酸鉀滴定法）一、實驗目的掌握比色法測定過氧化物酶活性的原理和操作方法 二、實驗原理 過氧化氫酶普遍存在于植物的所有組織中，其活性與植物的代謝強度及抗寒、抗病能力有一定關系，故常加以測定。過氧化氫酶（catalase）屬于血紅蛋白酶，含有鐵，它能催化過氧化氫分解為水和分子氧，在此過程中起傳遞電子的作用，過氧化氫則既是氧化劑又是還原劑。可根據H2O2的消耗量或O2的生成量測定該酶活力大小。在反應系統(tǒng)中加入一定量（反應過量）的過氧化氫溶液，經酶促反應后，用標準高錳酸鉀溶

14、液（在酸性條件下）滴定多余的過氧化氫。即可求出消耗的H2O2的量。 三、材料、儀器設備及試劑（一）材料：小麥葉片（二）儀器設備：1. 研缽；2. 三角瓶；3. 酸式滴定管；4. 恒溫水浴；5. 容量瓶。（三）試劑：10%H2SO4；0.2 mol/L pH7.8磷酸緩沖液；0.1mol/L 高錳酸鉀標準液(稱：取KMnO4（AR）3.1605g，用新煮沸冷卻蒸餾水配制成1000ml，再用0.1mol/L 草酸溶液標定)；4. 0.1mol/L H2O2市售30%H2O2大約等于17.6mol/L，取30%H2O2溶液5.68ml，稀釋至1000ml，用標準0.1mol/L KMnO4

15、溶液（在酸性條件下）進行標定；5. 0.1mol/L 草酸：稱取優(yōu)級純H2C2O4.2H2O 12.607g，用蒸餾水溶解后，定容至1000ml。   三、實驗步驟  （一）酶液提?。喝⌒←溔~片2.5g加入pH7.8的磷酸緩沖溶液少量，研磨成勻漿，轉移至25ml容量瓶中，用該緩沖液沖洗研缽，并將沖洗液轉至容量瓶中，用同一緩沖液定容，4000rpm離心15min，上清液即為過氧化氫酶的粗提液。（二）取50ml三角瓶4個（兩個測定，另兩個為對照），測定瓶加入酶液2.5ml，對照加煮死酶液2.5ml，再加入2.5ml 0.1mol/L H2O2，同時計時，于30恒溫水浴

16、中保溫10min，立即加入10%H2SO42.5ml。  用0.1mol/L KMnO4標準溶液滴定，至出現(xiàn)粉紅色（在30min內不消失）為終點。  四、結果處理     酶活性用每g鮮重樣品1min內分解H2O2的mg數(shù)表示：  過氧化氫酶活性（H2O2mg/g/min）（A-B）×VT/(W×VS×1.7×t)  式中：A對照KMnO4滴定ml數(shù)；B酶反應后KMnO4滴定ml數(shù)；VT提取酶液總量（ml）； VS反應時所用酶液量（ml

17、）；W樣品鮮重（g）；t反應時間（min）；     1.71ml 0.1mol/L KMnO4相當于1.7mgH2O2。    過氧化氫酶的活性測定: 在植物體中，黃素氧化酶類的代謝產物常包含H2O2，如光呼吸中的乙醇酸氧化酶、呼吸作用中的葡萄糖氧化酶、氨基酸氧化酶、醛氧化酶等。H2O2的積累可導致破壞性的氧化作用，而過氧化物酶和過氧化氫酶則可以清除H2O2，是植物體內重要的活性氧清除系統(tǒng)之一。其活性還與植物的抗逆性有密切關系，本實驗利用高錳酸鉀滴定法測定過氧化氫酶活性。 一、原理：過氧化氫酶屬于血紅蛋白酶，含有

18、鐵，它能催化過氧化氫分解為水和分子氧，在此過程中起傳遞電子的作用，H2O2則既是氧化劑，又是還原劑。 R(Fe+2)H2O2=R(Fe+3OH-)2 R(Fe+3OH-)2H2O2=R(Fe+2)22H2OO2 合并上式：2H2O2=2H2OO2 據此，可根據H2O2的消耗量或O2的生成量測定該酶活力大小。 在反應系統(tǒng)中加入一定量（反應過量） 的過氧化氫溶液，經酶促反應后，用標準高錳酸鉀溶液（在酸性條件下）滴定多余的過氧化氫。 5H2O22KMnO44H2SO45O22KHSO48H2O2MnSO4 即可求出消耗的H2O2量。 二、儀器和用具：研缽、三角瓶50cm3×4、鐵架、酸式滴

19、定管、恒溫水浴、容量瓶 三、試劑： 10H2SO4；0.2mol/l磷酸緩沖液pH7.8； 0.1mol/L高錳酸鉀標準液： 3.1605gKMnO4 (AR) 用新煮沸的蒸餾水配制成1000mL， 用0.1mol/L的草酸溶液標定； 0.1mol/LH2O2： 市售30H2O2大約等于17.6mol/L， 取30H2O2溶液5.68mL稀釋至1000mL，用標準0.1mol/l KMnO4溶液（在酸性條件下）進行標定。 四、方法： 1. 酶液提?。?取小麥葉片2.5g加入pH7.8的磷酸緩沖液少量，研磨成勻漿，轉移至25ml容量瓶中，將研缽沖洗干凈，沖洗液轉移至容量瓶中，并用同一緩沖液定容，

20、4000rpm離心，上清液即為過氧化氫酶粗提液。 2. 取50ml三角瓶4個（兩個測定，兩個對照），測定加入酶液2.5ml，對照為煮死酶液2.5ml； 再加入2.5ml 0.1mol/l H2O2，同時計時間，于30恒溫水浴中保溫10分鐘，立即加入10H2SO4 2.5ml。 3. 用0.1mol/L KMnO4標準溶液滴定H2O2，至出現(xiàn)粉紅色（在30分鐘內不消失）為終點。 4. 結果計算： 酶活性用每克鮮重樣品在10分鐘內分解H2O2的毫克數(shù)表示： (A-B)*Vt/V1*1.7 酶活（酶分解的H2O2 mg/g鮮重）- W式中： -對照用KMnO4 ml數(shù) -酶反應后KMnO4滴定ml數(shù)

21、 t-酶液總量ml 1-反應所用酶液量ml -樣品鮮重(g) 1.7-1ml 0.1mol/l KMnO4相當于1.7mg H2O2 注意所用KMnO4溶液及H2O2溶液使用前要經過標定，0.1mol/l H2O2要新配制。實驗 比色法測定過氧化物酶活性 一、實驗目的掌握比色法測定過氧化物酶活性的原理和操作二、原理過氧化物酶是植物體內普遍存在的、活性較高的一種酶，它與呼吸作用、光合作用及生長素的氧化等都有密切關系，在植物生長發(fā)育過程中，它的活性不斷發(fā)生變化，因此測量這種酶，可以反映某一時期植物體內代謝的變化。在有過氧化氫存在下，過氧化物酶能使愈創(chuàng)木酚氧化，生成茶褐色物質，該物質在470nm處有

22、最大吸收，可用分光光度計測量470nm的吸光度變化測定過氧化物酶活性。 三、實驗內容 （一）實驗材料 馬鈴薯塊莖。 （二）試劑、設備1 .100 mmol L 磷酸緩沖液 pH6.0 （見附錄）。 2 .反應混合液：100 mmolL 磷酸緩沖液（pH6.0）50mL于燒杯中，加入愈創(chuàng)木酚28l，于磁力攪拌器上加熱攪拌，直至愈創(chuàng)木酚溶解，待溶液冷卻后，加入30 %過氧化氫19l，混合均勻，保存于冰箱中。 分光光度計，研缽，恒溫水浴鍋，100 mL容量瓶，吸管，離心機。 （三）實驗步驟 1稱取植物材料1g，剪碎，放入研缽中，加適量的磷酸緩沖液研磨成勻漿，以4000rmin離心15 min ，上清

23、液轉入100mL容量瓶中，殘渣再用5mL磷酸緩沖液提取一次，上清液并入容量瓶中，定容至刻度，貯于低溫下備用。 2取光徑1cm比色杯2只，于1只中加入反應混合液3mL和磷酸緩沖液1mL，作為對照，另1只中加入反應混合液3mL和上述酶液1mL（如酶活性過高可稀釋之），立即開啟秒表記錄時間，于分光光度計上測量波長470nm下吸光度值，每隔1min讀數(shù)一次。 四、結果計算 以每分鐘吸光度變化值表示酶活性大小，即以A 470 /min·g（鮮重）表示之。也可以用每1 min 內 A 470 變化0.01為1個過氧化物酶活性單位（u）表示。 過氧化物酶活性 u/（g·min）= 式中：

24、 A 470反應時間內吸光度的變化。 W 植物鮮重，g 。 V T 提取酶液總體積，mL 。 V s 測定時取用酶液體積, mL 。 t 反應時間，min 。 實驗 葡萄糖的一般雜質檢查一、實驗要求1掌握一般雜質檢查的項目及雜質限量計算方法。2掌握一般雜質檢查的原理和方法。二、實驗原理1酸堿度檢查是指用藥典規(guī)定的方法對藥物中的酸度、堿度及酸堿度等酸堿性雜質進行檢查。檢查時應以新沸并放冷至室溫的水為溶劑。不溶于水的藥物，可用中性乙醇等有機溶劑溶解。常用的方法有酸堿滴定法，指示劑法以及pH值測定法。2氯化物檢查是指藥物中微量氯化物在硝酸溶液中與硝酸銀試液作用，生成氯化銀白色渾濁液，與一定量的標準氯

25、化鈉溶液在相同條件下生成的氯化銀渾濁相比較，以判斷供試品中氯化物的限量Cl-+AgNO3AgCl3硫酸鹽檢查是指藥物中微量硫酸鹽與氯化鋇試液在酸性溶液中作用生成的白色渾濁液，與一定量的標準硫酸鉀溶液與氯化鋇試液在相同的條件下生成的渾濁比較，以判斷供試品中硫酸鹽的限量。SO+BaCI2BaSO44鐵鹽檢查是指藥物中三價鐵鹽在酸性溶液中與硫氰酸鹽試液生成紅色可溶性的硫氰酸鐵配離子，與一定量的標準鐵溶液，用同法處理后進行比色，以判斷供試品中三價鐵鹽的限量。Fe3+6SCN-Fe (SCN) 63-5重金屬檢查 是指重金屬（以鉛為代表）在弱酸性（pH33.5）溶液中與硫代乙酰胺或硫化鈉作用，生成黃色到

26、棕黑色的硫化物混懸液，與一定量的標準鉛溶液經同法處理后的顏色比較，以控制藥品中重金屬含量。CH3CSNH2CH3CONH2+H2SPb2+H2SPbS6砷鹽檢查（古蔡氏法）是利用金屬鋅與酸作用產生新生態(tài)的氫，與藥物中微量砷鹽作用生成具揮發(fā)性的砷化氫，遇溴化汞試紙，產生黃色至棕色的砷斑，與定量標準砷溶液所生成的砷斑比較，以判斷藥物中砷鹽的限量。AsO33-+3Zn+9H+AsH3+3Zn2+3H2OAsH3+2HgBr22HBr+AsH (HgBr)2 （黃色）AsH3+3HgBr23HBr+As (HgBr)3 （棕色）五價砷在酸性溶液中也能被金屬鋅還原為砷化氫，但生成砷化氫的速度較三價砷慢，

27、故在反應液中加入碘化鉀及酸性氯化亞錫將五價砷還原為三價砷，碘化鉀被氧化生成碘，碘又可被氯化亞錫還原為碘離子。AsO43+2I-+2H+AsO33-+I2+H2OAsO43-+Sn2+AsO33-+Sn4+H2OI2+Sn2+2I-+Sn4+溶液中的碘離子，又可與反應中產生的鋅離子生成穩(wěn)定的配離子，有利于生成砷化氫的反應不斷進行。4I-+Zn2+ZnI42-7熾灼殘渣檢查在機藥物經熾灼炭化，再加硫酸濕潤，低溫加熱至硫酸蒸氣除盡后，于高溫（700800）熾灼至完全灰化，使有機物破壞分解變?yōu)閾]發(fā)性物質逸出，殘留的非揮發(fā)性無機雜質（多為金屬的氧化物或無機鹽類）稱為熾灼殘渣，或稱為硫酸鹽灰分。三、實驗步

28、驟1酸度取本品2g，加新沸過的冷水20ml溶解后，加酚酞指示液3滴與氫氧化鈉滴定液（0.02mol/L）0.2ml，應顯粉紅色。2氯化物取本品0.60g，加水溶解使成25ml（溶解加顯堿性，可滴加硝酸使成中性），再加稀硝酸10ml；溶液如不澄清，應濾過；置50ml納氏比色管中，加水使成約40ml，搖勻，即得供試溶液。另取標準氯化鈉溶液（10gCl-/ml）6.0ml，置50ml納氏比色管中，加稀硝酸10ml，加水使成40ml，搖勻，即得對照溶液。于供試溶液與對照溶液中，分別加入硝酸銀試液1.0ml，用水稀釋使成50ml，搖勻，在暗處放置5分鐘，同置黑色背景上，從比色管上方向下觀察，比較，供試溶

29、液不得比對照液更濃（0.01%）。3硫酸鹽取本品2.0g，加水溶解使成約40ml（溶液如顯堿性，可滴加鹽酸使成中性）；溶液如不澄清，應濾過；置50ml納氏比色管中，加稀鹽酸2ml、搖勻，即得供試溶液。另取標準硫酸鉀溶液（100gSO42-/ml）2.0ml，置50ml納氏比色管中，加水使成約40ml，加稀鹽酸2ml，搖勻，即得對照溶液，于供試溶液與對照溶液中，分別加入25%的氯化鋇溶液5ml，用水稀釋成50ml，充分搖勻，放置10分鐘，同置黑色背景上，從比色管上方向下觀察，比較，供試溶液不得比對照溶液更濃（0.01%）。4鐵鹽取本品2.0g，加水20ml溶解后，加硝酸3滴，緩緩煮沸5分鐘，放冷

30、，加水稀釋使成45ml，加硫氰酸銨溶液（30100）3ml，搖勻，如顯色、與標準鐵溶液2.0ml用同一方法制成的對照液比較，不得更深（0.001%）。5重金屬取25ml納氏比色管兩支，甲管中加標準鉛溶液（10ug pb/ml）2ml，加醋酸鹽緩沖液（pH3.5）2ml，加水稀釋成25ml。取本品4.0g置于乙管中，加水23ml溶解，加醋酸鹽緩沖液（pH3.5）2ml，若供試液帶顏色，可在甲管中滴加少量的稀焦糖溶液或其它無干擾的有色溶液，使之與乙管一致；再在甲乙兩管中分別加硫代乙酰胺試液各2ml，搖勻，放置2分鐘，同置白紙上，自上向下透視，乙管中顯示的顏色與甲管比較，不得更深（含重金屬不得過百萬

31、分之五）。6砷鹽取本品2.0g，置檢砷瓶中，加水5ml溶解后，加稀硫酸5ml與溴化鉀溴試液0.5ml，置水浴上加熱約20分鐘，使保持稍過量的溴存在，必要時，再補加溴化鉀溴試液適量，并隨時補充蒸散的水分，放冷，加鹽酸5ml與水適量使成28ml，加碘化鉀試液5ml與酸性氯化亞錫試液5滴，在室溫放置10分鐘后，加鋅粒2g，迅速將瓶塞塞緊（瓶塞上已置有醋酸鉛棉花及溴化汞試紙的檢砷管），并在2540的水浴中反應45分鐘，取出溴化汞試紙，將生成的砷斑與標準砷溶液一定量制成的標準砷斑比較，顏色不得更深，含砷量不得過百萬分之一。標準砷斑制備：精密量取標準砷溶液（1g/ml）2ml，置另一檢砷瓶中，加鹽酸5ml

32、與水21ml，照上述方法自“加碘化鉀試液5ml”起依法操作，即得標準砷斑。7熾灼殘渣取本品1.0g，置已熾灼至恒重的坩堝中，精密稱定，緩緩熾灼至完全灰化，放冷至室溫，加硫酸0.51ml使?jié)駶櫍蜏丶訜嶂亮蛩嵴魵獬M后，在700800熾灼使完全灰化，移置干燥器內，放冷至室溫，精密稱定后，再在700800熾灼至恒重，即得。所得熾灼殘渣不得超過0.1%。四、注意事項1比色或比濁操作，均應在納氏比色管中進行。選擇比色管時，應注意樣品管與標準管的體積相等，玻璃色質一致，管上刻度均勻，高低一致，如有差別，不得超過2mm。2樣品液與對照品液的操作應遵循平行操作的原則，并應注意按操作順序加入各種試劑。3比色、

33、比濁前應使比色管內試劑充分混勻，然后將兩管同置于黑色或白色背景上，自上而下觀察。4砷鹽檢查時，取用的樣品管與標準管應力求一致，管的長短，內經一定要相同，以免生成的色斑大小不同，影響比色。鋅粒加入后，應立即將檢砷管蓋上，塞緊，以免AsH3氣體逸出。5熾灼殘渣時，恒重的操作條件，如所用的干燥器、坩堝鉗、坩堝置于干燥器內放置時間等，必須一致。五、問題與討論1一般雜質檢查的主要項目有哪些？2比色、比濁操作應遵循的原則是什么？3簡述古蔡氏法檢砷所加各個試劑的作用與操作注意點。4熾灼殘渣的成敗關鍵是什么？恒重的概念和意義是什么？實驗三 藥物的特殊雜質檢查一、實驗目的1熟悉某些藥物中的特殊雜質。2掌握特殊雜

34、質檢查的幾種主要方法及操作。二、實驗原理1. 麻醉乙醚在空氣、日光及濕氣的作用下，易氧化分解為有毒的過氧化物，過氧化物與碘化鉀淀粉溶液反應，可產生蘭藍色。反應式可表示如下：C2H5OOC2H5+2KI+H2OC2H5OC2H5+5KOH+I2I2+淀粉蘭色2. 乙酰水楊酸屬芳酸酯類藥物，在生產和貯存過程中均會產生水楊酸。水楊酸對人體有毒。應對其進行限度檢查。其檢查原理是利用水楊酸具有酚羥基，可與高鐵鹽溶液作用形成紫藍色，而乙酰水楊酸因無酚羥基，不呈此反應。3.腎上腺素是由腎上腺酮經氫化還原制成。若氫化不完全，可能引進酮體雜質，所以藥典規(guī)定應檢查酮體。其檢查原理是利用酮體雜質在310nm波長處有

35、最大吸收，而腎上腺素藥物本身在此波長處幾乎沒有吸收。根據雜質的吸光度，可控制腎上腺素中酮體的限量。三、實驗內容操作步驟1麻醉乙醚中過氧化物的檢查取本品5ml，置總容量不超過15ml的具塞比色管中，加新制的碘化鉀淀粉溶液（取碘化鉀10g，加水溶解成95ml，再加淀粉指示液5ml，混合）8ml，密塞，強力振搖1分鐘，在暗處放置30分鐘，兩液層均不得染色。2阿司匹林腸溶片中游離水楊酸的檢查 取本品5片，研細，用乙醇30ml分次研磨，并移入100ml量瓶中，充分振搖，用水稀釋至刻度，搖勻，立即濾過，精密量取續(xù)濾液2ml，置50ml納氏比色管中，用水稀釋至50ml，立即加新制的稀硫酸鐵銨溶液（取1ml/

36、L鹽酸溶液1ml，加硫酸鐵銨指示液2ml后，再加水適量使成100ml）3ml，搖勻，30秒鐘內如顯色，與對照液（精密量取0.01%水楊酸溶液4.5ml，加乙醇3ml、0.05%酒石酸溶液1ml，用水稀釋至50ml，再加上述新制的稀硫酸鐵銨溶液3ml，搖勻）比較，不得更深（1.5%）3腎上腺素中酮體的檢查取本品，加鹽酸溶液（92000）制成每1ml中含2.0mg的溶液，照紫外-可見分光光度法（中國藥典2005年版附錄2223頁），在310nm的波長處測定，吸光度不得過0.05。四、注意事項1進行水楊酸檢查時，應在中性或弱酸性溶液（pH46）中進行。若在強酸性溶液中，生成的紫蘭色配合物會分解褪色。

37、2測定吸光度時，應注意吸收峰波長位置的準確性，除另有規(guī)定外，吸收峰波長應在該品種項下規(guī)定的波長±1nm以內。五、問題與討論1特殊雜質檢查的常用方法有哪些？2利用紫外-可見分光光度法檢查雜質有何優(yōu)點？3薄層色譜法檢查雜質常用的方法有哪幾種？其結果如何判斷？實驗 苯甲酸鈉的含量測定一、目的掌握雙相滴定法測定苯甲酸鈉含量的原理和操作二、原理苯甲酸鈉為有機酸的堿金屬鹽，顯堿性，可用鹽酸標準液滴定。 在水溶液中滴定時，由于堿性較弱(pkb=9.80)突躍不明顯，故加入與水不相溶混的溶劑乙醚提除反應生成物苯甲酸，使反應定量完成，同時也避免了苯甲酸在瓶中析出影響終點的觀察。三、實驗材料、設備苯甲酸

38、鈉、鹽酸（0.5mol/L）、乙醚、甲基橙指示液分液漏斗、酸式滴定管、具塞錐形瓶、四、操作步驟取本品1.5g，精密稱定，置分液漏斗中，加水約25ml，乙醚50ml與甲基橙指示液2滴，用鹽酸滴定液 (0.5mol/L)滴定，隨滴隨振搖，至水層顯持續(xù)橙紅色，分取水層，置具塞錐形瓶中，乙醚層用水5ml洗滌，洗滌液并入錐形瓶中，加乙醚20ml，繼續(xù)用鹽酸滴定液(0.5mol/L)滴定，隨滴隨振搖，至水層顯持續(xù)橙紅色，即得，每1ml的鹽酸滴定液(0.5mol/L)相當于72.06mg的C7H5O2Na。本品按干燥品計算，含C7H5O2Na不得少于99.0四、注意事項1.滴定時應充分振搖，使生成的苯甲酸轉

39、入乙醚層。2.在振搖和分取水層時，應避免樣品的損失，滴定前，應用乙醚檢查分液漏斗是否嚴密。五、思考題1.乙醚為什么要分兩次加入?第一次滴定至水層顯持續(xù)橙紅色時，是否已達終點?為什么?2.分取水層后乙醚層用5ml水洗滌的目的是什么?實驗 雙波長分光光度法測定復方磺胺甲噁唑片的含量一、目的1.掌握復方制劑的分析特點及賦形劑的干擾與排除方法。2.掌握雙波長分光光度法測定復方磺胺甲噁 唑片中磺胺甲噁唑與甲氧芐啶含量的原理與方法。二、實驗內容1.供試品溶液的制備取本品10片，精密稱定，研細，精密稱取適量(約相當于磺胺甲噁 唑50mg與氧芐啶10mg)，置于100ml量瓶中，加乙醇適量，振搖15分鐘磺胺甲

40、口惡唑與甲氧芐啶溶解，加乙醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。2.對照品溶液的制備精密稱取105干燥至恒重的磺胺甲噁 唑對照品50mg與甲氧芐啶對照品10mg，分置100ml量瓶中，各加乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，分別作為對照品溶液(1)與對照品溶液(2)。3.磺胺甲噁 唑的測定精密量取供試品溶液與對照品溶液(1)、(2)各2ml，分置100ml量瓶中，各加0.4氫氧化鈉溶液稀釋至刻度，搖勻。取對照品溶液(2)的稀釋液；以257nm為測定波長(2)， 在304nm波長附近(每間隔0.5nm)選擇等吸收點波長為參與波長(1)，要求A=A2A1=0。再在2與1波長處分別測定供試品溶液

41、的稀釋液與對照品溶液(1)的稀釋液的吸收度，求出各自的吸收度差值(A)，計算，即得。4.甲氧芐啶的測定精密量取上述供試品溶液與對照品溶液(1)(2)各5ml，分置100ml量瓶中，各加鹽酸一氯化鉀溶液 取鹽酸液(0.1mol/L)75ml與氯化鉀6.9g，加水至1000ml搖勻 稀釋至刻度，搖勻。取對照品溶液(1)的稀釋液，以239.0nm為測定波長(2)，在295nm波長附近(每間隔0.2nm)選擇等吸收點波長為參比波長(1)，要求A=A2A1=0。再在2與1波長處分別測定供試品溶液的稀釋液與對照品溶液(2)的稀釋液的吸收度，求出各自的吸收度差值(A)，計算，即得。本品每片中含磺胺甲噁 唑(

42、C10H11N3O2S)應為0.3600.440g，含甲氧芐啶(C14H12N4O3)應為72.088.0mg。三 說明1.磺胺甲噁 唑與甲氧芐啶的結構分別為： SMZ與TMP的紫外吸收圖譜分別為： 圖1.SMZ的紫外吸收圖譜 圖2.TMP的紫外吸收圖譜1 TMP(2.0g/ml)； 2 SMZ(10.0g/ml) 1 TMP(5.0g/ml)； 2 SMZ(25.0g/ml)3 SMZTMP； 4 輔料 3 SMZTMP； 4 輔料2.復方磺胺甲噁唑片的處方為：磺胺甲噁唑 400g甲氧芐啶 80g 制成1000片3.本實驗采用雙波長分光光度法測定SMZ和TMP的含量。由于干擾組分在測定波長和

43、參比波長處吸收度相等，可在計算A時消去，所以應用本法可以不經分離，直接測定復方制劑中SMZ和TMP的含量。四、思考題1.試簡述雙波長分光光度法的原理。2.試查閱本品的其它分析方法，從中了解復方制劑分析的特點及發(fā)展趨勢。實驗 維生素C片的質量分析一、目的要求1、掌握碘量法的原理和操作方法。2、掌握常用輔料對制劑含量測定的影響和排除方法。3、掌握制劑的含量計算方法。二、實驗原理維生素C（Vc）又稱抗壞血酸，分子式為C6H8O6。Vc具有還原性，可被I2定量氧化，因而可用I2標準溶液直接滴定。其滴定反應式為：C6H8O6+I2=C6H6O6+2HI。用直接碘量法可測定藥物中的Vc含量。 由于Vc的還

44、原性很強，較易被溶液和空氣中的氧氧化，在堿性介質中這種氧化作用更強，因此滴定宜在酸性介質中進行，以減少副反應的發(fā)生。考慮到I-在強酸性溶液中也易被氧化，故一般選在pH=34的弱酸性溶液中進行滴定。三、主要儀器與藥品棕色滴定管：25 mL、移液管：50 mL、刻度吸管、量瓶100ml維生素C片、維生素C注射液、I2溶液、淀粉指示液四、操作維生素C為白色或略帶淡黃色片，含維生素C應為標示量的93.0%-107.0%。（一）維生素C片取本品適量相當于含Vc1.0g，加水20ml，振搖使溶解；將溶液濾過，取濾液，照紫外-可見分光光度法（附錄IVA），在420nm的波長處測定吸光度，不得過0.07。取本

45、品20片，精密稱定，研細，精密稱取適量（約相當于維生素C 0.2g），置100 mL量瓶中，加新沸過的冷水100 mL與2mol·L-1稀醋酸10 mL的混合液適量，振搖使維生素C溶解并稀釋至刻度，搖勻，經干燥濾紙迅速濾過，精密量取續(xù)濾液50 mL，加淀粉指示液1 mL，用（0.05 mol/L碘滴定液）滴定，至溶液顯藍色并持續(xù)30s不褪。每1mL碘滴定液相當于8.806 mg的維生素C。（二）維生素C 注射液本品為維生素 C的滅菌水溶液，無色或微黃色的澄明液體。含維生素C應為標示量的90.0%110.0%。本品中可加適量的焦亞硫酸鈉為穩(wěn)定劑。精密量取本品適量（約相當于維生素C 0.

46、2 g），加水15 mL與丙酮2 mL ，搖勻，放置5 min，加稀醋酸4 mL與淀粉指示液1 mL ，用碘滴定液（0.05mol/L）滴定，至溶液顯藍色并持續(xù)30 s不褪。每1 mL碘滴定液相當于8.806 mg的維生素C 。五、注意事項維生素C在空氣中易被氧化，過濾、滴定等操作應迅速。六、思考題1. 溶解I2時，加入過量KI的作用是什么？ 2. 維生素C固體試樣溶解時為何要加入新煮沸并冷卻的蒸餾水？ 3. 碘量法的誤差來源有哪些？應采取哪些措施減小誤差？I2溶液(約0.05mol·L-1)：稱取3.3g I2和5g KI，置于研缽中，加少量水，在通風櫥中研磨。待I2全部溶解后，將

47、溶液轉入棕色試劑瓶中，加水稀釋至250mL，充分搖勻，放暗處保存。實驗 非水滴定法測定諾氟沙星(氟哌酸)膠囊含量一、目的1.掌握非水滴定法的原理及操作;2.熟悉非水滴定在藥物分析中的應用。二、實驗原理1.定義：非水溶液滴定法即在非水溶劑中進行的滴定分析方法。一些很弱的酸或堿以及某些鹽類，在水溶液中進行滴定時，沒有明顯的滴定突躍，難于掌握滴定終點；另外還有一些有機化合物，在水中溶解度很小，因此，以水作溶劑的滴定分析受到一定的限制。所以，滴定分析法逐漸采用了各種非水溶劑作為滴定分析的介質，不僅能增大有機化合物的溶解度，而且能改變物質的化學性質（例如酸堿性及其強度），使在水中不能進行完全的滴定反應能

48、夠順利進行。2.非水溶液酸堿滴定法：是利用非水溶劑來改變物質的酸堿相對強度，即在水溶液中呈弱酸性或弱堿性的化合物，由于酸堿度太弱，不可能得到滴定的終點。如果選擇某些適當?shù)姆撬軇槿軇┦够衔镌黾酉鄬Φ乃岫瘸蔀閺娝幔蛘咴黾酉鄬Φ膲A度成為強堿，就可以順利地進行滴定的分析方法。3.應用：本法主要用來測定有機堿及其氫鹵酸鹽、磷酸鹽、硫酸鹽或有機酸鹽以及有機酸堿金屬鹽類藥物的含量，也用于測定某些有機弱酸含量。三、實驗材料、設備諾氟沙星膠囊、丙二酸、醋酐、冰醋酸、高氯酸、橙黃指示液酸式滴定管、試管、燒杯、水浴鍋等四、操作步驟1.諾氟沙星的鑒別(1)取本品內容物適量(約相當于諾氟沙星0.15g)置干燥試

49、管中，加丙二酸0.1g與醋酐2ml，振搖，并在8090水浴中加熱1015mm，顯紅棕色。(2)取本品內容物適量，加0.4氫氧化鈉溶液適量，振搖使諾氧沙星溶解，稀釋成每1ml中含諾氟沙星5g，濾過，棄去初濾液，取續(xù)濾液，在273，325與336nm波長處測定有最大吸收。2.含量測定 精密稱取本品內容物適量(約相當于諾氟沙星0.25g)，加冰醋酸30ml，振搖使諾氟沙星溶解，加橙黃指示液10滴，用高氯酸液(0.1mol/L)滴定，至溶液顯紫紅色，并將滴定的結果用空白試驗校正。五、注意事項1.ChP2010版規(guī)定本品含諾氟沙星應為標示量的90.0110.0,滴定時,每1ml0.1mol/L的高氯酸液

50、相當于31.93mg的C16H18FN3O3。 2. 0.1mol/L的高氯酸溶液的配制及標定參見ChP2010版附錄。高氯酸不穩(wěn)定，注意避光保存。3.水的體膨脹系數(shù)較小（0.21×10-3/0C），一般酸堿標準溶液的濃度受室溫改變的影響不大。而多數(shù)有機溶劑的體膨脹系數(shù)較大，例如，冰醋酸的體膨脹系數(shù)為（1.1×10-3/0C）其體積隨溫度改變較大。所以高氯酸冰醋酸溶液滴定樣品時和標定時溫度若有差別，則應重新標定或按下式將標準溶液的濃度加以校正： 式中：0.0011為冰醋酸的體膨脹系數(shù)，t0為標定時的溫度，t1為測定時的溫度，C0為標定時的濃度，C1為測定時的濃度。 4.現(xiàn)行藥典對本品含量測定的方法為HPLC法。五、思考題非水滴定應用于藥物分析有何特點? 哪幾類藥物適合用非水滴定法測定其含量。實驗 槐花的質量檢驗一、目的1.了解中藥分析檢驗常用的方法與特點;2.熟悉連續(xù)回流提取法；3.掌握黃酮類化合物的性質鑒別及比色法測定含量的原理及方法。二、實驗原理按中華人民共和國藥典，槐花項下規(guī)定了于槐花質量相關的項目有：形狀、鑒別、檢查、浸出物