1、«_曬詁 Contents尊的分亥和他他 0Q酶的話力測定 .b W V p LP w V 酶促反應(yīng)動(dòng)力學(xué)' 八- 亠亠一-O酶法分析同工酶O尋虛醫(yī)學(xué)上的應(yīng)用20iyi2n馨的分富和純化20 仙 2H酶的分離純化技術(shù)路線20152H細(xì)胞破碎動(dòng)物、植物或微生物細(xì)胞發(fā)酵液酶提取祥分離純化6V酶濃縮1離心分離，過濾分離，沉淀分酶貯存離，層析分離，電泳分離，萃取分離，結(jié)晶分離等.1礫的分富和純化L材料的選取與預(yù)處理一般盍選擇來源豐富.有效成分舍量豐 席的臟爰組織或細(xì)胞為原材料動(dòng)場組織常需線碎、脫脂等預(yù)處理以便 于有敗成分的提取酶的分富和純化2.細(xì)胞的破碎盡可能釆用研磨超步玻碎等場理方

2、比;緩沖液抽提 低溫（04°C）操作2.3.4.沉汶法 層析矗 電冰出 結(jié)A掛析廉聚乙二專況從法等電點(diǎn)沉淀法熱變性沉淀法有機(jī)誨剖沉淀出20152H礫的活力測良礫促反應(yīng)動(dòng)力學(xué)20W12T11 酶話力(Enzyme Activity)是指酶催化化學(xué)反應(yīng)的能力，也 即酶催化莖一化學(xué)反應(yīng)的反應(yīng)速度。2.酶反應(yīng)速度酶話力測定常采用測反應(yīng)初速度 的方凍。底場濃度的變化展起始濃度 的5%以內(nèi)的速度為初速度。201V12T1完成一文量 反應(yīng)所密的時(shí)間 »即在一岌條件 下將全部底楊轉(zhuǎn) 化為產(chǎn)所譜的 血間。 丿測定酶活力的方法的增加量。201V12T1化學(xué)法同住素法比色法測走方法電億 學(xué)出20

3、13/1：20 仙 2H比色或分光光度肉垠據(jù)底楊或產(chǎn)楊亦禁一玫長上有朗顯的特征哌 收差別建立起來的連續(xù)觀測方出。如NAD (?) HA340nm有特異吸收劭，故利 用該原理可以測是以N Ab(P)*或N AD(P)H為輔 酶的氣化還原酶的活力。礫的活力單住(U)及比活力/百令-丙傳虱磚I 活性的測定1酶的話力單住(U)： 1個(gè)酶話力單住，是描柱 特走條件下，1分鐘內(nèi)能將1微摩金(pmol)底腸轉(zhuǎn) 化為產(chǎn)楊所常的酶量。2.酶的比活力比話力的交小，就是酶舍量的大小，以U/mg 冬自表示。廉理谷丙轉(zhuǎn)気酶(ALT)和谷草轉(zhuǎn)氣酶(AST) 廣泛分布于人體各組織聲言的細(xì)胞內(nèi)，且 話性很壽，但正帝人血請(qǐng)中這

4、兩種轉(zhuǎn)氮酶 話性卻很低，當(dāng)組織受損傷，it成細(xì)胞通 透性增加乃至細(xì)胞壞死肘，ALT據(jù)性和 AST活性可朗顯升高。因此ALT和AST涪 性測定己廣臣應(yīng)用于臨廉檢撿。20W12H正常人各組織A ST及ALT活性(單位/克濕組織)組織 AST ALT 組織ASTALT心1560007100膳腺280002000140001200骨骼肌990004800肺10000700腎9100019000血清2016ALT主要分布于肝、腎細(xì)胞.心肌細(xì)胞等組織細(xì)胞內(nèi)，血清中的含 量很低.當(dāng)耕變使細(xì)胞膜通透性增高或細(xì)胞破壞時(shí).則血清ALT含量明 顯升高該項(xiàng)檢驗(yàn)可作為疾病診斷和預(yù)后判斷的指標(biāo)之

5、一 肝細(xì)胞中含ALT最豐富，測定ALT酶活性是檢査肝功能的重要指標(biāo)之 一.ALT顯著增高見于各種急性期肝炎及藥物中毒性肝細(xì)胞壞死.中等程 度增高見于肝癌、肝硬化、慢性肝炎及心肌梗Sh輕度增高見于阻塞性 黃疽及膽道炎等疾病201V12T1ALT活性測定的方法Karman分光光慶法ALT丙氨餓+a酮戊二酸里丙用酸+谷氨酸NADH+H+201V12T1丙氮酸紅櫬色LDH乳殿比色測定法NAD+|altA丙啊酸a 旳戊二酸IIm乙4二瑚基笨臍0H-榮賒瑙®I化合煬丙酮駿.二瑙基榮關(guān)ElH)011M sifc(Reitman-* I 30 min比色測定法與底煬作用60mim生成1撤克分子&qu

6、ot;L験為1單位C-NIG<H1H內(nèi)擁削礎(chǔ)a辯Hno2 4- :OLcoon內(nèi)啊烈二仍卑蠶喘單侄垠握比色 法所得光密度 值與分光光度 法作對(duì)此測丸 求得*毎毫升血詢?cè)?pH=74, 37V 條件下與底溝柱 用生成2.5撤載笛1單仕。COOHCH)CHtI -rCOCOOHEH*NoJ）H 卜A-co（iii g, <>_程蹤硏慍化fr物 < 刃櫬色）操作步驟見實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)第83頁2013/12/1實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)及結(jié)果 管號(hào)A520測定管（1測定空白標(biāo)準(zhǔn)管（3標(biāo)準(zhǔn)空白（2 （4計(jì)算公 式ALT酶活性=（Mohun法？ ？ A1-A2 20 XX2.5 A3-A4 1 0.1注意事項(xiàng)： 血清標(biāo)本 不宜溶血；應(yīng)準(zhǔn)確保證保溫條件及其他條件的一致性；2013/1