1、丿 huazhong agricultural universih題目:教指導教師:本科畢業(yè)掄文多態(tài)性及其與產(chǎn)羔數(shù)性狀的關聯(lián)分析賈征學號 040801030動物科學姓名:專業(yè):山羊褪黑激素受體1a基因hk i酶切楊利國職稱中國武漢二oo八年六月密級分類號華中農(nóng)業(yè)大學本科畢業(yè)論文山羊褪黑激素受體1a基因hk i酶切多態(tài)性及其與產(chǎn)羔數(shù)性狀的關聯(lián)分析hint i rflp of melatonin receptor 1 a(mtnria)gene and the association with the litter size traits in goat學生姓名學生學號 學生專業(yè)：動物科學 指導教

2、師：教授華中農(nóng)業(yè)大學動物科學學院二oo八年六月摘要4abstract5前言61. 材料與方法71. 1材料71. 1. 1試驗動物71. 1.2實驗材料71. 1.3主要試劑的來源71. 1.4主要儀器設備81. 1.5主要試劑的配置81. 1. 6主要分子牛物學軟件錯誤！未定義書簽。1.2方法91. 2. 1.山羊基因組dna的提取91.2.2. 引物設計及其序列101.2. 3. pcr擴增及其電泳檢測101. 2. 4.限制性內(nèi)切酶消化擴增產(chǎn)物以及電泳檢測121.2.5.統(tǒng)計分析132結果與分析132. 1 pcr擴增結果132. 2酶切結果142.3褪黑激素基因頻率和基因型頻率分析結果

3、152. 4 mtnrz基因型與波爾山羊頭胎產(chǎn)羔數(shù)性狀的關聯(lián)分析152. 5 mtnrz基因型與經(jīng)產(chǎn)產(chǎn)羔數(shù)性狀的關聯(lián)分析163 討論163. 1個同山羊品種基因型頻率及基因頻率差異163. 2 .ima不同基因型對波爾山羊頭胎和經(jīng)產(chǎn)羔數(shù)的影響17參考文獻17致謝18山羊褪黑激素受體1a基因hm i酶切多態(tài)性及其與產(chǎn)羔數(shù)性狀的關聯(lián)分析摘要木研究以褪黑激素受體1a基因為候選基因，分析該基因多態(tài)性對山羊產(chǎn)羔 數(shù)性狀的影響。釆用限制性片段長度多態(tài)性(restriction fragment length polymorphism, pcr-rflp)方法，檢測了 65只波爾山羊和51馬頭山羊褪黑激 素

4、受體1a基因h加fl酶切多態(tài)性及其與產(chǎn)羔數(shù)性狀的關聯(lián)分析。結果表明，褪 黑激素受體1a基因在波爾山羊中存在h/fl酶切多態(tài)性，而在馬頭山羊樣本小 則無多態(tài)性。在波爾山羊屮，檢測到aa、gg兩種基因型，未檢測到ag型； 其中aa基因型個體在出現(xiàn)頻率最高，為0.554, gg型為0.446； a、g等位基 因頻率分別為0.554和0.446o性狀關聯(lián)分析結果表明：波爾山羊的m基因純合 型頭胎平均產(chǎn)羔數(shù)比gg基因雜合型多0. 07只，加性效應值為0. 035,顯性效應 值為-1.42；經(jīng)產(chǎn)羔數(shù)的aa型比gg型多0.09只；加性效應值為0. 046,顯性效 應值為-1.84o a等位基因可能與波爾山羊

5、產(chǎn)羔數(shù)呈正相關，該位點主要以加性 方式起作用。關鍵詞：山羊；繁殖性狀；褪黑激素受體；pcr-rflphint i -rflp of melatonin receptor 1 a (mtnr1a) gene and the association with the litter size traits in goatabstractin the present study, melatonin receptor i a gene (mtnr1a) was analysed to find the assocation with litter size in goat as a candidate

6、 gene hint i rflp (restriction fragment length polymorphism, rflp) of mtnr1a was found in 65 boer goats and 51 goats ma tou. no polymorphism was detected in ma tau goats - two genotypes aa, gg were found in boer goats. the frequency of aa genotype was higher than gg genotype, which were 0.554 and 0.

7、446，respectively. the allele frequencies for a and g were 0.554 and 0.446 the results of traits association analysis showed that individuals with aa genotype had additional 0.07 average litter size at first kidding in boer goat. the additive effect value was 0.035, while the dominant effects value -

8、1.42. moreover, aa genotype had additional 0.09 average litter size for multiparity, the additive and dominant effects value were 0.046 and -1-84, respectively. allele a was possiblely positively correlated with litter size in boer goats- the additive effect was dominant at the site.key words: goat；

9、 reproductive traits； mtnr1a； pcr-rflp-jkx. 1刖5褪黑激素主要是由松果體合成的，其它合成部位還有:視網(wǎng)膜、眼眶腔的副 淚腺、唾液腺、腸的嗜鉆細胞及紅細胞，松果體把對外界光照形成的神經(jīng)信息經(jīng) 下丘腦視交叉上核轉變成體液信息一z。1褪黑激素生理功能、作用機制；褪黑激素對生殖系統(tǒng)作用的機理主要是通過光作用于視網(wǎng)膜，然后通過視網(wǎng) 膜-下視丘至視交叉上核，再經(jīng)過一系列復朵的神經(jīng)交換至頸上神經(jīng)節(jié)，其節(jié)后 交感神經(jīng)作用于松果體。松果體分泌褪黑激素，通過下丘腦一垂體性腺軸影響生 殖系統(tǒng)。褪黑激素對生殖系統(tǒng)的作用因動物種類、生理狀態(tài)不同而表現(xiàn)出抑制、 促進或無作用的多

10、重性(焦傳珍，2005)o多項研究結果表明，褪黑激素雖然對 牛、鼠類、禽等動物和人的生殖系統(tǒng)的發(fā)育有抑制作用，但是對綿羊、山羊、鹿 等動物則明顯表現(xiàn)出促進作用。2. 褪黑激素受體類型、作用機制；褪黑激素受體屬于g蛋白耦聯(lián)受體家族。根據(jù)其分子生物學方法乂可分為 mtnryk、mtnrv wtnryc三種亞型(張凱等，2006)。h前在哺乳動物中還沒 有發(fā)現(xiàn)mtnrc受體，而具有明顯季節(jié)性繁殖特征的動物僅在垂體結節(jié)部發(fā)現(xiàn) j/w1a受體，提示垂體結節(jié)部可能是褪黑激素繁殖效應的作用位點。3. 褪黑激素受體分子標記在其它動物屮的研究進展冃前國內(nèi)外對綿羊m tnr1a基因已經(jīng)有所研究已經(jīng)很多了。mess

11、er等(1997)和notter等(2003)用mnll和r sa i酶分別對白面雜種羊、薩福克 羊、特克塞爾羊、柯泊華斯羊和合成系綿羊群體mtnr1a基因外顯了 2的824 bp 擴增產(chǎn)物進行消化，發(fā)現(xiàn)m n 1 1在5個綿羊群體屮都存在286 bp和236 bp 多態(tài)片段，r sa l都存在295 bp和290 bp多態(tài)片段。pelletier等(2000)用 m n ii限制性內(nèi)切幽消化2組發(fā)情行為有明顯差異(常年發(fā)情和季節(jié)性發(fā)情) 的merinos d arles母綿羊以及季節(jié)性發(fā)情明顯的ile2de2france母綿羊m tnr1a 基因外顯了 2的824 bp擴增產(chǎn)物，發(fā)現(xiàn)存在30

12、3 bp和236 bp多態(tài)片段。季從 亮等(2003)和chu等(2003)用m n 1 i和r sa i對常年發(fā)情的小尾寒羊和 湖羊以及季節(jié)性發(fā)情的多賽特羊和薩福克羊共146只綿羊m tnr1a基因外顯子2 的824 bp擴增產(chǎn)物進行pcr-rflp多態(tài)性分析，發(fā)現(xiàn)m n 1 i在4個綿羊品種中 都存在303 bp和236 bp多態(tài)片段,r sa i都存在290 bp和267 bp多態(tài)片段。 在綿羊屮的研究結果表明，該基因對綿羊繁殖性能存在影響。但是，對于山羊， 只有對產(chǎn)絨或營養(yǎng)調(diào)控的研究，日前尚未發(fā)現(xiàn)有對山羊繁殖性能影響的相關報 道。4. 本實驗目的意義木實驗室滑國華等（2006）在山羊m

13、tnrik屮共發(fā)現(xiàn)7個snps,對其屮4個 snps分析結果顯示:mtnr1a不同基因型對山羊產(chǎn)羔數(shù)性狀有一定的影響。為進 一步研究該基因對山羊產(chǎn)羔數(shù)性狀的影響，本試驗選取g493a突變位點，采用引 入酶切位點方法，即限制性片段長度多態(tài)性forced pcr-rflp （polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphsim）,分析該位點在馬頭山羊和波 爾山羊屮的分布情況，并分析該位點對波爾山羊產(chǎn)羔數(shù)彩響，為山羊標記輔助選 擇提供理論依據(jù)。1. 材料與方法1.1材料1.1.1試驗動物馬頭山羊51頭，采自湖北省十堰市；

14、波爾山羊65頭，采自湖北省宜都市波 爾山羊種羊場。頸靜脈采血10ml/只，edta抗凝，-20°c保存。1.1.2實驗材料1.5ml eppendorf 管、雙面板、微量移液槍（1000口1、200 口1、40 u 1、10 1、2. 5u 1）及槍頭、一次性pe塑料手套。1.1.3主要試劑的來源tagdna聚合酶購口上海生工生物工程技術有限公司；dna限制性內(nèi)切酶力f 1購門晶美生物工程有限公司；分子量標準loobp dna ladder和尸庭為勿如i購自上海生工生物工程技術 有限公司；三輕甲基氨基甲烷（tris）、苯酚、蛋白酶k、十二烷基硫酸鈉（sds）、w 胺、丙烯酰胺（acr

15、ylamide, acr） n_n'亞甲基丙烯酰胺（bisacrylamide） 瓊脂糖、澳化乙錠（eb）、瓊脂糖、乙二胺乙二酸二鈉鹽（edtana?）等均購自 武漢凌飛科技有限公司。1.1.4主要儀器設備表1主要儀器設備table 1 laboratory equipment and instruments儀器設備名稱型號生產(chǎn)廠家電熱恒溫水浴鍋gd120英國grant公司臺式禺心機tgl-16g上海安亭科學儀器廠梯度pcr儀t1 thermo cyler德國biometra公司冷凍離心機centrfuge 5810徳國eppendorf公司恒溫搖床hs80中國科學院武漢科學儀器廠口動

16、雙重純水蒸懈器sz-93上海亞榮?；瘍x器廠紫外分析儀uv-tv北京市新科技應川研究所電泳槽dyy-ttt北京六-儀器廠穩(wěn)壓穩(wěn)流電泳議dyy-2北京六一儀器廠手提式高壓滅菌鍋yxq-sg46-280a上海博訊實業(yè)有限公司醫(yī)療設備廠超純水儀waterpro美國labconco公司移液器lml； 200 u1； 40 n1；10p 1； 2. 5m 1芬蘭labsystems公司1.1.5主要試劑的配置1. 1. 51用于血液樣品采集的溶液的配制1) im tris, cl儲備液：稱取121. 4g tris堿溶于800ml雙蒸水屮，加濃鹽酸調(diào)至 ph二8.0,定容到1000mlo高壓滅菌,室溫保存

17、;2) 0. 5m edta (ph=8.0)：稱取 186. lg na2edta 2h20溶于800ml雙蒸水中,加入 naoh (約20g)調(diào)至ph=8.0,定容到1000ml0高壓滅菌，室溫保存;3) 10%sds：稱取50g sds加熱溶于400ml雙蒸水屮，定容至500ml o高壓滅菌， 室溫保存；4) 抗凝劑(0. 2medta)：量取200ml 0. 5m edta加入雙蒸水定容至500ml o1. 1. 5. 2用于基因組dna提取的溶液的配制1) 蛋白酶k：稱取200mg蛋白酶k溶于10ml雙蒸水，以lml分裝，-20£冷凍保存;2) 氯仿/異戊醇(24:1)：量

18、取480ml氯仿,加入20ml異戊醇,混勻；3) 3mnaac：稱取naac 3h20溶于400ml雙蒸水中，用hac調(diào)至ph二5. 2,加水定容至500ml o高壓滅菌，室溫保存；4) te緩沖液：loomm tris - cl (ph=8.0), imm edta (ph=8.0)。1. 1. 5. 3用于瓊脂糖凝膠電泳及檢測溶液的配制1) 50xtae儲備液:稱取242g tris堿溶于750ml雙蒸水中，加入57. lml hac、 100ml 0. 5m edta (ph=80),加水定容至 1000ml；2) 5xtbe儲備液：稱取54g tris堿和27. 5g硼酸溶p750ml

19、雙蒸水屮，加入20ml 0. 5m edta (ph = 8. 0),加水定容至 1000ml；3) 6x±樣緩沖液:0.25%混酚蘭，0.25%二甲苯青，15%ficoll聚蔗糖;4) 漠化乙錠(eb, 10mg/ml) :100ml雙蒸水中加入0. lg eb,攪拌使完全溶解, 轉入棕色試劑瓶，錫箔包裹。1. 1. 5. 4用于聚丙烯酰胺凝膠電泳和銀染的溶液的配制1) 30%丙烯酰胺(丙烯酰胺：甲叉雙丙烯酰胺=29:1 ) :700ml雙蒸水中加入290g 丙烯酰胺，10g甲叉雙丙烯酰胺，攪拌使完全溶解，加水定容至1000ml, 4°c 保存；2) 10%過硫酸較：稱取

20、lg過硫酸鞍溶于8ml雙蒸水，定容至10ml；3) 10%乙醇：量取50ml無水乙醇溶于450ml水中，混勻；4) 1% hn03：量取15ml濃hno,溶于985ml雙蒸水中，混勻；5) 0. 2% agn03：稱取lg agn0.3溶于500ml雙蒸水中，置于棕色試劑瓶；6) 3% na2c03 (0. 05%醛)：稱取30g無水na2c03)§于900ml雙蒸水中，加入l5ml 甲醛,定容至1000ml；7) 3% hac：量取30ml冰hac溶t970ml雙蒸水，混勻。1.2方法1.2. 1.山羊基因組dna的提冃從山羊頸靜脈采血10ml,放入裝有抗凝劑(0.5mol/led

21、tanq的離心管中, 6000r/min離心15min,棄上清，吸取口細胞沉淀(參雜少量紅細胞)于另一離心 管中；加入兩倍體積雙蒸鐳水(滅菌)，搖勻沉淀，靜置10min15min,破碎紅 細胞；6000r/min離心15min,輕輕棄去上清，留白細胞沉淀；加入ixset 5ml, 蛋白酶k (10mg/ml) 0. 1ml至終濃度200ng/ml, 10% sds 250 u 1 至終濃度0. 5%, 55°c水浴消化過夜；加入等體積飽和平衡酚輕輕搖勻，12000r/min離心15min, 輕輕吸取上層水相于另一離心管中，棄下相苯酚；重復上步；加入等體積苯酚/ 氯仿/異戊醇(25:2

22、4:1),輕輕搖動loinin, 12000r/min離心15min,輕輕吸取上 層水相于另一離心管屮，棄下層有機相；加入等體積氯仿/異戊醇(24:1),儀 搖動10min, 12000r/min離心15min,輕輕吸取上層水相于另一離心管中，棄下層 有機相；加入兩倍體積預冷無水乙醇，輕輕轉動管子，dna呈絮狀析出，用1ml 吸頭（滅菌）吸出dna沉淀，放入l5i】il離心管屮，加入預冷無水乙醇洗滌一次， 離心棄去無水乙醇，再用75%乙醇漂洗2次，小心吸去乙醇，待dna沉淀自然干燥 后,加入適量te （loou 1300u1）溶解。1.2. 2引物設計及其序列引物參考滑國華等（2008）進行設

23、計，序列如下：上游引物：5' acgacccgaggatctattcc 3'下游引物：5' atataagtcctggggcttcagatt 3',在下游引物中引入錯配堿基a,當突變位點為g （即反義鏈為c）時，可形 成hini i （gattc）酶切位點；當突變位點為a （即反義鏈為t）時，該酶切位 點缺失，由此可進行基因型判定。1.2.3.pcr擴增及其電泳檢測1.2. 3. 1 pcr擴增反應體系（表2）表2 pcr擴增反應體系（20ul）table 2 pcr amplification of the response system （20 u 1）反應

24、體系response system反應體積v(u1)response volume (u 1)滅菌蒸餡水14.610x buffer2mg2*1.2dntp0.2上游引物0.4下游引物0.4taq dna 聚合酶(5 u/ml )0.2模板dna1total201.2. 3.2退火溫度的優(yōu)化利用pcr機器上都有一個gradient功能，在一次pcr過程屮，對機器屮不 同位點的反應采用不同的退火溫度，一般在第一次實驗中，采用引物溶點上下10度設置退火溫度梯度。每個溫度梯度一個反應，最后電泳檢測并比較各個退 火溫度的條帶效果，得到最好結果。本試驗屮退火溫度設定為55 65°c,結果 表明

25、，退火溫度60°c時，無菲特異性帶，1=1的條帶最為清晰。1.2. 3.3 pcr反應程序(表3)表3 pcr反應程序table 3 pcr ampliflcation of the response term步驟stepspcr反應條件pcrreactionconditi ons溫度temperature時間time1預變性95 °c5min2c變性95 °c30sec3c退火60 °c30sec4c延伸72 °c30sec5延伸72 °c7min6保溫16°clomin第二步至第四步循環(huán)35次。1.2. 3.4瓊脂糖凝膠

26、電泳檢測pcr擴增產(chǎn)物用1. 5%瓊脂糖凝膠電泳檢測，eb染色，利用b10rad凝膠成 相系統(tǒng)凝膠成像系統(tǒng)進行成像分析，記錄結果并拍照。1.2. 3. 4.1瓊脂糖凝膠電泳方法(1) 灌膠將透明膠帶粘于灌膠模槽的兩端，制成灌膠模。放入梳子。將模放于水平臺 上。取一燒杯，放入：瓊脂糖0.75 g； 1xtae 50 mlo混勻，加熱，至瓊脂糖 徹底溶解。待稍冷后，加入5ul飽和的渓乙錠，輕晃混勻，然后輕輕倒入模子。 用吸頭吸去表面小泡。待冷卻成膠。(2) 上樣電泳輕輕拔出梳子，將膠兩頭的透明膠帶揭去，移入電泳槽，點樣孔一側靠近操 作者，注入1xtae緩沖液，浸沒凝膠。使用微量可調(diào)采樣器取3u1d

27、na充分混 勻于適量澳酚蘭，點樣于1.5%瓊脂糖凝膠孔內(nèi)，并點3u 1 600bp marker i作 為參照。點樣時，加樣頭尖端插入上樣孔內(nèi)1/3高度，輕輕將樣品推入，避免刺 入前后凝膠和刺穿凝膠底部。使比重較大的樣品自然沉入上樣孔底。接上電源：陽極遠離上樣孔，陰極靠近上樣孔（dna向陽極移動）。開啟電源，電壓調(diào)至100vo 2030min后檢查。1.2. 3. 4. 2成像分析利用bi0rad凝膠成和系統(tǒng)凝膠成像系統(tǒng)進行成像分析，記錄結果并拍照。1.2. 4.限制性內(nèi)切酶消化擴增產(chǎn)物以及電泳檢測1.2.4. 1酶切反應體系(表4)表4酶切反應體系table 4 pcr and the am

28、ount of the components反應體系response system反應體積v（p1）response volume (u 1)4. 70. 310滅菌蒸諸水10x buffer/77f i限制性內(nèi)切酶pcr產(chǎn)物total將上述酶切體系置37°c水浴鍋或恒溫箱中酶切過夜。1. 2. 4. 2非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測1. 2. 4. 2.1聚丙烯酰胺凝膠電泳操作步驟不同的實驗需要優(yōu)化聚丙烯瞅胺凝膠的交聯(lián)度和濃度，才能達到最好的實驗 效果，木實驗采取一下方法：1.在小燒杯中加入l&43ml雙蒸水，9. 33ml 30%丙烯瞅胺（29:1）, 7ml的5 xtbe

29、混勻；2.清洗制膠用玻璃板，烘t后用透明膠封好底邊和側邊，固定在制膠用的有機 玻璃板上；3.向小燒杯中加入245ul的10%ap, 13ul temed混勻后迅速灌膠；4.當膠灌至離玻璃板上邊緣0.5cm時停止灌膠，插入梳了，注意梳齒下不要有 氣泡，室溫聚合1小時；凝膠聚合好后，拔出梳子，注射器吸出梳齒孔中未聚合的液體；取下玻璃板，撕下膠線，固定在電泳槽上，倒入電泳緩沖液1 xtbe；在pcr產(chǎn)物中加入1/6體積上樣緩沖液，用微量進樣器取5ul酶切樣點樣， 同時點分子量標記物pbr322/mspl；8.上樣完畢后，打開電泳議以80v電泳20min,再調(diào)到120v屯泳45h。1. 2. 4. 2

30、. 2聚丙烯酰胺凝膠染色步!1. 拆下電泳裝置，剝下聚內(nèi)烯醜胺凝膠，放到一個駛料盤內(nèi)，用雙蒸水沖漂洗 2次；2. 加入500ml 10%乙醇固定液，在搖床上固定810 min,棄去反應液；3. 加入500ml 1%hno3氧化，在搖床上輕搖810 min,棄去反應液，用雙蒸 水漂洗2次；4. 倒入500ml 0.2%agn03銀染液，染色1530 min,棄去反應液，用雙蒸水 漂洗2次；5. 加入500ml3%na2c03顯色液，于-搖顯色至出現(xiàn)清晰的銀染帶，迅速棄去反應液；6. 用500ml 3%hac停止顯色；7. 將已經(jīng)染好的聚丙烯酰胺凝膠置于透射白光板上，觀察酶切反應結果、記錄 并拍照

31、。1.2. 5統(tǒng)計分析基因頻率與基因型頻率使用軟件spss 10. 0進行統(tǒng)計分析，不同基因型對產(chǎn) 羔數(shù)的最小二乘均值分析使用sas (8. 0版)glm (general linear model)軟件 包進行，模型如下：丫誹1 二卩 +gi+pi+eijky麗為產(chǎn)羔數(shù)，卩為群體均值，&為基因型效應，p：為胎次效應，e,為隨機 效應。基因效應分析：加性效應二(gg-aa) /2顯性效應二ag- (aa+gg) /22結果與分析2.1 pcr擴增結果擴增波爾山羊和馬頭山羊基因組，產(chǎn)物用2.0%瓊脂糖凝膠電泳檢測，得到 的片段與預期片斷大小一致(197bp),條帶清晰(圖1),特異性高，

32、滿足后續(xù) 分析要求。6200b p100bp600bp500bp400bp300b pm 12345圖1 pcr擴增結果注：m, marher i loobp dna ladder； 1、2、3 為波爾山羊 dna 擴增產(chǎn)物；4、5、6為馬頭山羊dna擴增產(chǎn)物fig. 1 agarose gel electrophoresis of pcr productm, 1-3, 4-6: loobp dna ladder, pcr product of ?goat, pcr product of ?goat2. 2酶切結果利用限制性內(nèi)切iw hini i對pcr擴增產(chǎn)物進行酶切，使用8%的聚丙烯酰胺

33、凝膠(29： 1)電泳檢測酶切產(chǎn)物。在197 bp的擴增片段在118bp處存在另一 力?f i酶切位點，酶切后產(chǎn)生118 bp和79bp片段，其中波爾山羊在118處的酶切位點存在多態(tài)性，酶切位點的存 在與缺失產(chǎn)生2種基因型，分別命名為aa和gg:aa ( 118bp/118bp )、gg(118bp /79bp ),酶切圖譜見圖2 ；而馬頭山羊在118處的酶切位點則無多 態(tài)性，基因型均為aa型。酶切圖譜見圖3。1 2 34 5 67 8 9 10 11 m118bp90bp79bp67bp147bp123bp110bp圖2波爾山羊酶切圖譜注：m, pbr322/msp 1 marher； 11

34、3為酶切產(chǎn)物條帶fig.2 genotypes of the m tnr1a fragment defined by pcr-rflp123456 m118bp160bp147bp123bp110bp90bp圖3馬頭山羊酶切圖譜注：m, pbr322/msp 1 marherl8為酶切產(chǎn)物條帶fig.3 genotypes of the m tnr1a fragment defined by pcr-rflp2.3褪黑激素基因頻率和基因型頻率分析結果分析兩種山羊品種的褪黑激素基因型頻率發(fā)現(xiàn)，在該酶切位點，馬頭山羊只 岀現(xiàn)aa基因型，波爾山羊雖然出現(xiàn)兩種基因型，但aa型頻率高于gg型。在所 檢測

35、的兩個群體中，a等位基因是優(yōu)勢等位基因。表6山羊mtnrlk基因hint i酶切基因型和基因頻率分布表table 6 genotype and allele frequencies of hint i -rflp for the goat m tnra gene品種breed數(shù)量n基因型genetypegenetype frequency等位基因頻率allele frequency波爾山羊65aagg0. 5540.446a 0.554g 0.446基因型頻率馬頭山羊 51aa1a 12.4 mtnr1a基因型與波爾山羊頭胎產(chǎn)羔數(shù)性狀的關聯(lián)分析由表7可知，波爾山羊的aa基因純合型頭胎平均產(chǎn)羔數(shù)

36、比gg基因雜合型多0.07只，加性效應值為0.035,顯性效應值為-1.42。研究表明：波爾山羊的a 等位基因可能與山羊頭胎產(chǎn)羔數(shù)呈正相關，該位點主要以加性方式起作用。表7波爾山羊mtnrk基因型對頭胎產(chǎn)羔數(shù)性狀的最小二乘均值及基因效應分析table 7 least squares means and allele substitution effects for litter size at first kidding in boar goat品種breed數(shù)量n基因型genetype最小二乘均值土標準誤加性效應additiveeffec顯性效應dominanteffectsleas tme

37、ans土 standardsquareserroraa1.4545 ±0.5222波爾山羊65gg1. 3846 ±0.50640. 035-1.422. 5 mtnrk基因型與經(jīng)產(chǎn)產(chǎn)羔數(shù)性狀的關聯(lián)分析由表8可知，波爾山羊的aa型經(jīng)產(chǎn)羔數(shù)比gg型多0.09只；加性效應值為 0. 046,顯性效應值為-1.84。結果表明：a等位基因可能與波爾山羊產(chǎn)羔數(shù)呈正 和關，該位點主要以加性方式起作用。表8波爾山羊mtnr a基因型對經(jīng)產(chǎn)產(chǎn)羔數(shù)性狀的最小二乘均值及基因效應分析table 8 least squares means and allele substitution effec

38、ts for litter size in multiparous boar goat基因型genetype最小二乘均值土標準誤least squares means±standarderror加性效應additiveeffects顯性效應dominanteffectsaagg1.8827±0. 58711.7905 ±0.59880. 046-1.843討論3. 1不同山羊品種基因型頻率及基因頻率差異利用熒光原位雜交方法和遺傳連鎖分析方法，褪黑激素受體1a已經(jīng)在綿羊 等多種動物屮得到精細定位。并有多個研究結果表明，褪黑激素受體1a基因與 綿羊的繁殖性狀有著緊密的

39、關聯(lián)。在本研究所檢測的兩個山羊群體中，基因型頻 率及基因頻率存在較大差異。木研究結果顯示：馬頭山羊是aa基因型純合群體, 而波爾山羊屮存在aa和gg兩種基因型。這可能與兩個品種的育成史有關。馬頭 山羊是湖北省木地品種，長期閉鎖選育，湖北馬頭山羊具有個體大、生長快、繁 殖率高等特點，其全年均可發(fā)情，母羊一年產(chǎn)2胎，年產(chǎn)羔率428%,平均窩產(chǎn) 羔數(shù)2. 14頭，馬頭山羊繁殖力遠遠高于全國其它地方良種山羊品種(楊利國， 2004)。波爾山羊是引入品種，平均窩產(chǎn)羔數(shù)為193頭，低于馬頭山羊。這也與 木研究結果符合，木研究結果顯示aa基因型頭胎和經(jīng)產(chǎn)羔數(shù)均大于gg型 而馬 頭山羊群體均為m基因型。3.

40、2 mtnrk不同基因型對波爾山羊產(chǎn)羔數(shù)的影響木研究結果顯示：在山羊樣本中，無論是頭胎還是經(jīng)產(chǎn)山羊，褪黑激素受體 1a不同的基因型對性狀的影響表現(xiàn)都為aa>gg,由于受到樣本含量限制，該差 異并未達到顯著水平，但是該結果初步揭示褪黑激素受體1a基因可能與山羊繁 殖性狀相關，而該基因是否能夠作為分子標記應用于山羊繁殖性狀標記輔助選 擇，則需進一步擴大樣本含量，增加品種個數(shù)進行驗證。參考文獻1滑國華.山羊繁殖性狀五個候選基因多態(tài)性及其與產(chǎn)羔數(shù)性狀關聯(lián)分 析.碩士學位論文武漢：華中農(nóng)業(yè)大學圖書館，20062吳偉生抑制素基因作為山羊多胎性侯選基因的研究.碩士學位論文武 漢：華中農(nóng)業(yè)大學圖書館，2

41、0063周文然，儲明星，孫少華等.小尾寒羊高繁殖力候選基因inha的研究.農(nóng) 業(yè)生物技術學報,2007, 15(1)： 32-364陳桂芳，李齊發(fā)，強巴央宗等.四藏耗牛和黑白花奶牛生長激素基因alu 1多態(tài)性的比較研究.畜牧與獸醫(yī)，2002, 35： 115儲明星，程篤學，劉文忠褪黑激素受體1a基因外顯子2與小尾寒羊高繁 殖力的關聯(lián).安徽農(nóng)業(yè)大學學報，2008, 35 (1) : 1246王林楓光照和埋植褪黑激素對內(nèi)蒙古白絨山羊含氮物質分配和產(chǎn)絨性能 的影響及調(diào)控的研究.碩士學位論文.內(nèi)蒙古：內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學圖書 館，20047閆守慶，王慧芳，祝萬菊.藍狐與銀狐褪黑激索受體1a基因的克隆及序列 分析.中國畜牧獸醫(yī)，2008, 35： 38季從亮，儲明星，陳國宏.4個綿羊品種褪黑激素受體la基因第二外顯 子pcrrflp分析.華中農(nóng)業(yè)大學學報,2003, 4 (22) : 29 郭