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文檔簡介

1、金屬離子對酶活性的影響實驗目的： 1、了解金屬離子對酶活性的影響；2、掌握不同金屬離子對酶活性作用結果的測量方 法 實驗原 理：酸性磷酸酯酶廣泛分布于動物和植物中，植物的種子、 霉菌、肝臟和 人體的前列腺中。它對生物體核苷酸、磷蛋白 和磷脂的代謝，骨的生成和 磷酸的利用，都起著重要作用。 磷酸酶是一種能夠將對應底物去磷酸化的 酶，通過水解磷酸 單酯將底物分子上的磷酸基團除去，并生成磷酸根離子 和自 由的羥基。磷酸酶的作用與激酶的作用正相反，激酶是磷酸 化酶，可 以利用能量分子，如 ATP ，將磷酸基團加到對應底 物分子上。本實驗選用綠豆芽作材料，從中提取酸性磷酸酯酶。以 人工合成的對 硝基苯磷

2、酸酯（ NPP ）作底物，水解產生對硝 基苯酚和磷酸。在堿性溶液中，對硝基酚鹽離子在 405nm 處 光吸收強烈，而底物沒有這種特性。凡是能提高酶活性的物 質統稱為酶的 激活劑。無機離子和一些金屬離子對酶有激活 作用，可以作為酶的激活 劑。其中鉀離子是酸性磷酸酯酶的 一種激活劑，它在酶與底物之間起了橋 梁作用，形成了酶一 金屬離子一底物三元復合物，從而更有利于底物與酶 的活性 中心部位的結合。而氯離子和鈉離子對酸性磷酸酯酶的活性沒有什么影響 ?一些重金屬離子如銅離子，對酶活性具有抑制作用 實驗用品：1 、 儀器：恒溫水浴箱、試管架、試管、分光光度計、比色皿、吸頭、滴管、移液槍、移液管2、 試劑

3、 :1.2mmol/L NPP 100ml 、 0.3mol/L NaOH250ml 、酸性磷酸酯酶、 pH5.0 的檸檬酸緩沖液1000ml2mmol/L FeSO 42mmol/LCuSO4MnCl 22mmol/L 、MgSO 42mmol/L 、 KCl 2mmol/L EDTA實驗步驟 :FeSO CuSO MnCl MgSO 空白調零EDTA KCl 對照NPP(ml)酶液(ml)金屬離NaOH(mI)33333333注：反應均在37度水浴箱中進行，0號管先加入I.OmINPP后保溫15分鐘，然后加入 NaOH 3ml ,混勻后再加 酶液1ml，在波長405nm處觀察OD值，以0號

4、管調零CIO0nosno系列15SzouW3實驗結果FeSOCuSO MnCIMgSO空白調零4424對照EDTA KCl試管號c345-70 126OD0.680.301.260.350.340.340.28(abs)049271 24由實驗數據得到的圖標如下:不同的金屬離了實驗作業： 以各金屬離子為橫坐標， A405 縱坐標，繪制不同金屬離子與 酶活力曲 線，觀察金屬離子與酶活力的關系，分析哪些是酶 活性激活劑，哪些是 酶活性抑制劑。結果分析：通過實驗組與對照組的 0D 值對比可知，保證在 適宜的溫度、 pH 等外界條件下，再加入 1ml 2mmol/L 濃度 的各種金屬 離子溶液，對酸性磷酸酯酶的活力均有激活作用。 它們對酸性磷酸酯酶激活作用的強度由

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