1、嚴格控制氨基酸葡萄糖注射液中5-HMF及加合物氨基酸類藥物一般可做成水針、粉針以及氯化鈉 / 葡萄糖大輸液等制劑。其 葡萄糖大輸液制劑由于使用等滲調節劑葡萄糖， 在加熱或長期放置過程中能形成 5-羥甲基糖醛（5-HMF和5-羥甲基糠醛聚合物，5-HMF也可進一步與氨基酸形 成加合物；另外氨基酸類藥物還可以和葡萄糖發生 Maillard 反應，形成一系列 復雜的加合物；而5-HMF及各種加合物皆有一定的毒性，因而氨基酸類藥物制成 葡萄糖注射液時應嚴格控制溶液中的 5-HMF及各種加合物等雜質的量，以確保臨 床用藥的安全性。選擇適宜的檢測方法由于在生產放置過程中， 加合物皆可能有所增加， 出于安全

2、性的考慮， 氨基 酸葡萄糖注射液的質量研究和質量標準中應增加多項檢查， 通過終點控制使該類 注射液中加合物的量控制在一定范圍內以保證臨床用藥的安全性。對于如何測定加合物， 目前尚無統一的檢測和質量控制的方法， 可以通過顏 色檢查法和HPLC等方法對其進行檢測。顏色檢查法較為粗略 多數氨基酸（色氨酸、苯丙氨酸等少數氨基酸除外） 由于結構中含有的發色 團較少，因而紫外吸收皆較弱；葡萄糖為多羥基醛結構，紫外吸收也較小。而葡 萄糖產生的雜質5-HMF5-HMF的聚合物、5-HMF與氨基酸形成的加合物、Maillard 反應產物分子中皆有較大的共軛結構，在遠紫外區（ 400納米附近）皆有一定的 紫外吸收

3、， 因而可以通過控制溶液的顏色來初步控制加合物的總量。 目前， 常用 的顏色檢查有比色法和測定吸光度法。比色法適用于在可見光區有一定吸收 （即肉眼可見有一定的顏色） 的注射液 的顏色檢查。 由于氨基酸類藥物的葡萄糖注射液一般可見一定的顏色， 因而可采 用比色法通過控制注射液的顏色來初步控制加合物的量， 質量標準中一般應包括 溶液顏色的檢查，限度一般定為不超過黃色 1號或 2號標準比色液。測定吸光度的方法適用于在可見光區無吸收 （肉眼看不到顏色） 但在紫外區 有吸收的注射液的顏色檢查。5-HMF在可見光區無吸收，但在 284納米有吸收， 因而中國藥典通常采用吸光度檢查法在 284 納米測吸光度來

4、控制葡萄糖大輸液 中5-HMF的量。部分Maillard反應產物也僅有紫外吸收，而在可見光區無吸收， 故采用吸光度檢查法在紫外區測定吸光度也可粗略控制溶液中加合物的量。值得注意的是， 控制溶液的顏色雖是控制加合物等雜質的重要的、 有效的手 段，但其對雜質的控制力度是有限的。由于 5-HMF及部分加合物只有紫外吸收， 在可見光區無吸收，因而溶液的顏色與溶液中的 5-HMF/加合物的量并沒有很好 的相關關系。如，葡萄糖大輸液的顏色可能已超過標準規定，但溶液中 5-HMF 的量，即在 284 納米處的吸光度可能仍符合標準規定。 另外，由于不同加合物在 紫外區的吸收波長可能不一致，因而測定吸收度的方法

5、也有一定的局限性。在實際的氨基酸葡萄糖注射液的質量研究及質量標準中， 通常在檢查溶液顏 色（比色法）的同時，在 284納米或其他波長處（如 440 納米）測定溶液的吸光 度，二者相結合能好地控制產品的質量。 HPLC法更精確檢測溶液的顏色對雜質的控制是粗略的， 且無法控制溶液中的單加合物的量。 高效的相色譜（HPLC法是一種控制5-HMF及各種加合物更為精確的方法，。5-HMF及各種加合物皆有較好的紫外/可見吸收，采用普通的紫外/可見檢測 器即可對這些雜質進行檢測； 而氨基酸和葡萄糖的紫外吸收皆較弱， 在測定波長 一般對這些雜質的測定不會產生干擾，因而可采用普通HPLC-UV/VIS法來定量控

6、 制5-HMF及各種加合物的量。中國藥典XXXX年版葛根素葡萄糖注射液即采用普 通HPLC法，用外標法在284納米處測定來定量控制5-HMF的量。根據同樣的原 理，該方法也可以用來定量控制氨基酸葡萄糖注射液中的5-HMF 5-HMF的聚合物、 Maillard 反應產物。由于加合物的種類較為復雜， 因而在進行檢查時應進行較為詳細的方法學試 驗研究：可以先采用劇烈的條件 （如提高溶液中氨基酸和葡萄糖的濃度、 長時間 加熱等）加速各種加合物生成， 然后對含有較大量加合物的溶液進行線性、 分離 度、檢測限方法學研究和方法學驗證以確定方法的可行性。采用該方法色譜條件的確定一般依據實驗結果， 如波長的選

7、擇。 由于不同的 氨基酸可以與葡萄糖形成不同的加合物， 而且加合物可能有多種， 而不同的加合 物有不同的紫外吸收， 應根據試驗測定的結果來確定波長， 必要采用二極管陣列 檢測器來確定合適的波長。實際的檢測中，較常使用的檢測波長一般在 260400 納米左右。由于氨基酸等主藥在該色譜條件下沒有吸收峰， 因而不能采用主成分自身對 照法，而需要選用一個合適的參比物進行折算。由于葡萄糖大輸液中會產生 5-HMF，其吸收波長在280納米左右，較為合適，因而可選用5-HMF作為參比物。 注射液中5-HMF量的計算可采用外標法；其他加合物量的計算，由于加合反應歷 程較為復雜， 且不同的氨基酸生成的加合物的種

8、類和量也不盡相同， 無法一一精 確定量，可以與5-HMF相比，以5-HMF為參比物進行折算。關于氨基酸葡萄糖注射液中加合物的限度， 目前尚未統一， 可參考中國藥典 中葡萄糖大輸液中對5-HMF所定的限度：1%葡萄糖注射液在284納米處吸光度不 得超過0.32。該吸光度限度與溶液中5-HMF的量有一定的相關關系，目前較為 公認的折算關系為：中國藥典中“ 1%葡萄糖注射液在 284 納米處吸光度不得過 0.32 ”的限度，約相當于1%葡萄糖注射液中5-HMF的量在23微克/毫升左右， 或相當于5%葡萄糖注射液中5-HMF的量在1015微克/毫升左右。參考該限度以及中國藥典 XXXX年版葛根素葡萄糖

9、注射液中5-HM F的限度， 氨基酸葡萄糖注射液中5-HMF和加合物的限度可定為：以5-HMF作為外標物，氨 基酸葡萄糖注射液（葡萄糖濃度為5%中5-HMF的量一般不得過10微克/毫升， 其他加合物的量以5-HMF計，雜質總量（包含5-HMF 一般不應超過2030微克 / 毫升（不同的氨基酸限度可能會略有差別） 。四項措施減少5-HMF和加合物控制溶液 pH 值實驗研究表明，堿性條件和強酸性條件皆可加速5-HMF的形成及Maillard反應的進行，因此控制溶液的pH值非常重要。一般情況下，溶液的pH值應該控 制在3.55.0之間。但是，由于不同的氨基酸葡萄糖注射液的的pH值可能不盡相同，因而應

10、進行具體的實驗，并根據實驗結果來確定的pH值范圍。控制滅菌后溫度高溫條件可加速5-HMF及各種Maillard反應產物的產生，但葡萄糖大輸液 必須進行高溫滅菌以保證產品的安全性， 所以必須選用合適的工藝條件進行滅菌、。大輸液常規的滅菌條件一般采用121C滅菌15分鐘以上或115C滅菌30分 鐘以上的工藝條件。 在實際生產中， 某些單位以高溫條件下可加劇加合物的產生 為由而采用100C或105C滅菌，這樣的條件不能保證滅菌的徹底性。解決此矛盾的方法為： 熱壓滅菌后應采取適當的冷卻和通風措施， 盡快使溶 液散熱降溫。如采用滅菌后迅速通風，同時采用內噴淋降溫法使溫度迅速降至 60C以下。此法可大大降低注射液中 5-HMF和Maillard 反應產物的量。加入反應抑制劑在該類注射液的處方中加入適量的 Maillard 反應抑制劑也不失為一個有效 的方法。目前，常用的 Maillard 抑制劑為亞硫酸鹽，亞硫酸鹽可以與葡萄糖的 羰基發生可逆性的加成反應，阻止 Maillard 反應的進一步發生。此外，亞硫酸 鹽還能產生還原作用， 阻止和減緩某些中間反應的發生。 亞硫酸鈉和亞硫酸氫鈉 等是目前較常用的 Maillard 反應抑制劑。降低成品的貯藏溫度