1、丙型肝炎病毒檢測最近探究進展【摘要】隨著分子生物學檢測技術(shù)的應(yīng)用，hcv的實驗室診 斷也取得了長足的發(fā)展。hcv抗體檢測操作簡便,耗時少，但 對處于窗口期的標本容易漏檢，且不能判別是活動性感染還 是感染已被清除。hcv rna檢測有較高的敏感度和特異度， 但成本高，不易普及，限制了其在實驗室的廣泛應(yīng)用，本文研 究發(fā)現(xiàn)hcv抗體檢測應(yīng)作為篩選試劑，而確證還需進行rna 檢測。【關(guān)鍵詞】丙型肝炎病毒抗體檢測hcv rna檢測 中國圖分類號:r512. 63文獻標識碼：a文章編 號:1005-0515 (2010)08-068-02a new study of detection of hepati

2、tis c viruswu jianxiong(clinical laboratory of xinjiao people， s hospital of haizhu area guangzhou city,guangzhou,510300,china)abstract】 with the application of molecular biology detection technology, hcv laboratory diagnosis has made great progress hcv antibody test is easy to operation, but easy t

3、o leak specimen is active infection or discrimination has been cleared infection. hcv rna has higher detection sensitivity and specificity, but the cost is high, is not easy to popularize and limits its wide application in laboratory, this paper studies found hcv antibody test shall be con elusive a

4、nd screening reage nt, as is n eeded rna detection.【key words hepatitis c virusdetection of antibodydetection of hcv rna丙型肝炎病毒(hepatitis c virus, hcv)是直徑為30 60mm的球形顆粒(在肝細胞中為3640nm,在血液中為36 62nm)，為單股正鏈rna病毒，在核衣殼外包繞含脂質(zhì)的囊膜, 囊膜上有剌突。1989年michael houghton等利用分子生物 學方法，找到了該病毒的基因序列，并將其命為丙型肝炎病 毒。丙型肝炎是由丙型肝炎病毒(hc

5、v)感染引起的一種重要 的世界性傳染病11.hcv是嗜肝病毒，主要在肝內(nèi)復制，檢測 肝組織hcv rna含量更能準確反映hcv在人體內(nèi)的復制程 度,但是有文獻報道hcv感染不但侵襲肝臟組織，而且侵襲 體內(nèi)各種肝外組織和器官，還能并發(fā)各種與丙肝病原學無關(guān) 的疾病。各國hcv感染率為0. 110%,平均為3%,約有1. 7 2億人感染2。全國血清流行病學調(diào)查資料顯示，我國一般 人群丙肝抗體(hcv-ab)陽性率約為3.2%,約3800萬人感染 hcv1,hcv引起的肝炎約80%發(fā)展為慢性肝炎，其中25%發(fā)展 為肝硬化，在肝硬化患者中，每年約1%4%可發(fā)展為肝癌3, 嚴重威脅著人類的健康。丙型肝炎主

6、要經(jīng)輸血或血制品傳播，目前主要是通過靜 脈內(nèi)濫用毒品、針刺（如穿耳洞和紋身等）及醫(yī)源性傳播（包 括不安全介入性醫(yī)療操作、拔牙、針灸、注射等）,hcv的感 染多為亞臨床型感染，患者無明顯的臨床癥狀，往往很容 易被忽略。因此如何選擇一種快速、準確的檢出方法，對基 層醫(yī)院開展工作具有重要的意義。本文對hcv檢測的方法及 最新研究進展做一綜述：1hcv抗體檢測1. 1膠體金法檢測hcv抗體胡曉靜等4研究發(fā)現(xiàn)與elisa法對比實驗中，陽性符合 率較高。膠體金法每人份試劑均獨立包裝，且均帶有質(zhì)控帶， 可成批檢測，操作簡單、快速5,不需要任何儀器設(shè)備，可作 為篩查健康人員hcv抗體的重要手段，比較適合基層單

7、位應(yīng) 用，對丙型肝炎的早期發(fā)現(xiàn)、預防及控制有重要的價值和意 義。1. 2酶聯(lián)免疫法檢測hcv抗體（elisa法）elisa法測定hcv抗體主要經(jīng)歷了三個階段：第一代抗 -hcv酶聯(lián)免疫法采用的c100-3是hcv非結(jié)構(gòu)區(qū)（ns3、ns4） 和人超氧化物歧化酶（s0d）基因嵌合后表達的融合蛋白，該 蛋白在重組的細菌和酵母菌中表達多肽c100-3,應(yīng)用該多肽 作為抗原建立了第一代抗-hcv檢測系統(tǒng)。但是c100-3抗原- 抗體系統(tǒng)只代表整個hcv抗原抗體的一部分,所以特異性不 太高，易出現(xiàn)假陽性，抗-c-100出現(xiàn)較晚，約半數(shù)輸血后丙型 肝炎病人于輸血后46個月抗-c-100首次陽轉(zhuǎn)，因此，不宜

8、作為急性丙型肝炎的常規(guī)實驗室診斷。抗-c-100不是中和抗 體，也不是lgm抗體，而是igg抗體;靈敏不高,少數(shù)丙型肝炎 病人檢測不到抗-c-100o第二代elisa法，由于hcv核心抗體出現(xiàn)較早，因此采用 hcvc區(qū)編碼蛋白c22-3和非結(jié)構(gòu)區(qū)ns3編碼蛋白c33-3和 c100-3包被載體。改進方法后檢出率可提高2530%。應(yīng)用 該試劑后,hcv患者血清轉(zhuǎn)換的窗口期從第一代試劑的16周 縮短到10周，輸血后獲得性丙肝感染率下降了 8893%6 o第三代elisa法在第二代的基礎(chǔ)上增加了 ns5區(qū)蛋白作 為包被抗原，包被抗原為核心抗原c、ns3、ns4、ns5,可檢出 單獨ns5抗體陽性者，

9、使敏感性大大提高7。1. 3重組免疫印跡試驗(riba)檢測hcv抗體抗-hcv riba法是ebeleing等1990年底建立的，具體方 法是將抗原點在硝酸纖維素膜上抗原發(fā)生反應(yīng)，顯色后判斷 結(jié)果oriba法是運用c100-35-1-1兩種抗原，和兩種抗原均起反應(yīng)者為陽性，一項起反應(yīng)為可疑，兩種均不起反應(yīng)者 為陰性。此法檢測抗-hcv的特異性明顯高于c100-3eia,尤 其對低危人群的檢測更為特異，但靈敏度較低，操作復雜，只 能作為試驗用。1. 4化學發(fā)光免疫法由于采用標記化學發(fā)光物質(zhì)，具有快速、敏感性高、特 異性強、簡便等優(yōu)點，通過一定能量的激發(fā)是化學物質(zhì)發(fā)出 光能，并用特殊設(shè)備進行檢測

10、。2hcv rna的檢測hcv抗體檢測操作雖然簡便易行，但檢測局限，易將窗口 期標本漏檢，而核酸檢測(nat)包括hcv rna定性、定量檢測 的應(yīng)用大大縮短了 hcv感染診斷的窗口期，也使抗病毒治療 的監(jiān)測成為可能，所以hcv抗體檢測和hcv rna定量聯(lián)合檢 測，不但提高了 hcv的實驗室診斷水平，也為臨床提供及時、 可靠的診斷依據(jù)。姚海云8等研究發(fā)現(xiàn)熒光定量pcr不僅可以在抗-hcv 陽轉(zhuǎn)前及時發(fā)現(xiàn)早期感染者，而且能夠明確抗-hcv陽性的感 染者體內(nèi)hcv的復制水平，以便確定是否需要進行抗病毒治 療，或預測及評價抗病毒治療的效果，具有重要的實用價值 及臨床意義。3hcv抗體檢測和hcv

11、rna檢測的比較3. 1檢測窗口期的對比由于病毒感染后存在血清轉(zhuǎn)換窗口期，血循環(huán)中丙肝抗 體可因含量低于特定測量方法的下限，表現(xiàn)為抗hcv陰性；感 染hcv的免疫力低下患者及血液透析者血清中抗體水平很低, 甚至不產(chǎn)生抗體；因而從理論上講常規(guī)血清學檢查可能存在 一定的漏檢率；相比rna檢測，從hcv感染到抗體出現(xiàn)的“窗 口期”較長，雖然第三代抗體檢測窗口期已縮短為78周， 但仍不能完全滿足臨床早期診斷的要求；而hcvrna在感染1 周內(nèi)即可從血中被檢測到，比抗體出現(xiàn)早數(shù)周時間，直觀地 反映了病毒的存在,尤其在移植、hiv感染及血液透析人群中 rna檢測常作為hcv感染的主要確診手段。故hcv r

12、na檢測 可提高檢出率，盡可能避免漏檢率，起到早期診斷的目的。3. 2檢測的標準化對比hcv抗體檢測已有成熟的標準品，可進行有效的質(zhì)控，而 hcv rna檢測是臨床實驗室不易實現(xiàn)標準化的項目，其影響因 素較多，從實驗室來說，標本保存不當，核酸提取不當?shù)瓤稍?成假陰性結(jié)果的出現(xiàn)，而擴增產(chǎn)物的污染和核酸提取中標本 間的交叉污染又容易出現(xiàn)假陽性結(jié)果。從試劑盒上，試劑廠 家標準來源不統(tǒng)一，使得檢測結(jié)果缺乏可比性。標準物質(zhì)的 研發(fā)和應(yīng)用有助于控制rna提取和逆轉(zhuǎn)錄兩個環(huán)節(jié)的質(zhì)量， 消除不同試劑和不同人員操作間的差異，有助于實現(xiàn)量值溯 源，使不同實驗室、不同試劑的檢測結(jié)果具有可比性,是實現(xiàn) hcv rna

13、檢測標準化的核心9。4討論hcv rna檢測儀器昂貴，對操作要求高，檢測成本高，不易 普及，尚難滿足大批量體檢和快速篩查的要求。故對大批量 體檢，以膠體金法檢測hcv抗體為主，可作為篩查健康人員 hcv抗體的重要手段，比較適合基層單位應(yīng)用，而對門診和住 院病人醫(yī)院則可以根據(jù)實際情況選擇合適的方法檢測hcv抗 體并同時聯(lián)合hcv rna定量檢測，以避免漏檢，為臨床提供準 確而可靠的實驗室數(shù)據(jù)。參考文獻1 譚曉霞.丙型肝炎病毒核心抗原檢測的臨床應(yīng)用價 值j 檢驗醫(yī)學,2010,25(2)： 134-136.2 alberti a,benvegnu l. management of hepatiti

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