1、附件2：湖南省研究生科研創新項目申請書項目名稱：申請者：所在單位：所屬學科：聯系電話：傳真電話：電子信箱：申請日期：湖南省教育廳2009年制填報說明一、申請書齊項內容，要實事求是，逐條認真填寫。表達要明確、嚴謹。 外來語要同時用原文和中文表達。第一次出現的縮寫詞，須注出全稱。除簽名 外，項h申請書必須是打印件。二、巾請書一律用a4紙，于左側裝訂成冊。第二頁起各欄空格不夠時， 請白行加貝。如有查新報告及其它附件材料，請連同中請書一起裝訂成冊。三、“所屬學科”按博士、碩士學科專業忖錄（2006年修訂版）二級學科 名稱填寫。（封2,此頁不裝訂）、簡表項目 名稱三種分離培養豬小腸上皮細胞方法的比較研究

2、研究 類別基礎研究應用研究試驗發展研究 年限2012年至 2013年申請經費（萬元）項目 負責人姓名性別身份證號技術職稱學科專業及研 究方向指 導 教 師姓名性別學歷學位技術職稱學科專業及研 究方向目前指導 學生數博士：名，碩士：名聯系電話主 要 研 究 人 員姓名身份證號碼技術職務專業所在單位本人簽名項目負 責人主 要學習 和工作 經歷（從上 大學開始）二、立項依據（項廿的研究h的、意義；國內外研究現狀分析和發展趨勢；項忖應川前景和學術價值；現有研究基礎、條件、手段以及指導教師情況等）木項目主要研究不同消化方法對豬小腸上皮細胞的分離效果，以期找到最佳分離方法，建立一種效果 最優的豬腸上皮細胞

3、原代培養的系統，為豬腸道營養的研究提供體外模型，進一步為研究磷在豬小腸的吸 收機制提供細胞模型。上皮細胞體外培養技術已較為成熟，但主要應用于人類的醫藥開發利用，多側重臨床，病理及超微結 構等方面，利丿ij細胞系進行藥物刷選及腫瘤治療?，F已建立的一些腸上皮細胞系也多屬于癌細胞株，由于 腸道癌細胞的細胞基本結構，代謝和功能特性等與正常上皮細胞有一定差異，不能川其結果來說明正常細 胞的行為。從而研究正常細胞的分離和培養格外重要。目前，國內外學者已開始對人，鼠，豬，兔，羊，雞等腸上皮細胞進行分離培養研究，但研究的素材 和報道都較少。畜禽腸上皮細胞的體外培養研究還在起步期，有很人的發展空間。研究出成功培

4、養上皮細 胞的最佳方法，對為構建豬腸上皮細胞系奠定一定基礎。小腸作為動物營養吸收的主要部位，其粘膜上皮細胞是消化吸收的主要功能細胞，粘膜上皮還含有大 量的免疫細胞和免疫分子，參與免疫屏障和應激反應，也是體內更新最快的一類細胞。研究豬小腸上皮細 胞的分離培養技術，并維持其細胞的分化特性，在揭示細胞的全能性，細胞丿制期調控，癌變機制與細胞 衰老，營養素的影響，疫苗生產，疾病防治等方而都有重要作用，是研究小腸功能，營養物質吸收機制和 調控的主耍手段z。%1. 研究方案1. 研究目標、研究內容和擬解決的關鍵問題研究目標：方便高效地體外培養豬小腸粘膜上皮細胞并成功建系，為研究豬小腸上皮細胞相關的生物學功

5、能提 供理想的試驗模型。研究內容：（1）原材料的選擇（2）小腸上皮細胞的分離純化（3）細胞系的建立（4）生長曲線的繪制（5）iec的鑒定擬解決的關鍵問題：（1）找出分離消化腸上皮細胞時消化酶的最適濃度以及最佳消化時間；（2）找出體外培養仔豬小腸上皮細胞最好的消化分離方法；2. 擬采取的研究方法及可行性分析分離方法有三：（1）組織塊培養+檸檬酸胰酶純化；（2）膠原酶vi/中性蛋白酶i分離法；（3）機械分離+膠原酶i【消化相結合法。鑒定方法有三：（1）形態學觀察；（2）堿性磷酸嗨檢測；（3）免疫組織化學檢測。可行性分析:（1）實驗思路明確，實驗材料普遍，實驗方法易行，實驗設備齊全。（2）本項目的參

6、加人員具有堅實的科研理論基礎，很好地掌握了有關理論知識和實驗操作技能。（3）木項h的指導老師曾進行過細胸培養實輪，h冇大最的實戰經輪。3. 本項目的創新之處(1) 通過三種完全不同分離培養方法的比較研究，為建立穩定、理想的豬小腸上皮細胞系找到最優的 分離方法及作用條件。(2)4.預期研究進展2012.042012.05研究工作全面展開，査詢相關資料，制定具體的研究方案;2012.062012.11三種分離培養方法最優條件的探索；20122 2013.01用最好的方法建立豬小腸上皮細胞系，并進行穩定性測試;2013.022013.05數據整理、結果分析，撰寫論文。5.預期成果(1) 找出體外培養

7、豬小腸上皮細胞的最佳方法及其故優條件；(2) 建立一個穩定的豬小腸上皮粘膜細胞系，為下一步的磷營養研究提供理想的實驗模型;(3) 發表有價值的學術論文12篇。四、研究基礎與本項目有關的研究工作積累和己収得的研究工作成績及目詢承擔項目的情況（項目負責人和其 它成員情況分開填寫并冃項目、成果及獎勵等須注明承擔或完成人姓名等相關信息）%1. 經費預算支出科目金額 （萬元）計算根據及理山合計注：預算支出科u按下列順序填寫：1科研業務費2 實驗材料費3 儀器設備費4 和關經費。指 導 教 師 意 見（就項目研究1=1標、內容、創新性、研究方案的可行性、預計創新成果等寫出具體意見）簽名：年 nh指 導 教 師 承 諾我承諾：如果項目獲得資助，我將依照湖南省研究