1、微生物的類群原生生物：原核生物:真菌:病毒:如酵母菌單細(xì)胞的動植物如草履蟲、單細(xì)胞藻類等微生物包含了除植物界和動物界以外的所有生物無細(xì)胞結(jié)構(gòu)真核細(xì)胞細(xì)菌、藍(lán)藻原核細(xì)胞課題1 微生物的實驗室培養(yǎng)1.提供營養(yǎng)和條件2.防止污染一.培養(yǎng)基：微生物生存的環(huán)境和營養(yǎng)物質(zhì)1.基本成分：思考：微生物“吃”什么？碳源、氮源、水、無機鹽碳源無機碳源：無機碳源：有機碳源：有機碳源：coco2 2、coco3 32 2- -、hcohco3 3- -牛肉膏、蛋白胨等牛肉膏、蛋白胨等自養(yǎng)微生物自養(yǎng)微生物異養(yǎng)微生物異養(yǎng)微生物氮源無機氮源：無機氮源：有機氮源：有機氮源：nhnh4 4、nono3 3- -牛肉膏、蛋白胨、

2、酵母膏、尿素牛肉膏、蛋白胨、酵母膏、尿素等等注：含注：含chonchon的的有機物有機物為為異異養(yǎng)型微生物提供養(yǎng)型微生物提供碳源碳源、氮源氮源、能源能源概念：人們按照微生物對營養(yǎng)物質(zhì)的不同需求，配制出供其生長繁殖的營養(yǎng)基質(zhì)。一.培養(yǎng)基：微生物生存的環(huán)境和營養(yǎng)物質(zhì)1.基本成分：碳源、氮源、水、無機鹽2.特殊營養(yǎng)：維生素、堿基等（牛肉膏、酵母膏、蛋白胨中含有）3.ph、氧氣的需求：4.種類：固體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基有有無無 凝固劑瓊脂凝固劑瓊脂分離分離 鑒定鑒定工業(yè)工業(yè) 生產(chǎn)生產(chǎn)化學(xué)成分：化學(xué)成分：物理性質(zhì)：物理性質(zhì)：天然培養(yǎng)基天然培養(yǎng)基 合成培養(yǎng)基合成培養(yǎng)基標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基類型配制特點

3、主要應(yīng)用物理性質(zhì)固體培養(yǎng)基加入瓊脂較多微生物的分離、計數(shù)等半固體培養(yǎng)基加入瓊脂較少觀察微生物運動、鑒定菌種、保藏菌種等液體培養(yǎng)基不加入瓊脂工業(yè)生產(chǎn)，連續(xù)培養(yǎng)化學(xué)組成合成培養(yǎng)基由已知成分配制而成，培養(yǎng)基成分明確菌種分類、鑒定天然培養(yǎng)基由天然成分配制而成，培養(yǎng)基成分不明確工業(yè)生產(chǎn)目的用途鑒別培養(yǎng)基添加某種指示劑或化學(xué)藥品鑒別不同種類的微生物選擇培養(yǎng)基添加（或缺少）某種化學(xué)物質(zhì) 培養(yǎng)、分離出特定的微生物牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基 是一種應(yīng)用最廣泛和最普通的細(xì)菌基礎(chǔ)培養(yǎng)基。1000ml牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的配方h2o 定容至1000mlnacl 5g蛋白胨 10g牛肉膏 5g瓊脂20.0g分析營養(yǎng)構(gòu)成？5. 配

4、制原則目的明確：營養(yǎng)全面、濃度適宜、比例恰當(dāng)適宜的ph值：有機碳源異養(yǎng)型：根據(jù)微生物的種類、培養(yǎng)目的選擇原料自養(yǎng)型：不加碳源加入緩沖劑細(xì)菌偏堿，真菌偏酸（co2碳源）生產(chǎn) 科研巴氏消毒法耐高溫需保持干燥的 物品，160170 12小時接種環(huán)、接種針等 金屬用具7075、30min 80、15min100、56min消毒滅菌定義方法較為溫和理化方法殺死部分有害菌體（不包括芽孢、孢子強烈的理化方法，殺死所有微生物煮沸消毒法化學(xué)藥劑紫外線灼燒滅菌干熱滅菌酒精、氯氣、石炭酸等高壓蒸汽滅菌培養(yǎng)基，100kpa、121、1530min二.無菌技術(shù)： 防止外來雜菌的污染1.消毒與滅菌：請你判斷以下材料或用具

5、是否需要消毒或滅菌。如果需要，請選擇合適的方法。（1） 培養(yǎng)細(xì)菌用的培養(yǎng)基與培養(yǎng)皿（2） 玻棒、試管、燒瓶和吸管（3） 實驗操作者的雙手練習(xí):說出無菌技術(shù)及相應(yīng)的具體方法工作臺操作者的手、衣著培養(yǎng)基培養(yǎng)皿玻棒、試管接種環(huán)牛奶無菌水飲用水紗布涂布器2.無菌范圍： 實驗操作空間消毒操作者的手、衣著消毒實驗用具滅菌實驗操作過程二.無菌技術(shù)： 防止外來雜菌的污染1.消毒與滅菌：酒精燈旁操作超凈工作臺單個或少數(shù)菌體2.特征：大小、形狀、光澤度、顏色、透明度等。3.功能：1.定義：三.菌落鑒定菌種的重要依據(jù)固體培養(yǎng)基上大量繁殖子細(xì)胞群體1000ml牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的配方h2o 定容至1000mlnacl

6、 5g蛋白胨 10g牛肉膏 5g瓊脂20.0g四.大腸桿菌的純化培養(yǎng)：制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基1.計算： 培養(yǎng)基用量依配方計算各成分的用量2.稱量：3.溶化：牛肉膏黏稠，用稱量紙稱取牛肉膏、蛋白胨易吸潮，要快、加蓋牛肉膏、稱量紙 、少量水加熱溶解 取紙蛋白胨、nacl 瓊脂 補水定容4.調(diào)ph、分裝、封口：5.滅菌：6.倒平板：培養(yǎng)基、培養(yǎng)皿分散成單個細(xì)胞,形成單個菌落約約50防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染灼燒滅菌，灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基四.大腸桿菌的純化培養(yǎng)：制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基純化大腸桿菌：平板劃線法

7、：菌種劃3個平板1個不劃線1.接種：接種環(huán)防止劃破培養(yǎng)基（重復(fù)實驗）（空白對照）為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)？在劃線操作結(jié)束時，仍然需要灼燒接種環(huán)嗎？為什么？操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物殺死上次殘留的菌種，保證使下一次劃線時，菌種直接來源于上次劃線的末端，從而通過劃線次數(shù)的增加，使每次劃線時菌種的數(shù)目逐漸減少，以便得到菌落。及時殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者。6支試管，分別加入9ml無菌水1ml1011ml1021ml1031ml1041ml1051ml106稀釋涂布平板法：a.梯度稀釋菌液：菌液微量 移液器稀釋

8、涂布平板法：a.梯度稀釋菌液：b.涂布平板：不超過0.1ml各梯度分別涂布3個平板1個不涂布作空白對照滴灼試涂稀釋103倍稀釋104倍稀釋105倍平板劃線法：四.大腸桿菌的純化培養(yǎng)：制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基純化大腸桿菌：1.接種：稀釋涂布平板法：2.培養(yǎng)：將接種后的培養(yǎng)基和一個未接種的培養(yǎng)基放入37恒溫箱中培養(yǎng)12h24h后，觀察并記錄五.菌種的保藏：1.臨時保藏：試管固體斜面培養(yǎng)基上42.長期保存：菌種易被污染、變異甘油管藏1ml甘油1ml菌液20一.培養(yǎng)基：微生物生存的環(huán)境和營養(yǎng)物質(zhì)1.基本成分：碳源、氮源、水、無機鹽2.特殊營養(yǎng)：維生素、堿基等（牛肉膏、酵母膏、蛋白胨中含有）3.ph、氧氣的需求：4.種類：固體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基有有無無 凝固劑瓊脂凝固劑瓊脂分離分離 鑒定鑒定工業(yè)工業(yè) 生