1、甾體激素類藥物的分析甾體激素類藥物的分析基本結構：環戊烷駢多氫菲基本結構：環戊烷駢多氫菲c20c21abcd12345678910111213141516171819l環上雙鍵的表示方法：環上雙鍵的表示方法：l 用用“ ”表示表示 ,雙鍵的位置寫在雙鍵的位置寫在 的右上的右上角。角。 雙鍵位置雙鍵位置454 14251,4 565105 5(10) l環上取代基構型表示方法：環上取代基構型表示方法： 構型：構型：l與母核連接的取代基與母核連接的取代基, ,指向環平面的前指向環平面的前面時面時, ,為為 構型構型. .用實線表示用實線表示“” 構型：構型：l與母核連接的取代基與母核連接的取代基,

2、 ,指向環平面的背指向環平面的背面時面時, ,為為 構型構型. .用虛線表示用虛線表示“”按藥理作用分類：按藥理作用分類：甾體激素甾體激素腎上腺皮質激素腎上腺皮質激素性激素性激素雄性激素及蛋雄性激素及蛋白同化激素白同化激素孕激素孕激素雌激素雌激素ohoohoch2ohhhh腎上腺皮質激素腎上腺皮質激素氫化可的松氫化可的松ohoohohfhoch3ohch3醋酸地塞米松醋酸地塞米松1.均有均有21個碳原子個碳原子2. a環環4-3-酮基酮基, uv、與羰基試劑反應、與羰基試劑反應3.c17位上有位上有a-醇酮基醇酮基,具還原性具還原性一、結構與性質一、結構與性質雄性激素及蛋白同化激素雄性激素及蛋

3、白同化激素睪酮睪酮oohhhho苯丙酸諾龍苯丙酸諾龍1.雄性激素母核有雄性激素母核有19個碳原子個碳原子,蛋白同化激素蛋白同化激素 c10位上一般無角甲基位上一般無角甲基,母核有母核有18個碳原子個碳原子2. a環環4-3-酮基酮基3.c17位上有位上有-羥基羥基,或由它們形成的酯或由它們形成的酯oohoohmemethyltestosterone甲基睪酮hhh1717位加甲基作用更強位加甲基作用更強oohhhhoch3丙酸睪酮丙酸睪酮酯化吸收減慢，作用時間長。酯化吸收減慢，作用時間長。雄性激素及蛋白同化激素雄性激素及蛋白同化激素主要活性基團主要活性基團4 3 酮酮 c17 羥基羥基性性 質質

4、uv、與羰基、與羰基試劑反應試劑反應可成酯可成酯cohhhch3o孕激素孕激素黃體酮黃體酮1.母核有母核有21個碳原子個碳原子2. a環環4-3-酮基酮基3.c17位上有甲酮基位上有甲酮基ooohhho醋酸甲地孕酮醋酸甲地孕酮孕激素孕激素主要活性基團主要活性基團4 3 酮酮c17 甲酮基甲酮基性性 質質uv、與羰基試、與羰基試劑反應劑反應與亞硝基鐵氰與亞硝基鐵氰化鈉反應化鈉反應雌性激素雌性激素炔雌醇炔雌醇1.母核有母核有18個碳原子個碳原子,c10無角甲基無角甲基2. a環為苯環環為苯環, c3位上有酚羥基位上有酚羥基3.c17位上有位上有-羥基羥基o hho1718ohhocch雌二醇雌二醇

5、雌激素雌激素主要活性基團主要活性基團a環為環為3oh 苯環苯環c17 乙炔基乙炔基c17 羥基羥基性性 質質uv、與重氮苯、與重氮苯磺酸鹽反應磺酸鹽反應與與agno3反應反應可成酯可成酯l小結小結甾體激素甾體激素碳原子碳原子數數a環環17位取代基位取代基腎上腺皮質腎上腺皮質激素激素21 4-3-酮酮 -醇酮基醇酮基雄性激素雄性激素19 4-3-酮酮 -oh -ch3孕激素孕激素21 4-3-酮酮甲酮基甲酮基雌激素雌激素18苯環c3-酚oh -oh -cch二、鑒別試驗二、鑒別試驗（一）與強酸的呈色反應（一）與強酸的呈色反應甾體激素甾體激素類藥物類藥物呈色呈色h2so4 h3po4 hclo4

6、hcl 與硫酸呈色操作簡便，依與硫酸呈色操作簡便，依顏色與熒光可區別，反應靈敏，顏色與熒光可區別，反應靈敏，為各國藥典所用。為各國藥典所用。 如中國藥典：氫化可的松，如中國藥典：氫化可的松，取本品取本品2 mg2 mg，加硫酸，加硫酸2 ml2 ml溶解，溶解，放置放置5 5分鐘，顯棕黃至紅，并顯分鐘，顯棕黃至紅，并顯綠色熒光，將此溶液傾入綠色熒光，將此溶液傾入10ml10ml水中，即變黃色至紅色，同時水中，即變黃色至紅色，同時有少量絮狀沉淀生成。有少量絮狀沉淀生成。與硫酸顯色反應與硫酸顯色反應 顯顯 色色 熒光熒光 加水稀釋加水稀釋炔雌醇炔雌醇 橙紅橙紅 黃綠黃綠 絮狀絮狀玫紅玫紅醋酸可的松

7、醋酸可的松 黃或微黃或微 無無 褪色并澄褪色并澄 帶橙色帶橙色 清清(二二) 官能團的反應官能團的反應1 c17 醇酮基醇酮基還原性還原性a. 呈色反應呈色反應腎上腺皮質腎上腺皮質激素藥物激素藥物呈色呈色四氮唑鹽四氮唑鹽ohoh例如例如: :中國藥典中醋酸潑尼松中國藥典中醋酸潑尼松的鑒別方法：本品的鑒別方法：本品1 mg1 mg，加，加乙醇乙醇2ml2ml溶解，溶解，10 % 10 % 氫氧化氫氧化鈉試液鈉試液2 2滴。氯化三苯四氮唑滴。氯化三苯四氮唑試液試液1ml1ml，顯紅色。，顯紅色。腎上腎上腺皮腺皮質激質激素藥素藥物物cu2o橙紅色橙紅色堿性堿性酒石酸銅酒石酸銅b. b. 沉淀反應沉淀

8、反應ag黑色黑色氨制硝酸銀氨制硝酸銀多倫試劑多倫試劑斐林試劑斐林試劑甾酮類激甾酮類激素藥物素藥物呈色呈色羰基試劑羰基試劑2. c3酮基和酮基和c20酮基酮基常用的羰基試劑：常用的羰基試劑：2,4-2,4-二硝基苯肼、異煙肼、硫酸苯肼二硝基苯肼、異煙肼、硫酸苯肼oohnconhnh2hclconhnohn異煙腙（黃色）異煙腙（黃色）睪酮睪酮occh3o2nconhnh2hcl黃體酮黃體酮conhncch3nhnocnn異煙雙腙（黃色）異煙雙腙（黃色）具有甲酮基具有甲酮基或活潑亞甲或活潑亞甲基的甾體激基的甾體激素類藥物素類藥物呈色呈色亞硝基鐵氰化納亞硝基鐵氰化納間二硝基酚間二硝基酚芳香醛芳香醛3.

9、 甲酮基甲酮基黃體酮黃體酮藍紫色藍紫色亞硝基鐵氰化納亞硝基鐵氰化納其他甾體其他甾體淡橙色淡橙色不顯色不顯色亞硝基鐵氰化納亞硝基鐵氰化納亞硝基鐵氰化鈉是亞硝基鐵氰化鈉是黃體酮專屬而靈敏的反應黃體酮專屬而靈敏的反應coch3o黃體酮黃體酮 nocnfe ohh2o2+-4fe5cnnochcoo有機氟有機氟f有機破壞有機破壞有機氯有機氯cl4. 有機鹵素有機鹵素茜素氟藍茜素氟藍 硝酸亞鈰硝酸亞鈰硝酸硝酸硝酸銀硝酸銀agcl 藍紫色藍紫色 ooohohch2nch2coohch2cooh茜素氟藍茜素氟藍ooohoch2nch2coocech2coofohf- ce鈰鈰藥典規定地噻米松磷酸鈉用氧瓶藥典

10、規定地噻米松磷酸鈉用氧瓶燃燒法處理，使有機結合的氟轉燃燒法處理，使有機結合的氟轉變成無機的氟離子，在變成無機的氟離子，在 ph4.3ph4.3條條件下與茜素氟藍試液和硝酸亞鈰件下與茜素氟藍試液和硝酸亞鈰試液反應生成藍紫色的水溶性配試液反應生成藍紫色的水溶性配位化合物。位化合物。脂肪鏈上的氯可水解脫落脂肪鏈上的氯可水解脫落中國藥典中氯倍他索的鑒別方法：中國藥典中氯倍他索的鑒別方法：取本品少許，加乙醇取本品少許，加乙醇1 ml,1 ml,混合，混合，加熱，加硝酸加熱，加硝酸2 ml2 ml，搖勻，加硝，搖勻，加硝酸銀數滴，即顯白色沉淀。酸銀數滴，即顯白色沉淀。 氯在母核上（丙酸倍氯米松）氯在母核上

11、（丙酸倍氯米松）不易脫落，要用氧瓶燃燒法處理，不易脫落，要用氧瓶燃燒法處理，再按氯化物的鑒別試驗進行鑒別。再按氯化物的鑒別試驗進行鑒別。雌激素雌激素類藥物類藥物紅色偶紅色偶 氮染料氮染料重氮苯磺酸重氮苯磺酸5. 酚羥基酚羥基含炔基的含炔基的甾體激素甾體激素白色白色的銀鹽的銀鹽沉淀沉淀硝酸銀硝酸銀6. 炔基的沉淀反應炔基的沉淀反應rcchagno3rccag炔雌醇炔雌醇ohcchhoohccagho白白3agno鹽鹽酸酸氨氨基基脲脲苯苯丙丙酸酸諾諾龍龍約180.pm縮氨基脲衍生物縮氨基脲衍生物 ( (三三) ) 制備衍生物測定制備衍生物測定m.p.m.p.1.縮氨基脲的生成縮氨基脲的生成2.2.

12、酯的水解酯的水解丙酸睪酮丙酸睪酮醇制的氫氧化鉀醇制的氫氧化鉀游離睪酮游離睪酮熔點為熔點為1501563.肟的生成肟的生成羰基與羥胺生成肟，測熔點羰基與羥胺生成肟，測熔點如炔諾孕酮與鹽酸羥胺醋酸鈉反應如炔諾孕酮與鹽酸羥胺醋酸鈉反應生成炔諾孕酮肟，生成物的熔點為生成炔諾孕酮肟，生成物的熔點為：1954.酯的生成酯的生成酚羥基與苯甲酰氯生成酯，測熔點酚羥基與苯甲酰氯生成酯，測熔點l例如：炔雌醇與苯甲酰氯反應，生成物苯甲酸酯的熔點為：201 不少藥物是不少藥物是c c1717或或c c2121上羥上羥基的酯類。藥物中酯結構的鑒基的酯類。藥物中酯結構的鑒別，一般先行水解，產生相應別，一般先行水解，產生相

13、應的羧酸，再根據羧酸的性質來的羧酸，再根據羧酸的性質來鑒別。鑒別。（四）水解產物的反應（四）水解產物的反應 kohocochr醇制醇制 ocochchch sohohhc 戊戊酸酸戊戊酸酸雌雌二二醇醇醇醇制制naoh h己己酸酸己己酸酸羥羥孕孕酮酮醇醇制制 oh h-3-酮酮 約約240nm苯環苯環 約約280nmoccc cccccc （五）（五） uv法法規定最大吸收波長規定最大吸收波長最大吸收波長處的吸收度最大吸收波長處的吸收度某兩個吸收波長處吸收度的比值某兩個吸收波長處吸收度的比值ch 33003000cm-1hc 30002700cm-1oc 19001650cm-1cc 16501

14、450cm-11000650cm-1ch （六）（六） ir法法37503300cm-1oh （七）（七） tlc法法主要用于甾體激素類藥物制劑的鑒別主要用于甾體激素類藥物制劑的鑒別 方法：對照品法方法：對照品法 要求供試品溶液所顯主斑點的要求供試品溶液所顯主斑點的顏顏色和位置色和位置與對照品溶液的主斑點相同。與對照品溶液的主斑點相同。 （八）（八） hplc法法 主要用于甾體激素類藥物制劑主要用于甾體激素類藥物制劑的鑒別（如：醋酸氟輕松軟膏）的鑒別（如：醋酸氟輕松軟膏）方法：對照品法方法：對照品法 要求在含量測定項下記錄的色要求在含量測定項下記錄的色譜圖中，供試品峰的譜圖中，供試品峰的tr與

15、對照品峰與對照品峰的的tr一致。一致。三、三、 特殊雜質檢查特殊雜質檢查（一）其他甾體（一）其他甾體1. 定義定義 與標示藥物結構不同的甾體與標示藥物結構不同的甾體化合物都稱為化合物都稱為“其他甾體其他甾體”2. 來源來源 原料、中間體、異構體、降解產物原料、中間體、異構體、降解產物3. 特點特點 （1）可能存在多個甾體雜質）可能存在多個甾體雜質 （2）結構類似）結構類似4. 方法（具有一定分離能力）方法（具有一定分離能力） tlc法（高低濃度對比法）法（高低濃度對比法） 判定方法：判定方法：v 規定雜質斑點數目規定雜質斑點數目v 規定雜質斑點顏色規定雜質斑點顏色 取本品加氯仿取本品加氯仿-甲

16、醇（甲醇（9 ：1）制）制成成3.0mg/ml的溶液作為的溶液作為供試液供試液，精密，精密量取適量，加氯仿量取適量，加氯仿-甲醇（甲醇（9 ：1）稀）稀釋成釋成0.06mg/ml的溶液作為的溶液作為對照液對照液；照薄層色譜法，各取照薄層色譜法，各取5l，分別點于，分別點于同一硅膠同一硅膠g板上，以氯仿板上，以氯仿-甲醇（甲醇（97 : 3）為展開劑，展開后晾干，在）為展開劑，展開后晾干，在105干燥干燥10分鐘，放冷，分鐘，放冷，噴以堿性四氮唑噴以堿性四氮唑鹽試鹽試%.% 限量限量液，立即檢視，供試品溶液如顯雜液，立即檢視，供試品溶液如顯雜質斑點，不得多于質斑點，不得多于2個，其顏色與對個，其

17、顏色與對照液的主斑點比較，不得更深。照液的主斑點比較，不得更深。12（2）hplc法（主成分自身對照法）法（主成分自身對照法） 判定方法：判定方法：v 規定雜質峰數目規定雜質峰數目v 規定雜質峰面積規定雜質峰面積 取本品適量，精密稱定，以甲醇為取本品適量，精密稱定，以甲醇為溶劑，配制成每溶劑，配制成每1ml1ml含含1mg1mg的溶液（的溶液（1 1）與）與每每1ml1ml含含0.02mg0.02mg的溶液（的溶液（2 2），用含量測），用含量測定項下的方法和溶液，取定項下的方法和溶液，取5l5l注入液相注入液相色譜儀，調整儀器靈敏度，使主成分峰色譜儀，調整儀器靈敏度，使主成分峰高度達記錄儀的

18、滿量程。再分別取溶液高度達記錄儀的滿量程。再分別取溶液（1 1） 和溶液（和溶液（2 2）各）各10l10l，進樣。記錄至主，進樣。記錄至主成分峰保留時間的成分峰保留時間的1.51.5倍。倍。溶液（溶液（1 1）顯）顯示的雜質峰數不得超過示的雜質峰數不得超過1 1個，其面積不得個，其面積不得大于溶液（大于溶液（2 2）主峰面積的）主峰面積的3/43/4。供試溶液：溶液（供試溶液：溶液（1 1）1mg/ml1mg/ml對照溶液：溶液（對照溶液：溶液（2 2）0.02mg/ml0.02mg/ml( (二二) )硒硒來源來源 合成中用二氧化硒合成中用二氧化硒(seo(seo2 2) )脫氫脫氫nma

19、 環環己己烷烷苯苯并并苯苯硒硒二二唑唑二二氨氨基基萘萘 ,se, .ph sese鹽酸羥胺鹽酸羥胺氧瓶燃燒氧瓶燃燒原理原理劇毒劇毒（三）有機溶劑殘留量的檢查（三）有機溶劑殘留量的檢查甲醇甲醇 第二類溶劑第二類溶劑 0.3%gc法法丙酮丙酮 第三類溶劑第三類溶劑 0.5%0.5% 地塞米松磷酸鈉地塞米松磷酸鈉 檢查檢查 甲醇和丙酮甲醇和丙酮內標法內標法（四）游離磷酸鹽（四）游離磷酸鹽地塞米松磷酸鈉地塞米松磷酸鈉氫化可的松磷酸鈉氫化可的松磷酸鈉倍他米松磷酸鈉倍他米松磷酸鈉氫化潑尼松磷酸鈉氫化潑尼松磷酸鈉對照品法對照品法地塞米松磷酸鈉地塞米松磷酸鈉 精密稱取本品精密稱取本品20mg，置，置25ml量

20、瓶量瓶中，加水中，加水15ml溶解，精密加溶解，精密加鉬酸銨硫鉬酸銨硫酸試液酸試液2.5ml與與1-氨基氨基-2-萘酚萘酚-4-磺酸磺酸溶溶液液1ml，加水至刻度，搖勻，在，加水至刻度，搖勻，在20放放置置3050分鐘，照分光光度法，在分鐘，照分光光度法，在740nm處測定吸收度，與對照液處測定吸收度，與對照液4.0ml同法同法處理的吸收度比較，不得更大。處理的吸收度比較，不得更大。 pokhpoh%. 供試品中游離磷酸鹽按磷酸計算的限量：供試品中游離磷酸鹽按磷酸計算的限量：第四節第四節 、含量測定、含量測定l根據甾體激素藥物的官能團和整根據甾體激素藥物的官能團和整個分子的特征，可以采用比色法

21、、個分子的特征，可以采用比色法、紫外分光光度法、熒光法、氣相紫外分光光度法、熒光法、氣相色譜法和液相色譜法測定其含量色譜法和液相色譜法測定其含量甾體激素類藥物常含有結構相似甾體激素類藥物常含有結構相似的其他甾體雜質，對利用結構特的其他甾體雜質，對利用結構特征設計的比色法有干擾征設計的比色法有干擾（一）（一）hplchplc法法 uspusp、bpbp、jpjp均采用均采用 rprphplchplc（大多內標法）（大多內標法）特點特點 ：用樣量少，靈敏度高，分：用樣量少，靈敏度高，分離效果好，測定速度快。離效果好，測定速度快。二二 uvuv法法-3-3-酮酮 240nm240nm（）腎上腺皮質激

22、素腎上腺皮質激素雄性激素和蛋白同化激素雄性激素和蛋白同化激素孕激素孕激素 苯環苯環 280nm280nm（）雌激素雌激素三三 比色法比色法 （一）異煙肼比色法（一）異煙肼比色法1 1 原理原理 ：c c3 3酮基及某些其他位置酮基及某些其他位置上的酮基能在酸性條件下與羰基試上的酮基能在酸性條件下與羰基試劑異煙肼縮合，形成黃色的異煙棕，劑異煙肼縮合，形成黃色的異煙棕，在一定波長處具有最大吸收在一定波長處具有最大吸收hclhcl（縮合）（縮合）c3酮基酮基異煙肼異煙肼異煙棕（黃色）異煙棕（黃色）conhnohn異煙腙（黃色）異煙腙（黃色）2. 方法方法 對照品法對照品法 異異煙煙肼肼揮揮去去乙乙醇

23、醇對對照照液液供供試試液液a chcl暗暗45 醋酸地塞米松軟膏醋酸地塞米松軟膏 含量測定含量測定對照液：精密稱取醋酸地塞米松對照品對照液：精密稱取醋酸地塞米松對照品25mg25mg，置，置100ml100ml量瓶中，加量瓶中，加無水乙醇無水乙醇適適量使溶解并稀釋至刻度，搖勻。精密量量使溶解并稀釋至刻度，搖勻。精密量取取5ml5ml，用，用無水乙醇無水乙醇稀釋至稀釋至50ml50ml，搖勻。，搖勻。供試液：精密稱取本品適量（約相當于供試液：精密稱取本品適量（約相當于醋酸地塞米松醋酸地塞米松2.5mg2.5mg），置燒杯中，加），置燒杯中，加無無水乙醇水乙醇約約25ml25ml，置水浴中加熱，攪

24、拌，使，置水浴中加熱，攪拌，使醋酸地塞米松溶解，再置冰浴中冷卻，醋酸地塞米松溶解，再置冰浴中冷卻，濾過，濾液置濾過，濾液置100ml100ml量瓶中，同法提取三次，量瓶中，同法提取三次，濾液并入量瓶中，用濾液并入量瓶中，用無水乙醇無水乙醇稀釋至刻度，搖稀釋至刻度，搖勻，即得。勻，即得。測定法：測定法：精密量取上述溶液各精密量取上述溶液各10ml10ml，分別，分別置具置具塞試管塞試管中，置水浴中蒸去乙醇，殘渣中加氯仿中，置水浴中蒸去乙醇，殘渣中加氯仿10ml10ml，振搖，使殘渣溶解，各精密加，振搖，使殘渣溶解，各精密加0.1%0.1%異煙異煙肼甲醇溶液肼甲醇溶液（取異煙肼（取異煙肼0.5g0

25、.5g，加鹽酸，加鹽酸0.63ml0.63ml，加甲醇使溶解成加甲醇使溶解成500ml500ml）10ml10ml，搖勻，置，搖勻，置5555暗處保溫暗處保溫4545分鐘，取出，放冷，用氯仿稀釋至分鐘，取出，放冷，用氯仿稀釋至25ml25ml。搖勻，在。搖勻，在415nm415nm的波長處分別測定吸收的波長處分別測定吸收度，計算即得。度，計算即得。3.3.討論討論（1 1）溶劑的選擇）溶劑的選擇異煙肼鹽酸鹽異煙肼鹽酸鹽甲醇、乙醇甲醇、乙醇無水甲醇無水甲醇無水乙醇無水乙醇酸、異煙肼的量酸、異煙肼的量(2)(2)鹽酸鹽酸 : : 異煙肼異煙肼 = 2 : 1 a= 2 : 1 a最大最大鹽酸的濃度

26、為鹽酸的濃度為0.0074mol/l0.0074mol/l異煙肼的濃度為異煙肼的濃度為0.003650.00365mol/l也可以使用也可以使用0.00370.0037mol/l的硫酸的硫酸若使用醋酸，則將其濃度增大，若使用醋酸，則將其濃度增大，約為約為4.44.4mol/l樣品樣品 : : 異煙肼異煙肼 = 1 : 8 = 1 : 8 （3 3）水分、）水分、 溫度溫度、o o2 2與光線與光線的影響的影響含水量含水量腙水解腙水解a%a% 溫度升高，反應速度加快溫度升高，反應速度加快 不揮發溶劑、不吸收水分時不揮發溶劑、不吸收水分時 o o2 2與光線對反應無影響與光線對反應無影響（4 4）

27、關于反應的專屬性）關于反應的專屬性反應速度反應速度c c3 3= o = o c c1717= o = o 、 c c2020= o= o c c1111= o = o 不反應不反應對對c c3 3酮基最敏感。酮基最敏感。 有有色色甲甲瓚瓚四四氮氮唑唑鹽鹽醇醇酮酮基基 coh -還原還原1 1 原理原理 腎上腺皮質激素類藥物腎上腺皮質激素類藥物c c17 17 -醇酮基，具強還原性，醇酮基，具強還原性，在強堿性溶液中能將四氮唑鹽還在強堿性溶液中能將四氮唑鹽還原成有色的甲原成有色的甲瓚。生成的顏色隨瓚。生成的顏色隨所用的試劑和條件的不同而不同所用的試劑和條件的不同而不同（二）四氮唑比色法（二）四

28、氮唑比色法 2.2.四氮唑鹽的種類四氮唑鹽的種類氯化三苯四氮唑氯化三苯四氮唑（ttcttc）也稱紅四氮唑）也稱紅四氮唑藍四氮唑（藍四氮唑（btbt）cnnnn+cl-e2 cnnnnh紅四氮唑紅四氮唑三苯甲瓚三苯甲瓚深紅深紅nmmax490480 cl-+cnnnnoch3+-clcnnnnoch3藍四氮唑藍四氮唑（btbt） ohe4 hcnnnnoch3hcnnnnoch3雙甲瓚（暗藍）雙甲瓚（暗藍）nmmax525 供試液：供試液：精密稱取本品精密稱取本品4g4g（約相當于醋（約相當于醋酸潑尼松龍酸潑尼松龍20mg20mg），置燒杯中，加無水），置燒杯中，加無水乙醇約乙醇約30ml30m

29、l，置水浴上加熱，充分攪拌，置水浴上加熱，充分攪拌，使醋酸潑尼松龍溶解，再置冰浴中冷卻，使醋酸潑尼松龍溶解，再置冰浴中冷卻，濾過，濾液置濾過，濾液置100ml100ml量瓶中量瓶中，同法提取，同法提取三次，濾液并入量瓶中，加無水乙醇稀三次，濾液并入量瓶中，加無水乙醇稀釋至刻度，搖勻，即得。釋至刻度，搖勻，即得。 醋酸潑尼松龍軟膏含量測定醋酸潑尼松龍軟膏含量測定對照液：對照液：精密稱取醋酸潑尼松龍對照品精密稱取醋酸潑尼松龍對照品20mg20mg，置，置100ml100ml量瓶中，加無水乙醇振搖量瓶中，加無水乙醇振搖使溶解，并稀釋至刻度，搖勻，即得。使溶解，并稀釋至刻度，搖勻，即得。3. 3. 方

30、法方法 對照品法對照品法測定法：測定法：精密量取上述溶液各精密量取上述溶液各1ml1ml，分，分別置干燥具塞試管中，各精密加無水乙別置干燥具塞試管中，各精密加無水乙醇醇9ml9ml與氯化三苯四氮唑試液與氯化三苯四氮唑試液2ml2ml，搖勻，搖勻，再各精密加氫氧化四甲基銨試液再各精密加氫氧化四甲基銨試液1ml1ml，搖勻，在搖勻，在2525暗處放置暗處放置40405050分鐘，照分鐘，照分光光度法，在分光光度法，在485nm485nm的波長處分別測的波長處分別測定吸收度，計算，即得。定吸收度，計算，即得。操作應避光。操作應避光。4. 4. 討論討論（1 1） 基團對反應速度的影響基團對反應速度的

31、影響a.ca.c1111= o= o c c1111ohoh如：可的松如：可的松 氫化可的松氫化可的松b.cb.c2121ohoh c c2121- -酯酯c.c.簡單酯簡單酯 復雜酯復雜酯如：醋酸酯如：醋酸酯 琥珀酸酯琥珀酸酯越復雜空間位阻越大越復雜空間位阻越大d. c16有取代基，使反應抑制，有取代基，使反應抑制，需加入冰醋酸，才可以進行測定需加入冰醋酸，才可以進行測定（2 2） 溶劑、水分的影響溶劑、水分的影響含水量含水量5%5%含水含水10%a10%10%a10%含水含水30%30%幾無反應幾無反應無醛無水乙醇無醛無水乙醇醛醛 a a 無水乙醇無水乙醇（具有還原性）（具有還原性）（3

32、3）堿的種類及加入順序）堿的種類及加入順序反應應在強堿性（反應應在強堿性（ph13.75ph13.75）條件下進行條件下進行以氫氧化四甲基銨的效果最佳以氫氧化四甲基銨的效果最佳堿堿試試液液四四氮氮唑唑鹽鹽皮皮質質激激素素溶溶液液加入順序：加入順序：醇酮基不穩定，堿化分解醇酮基不穩定，堿化分解lrt rt 無色無色 空白值低空白值低 質量好壞影響不大質量好壞影響不大lbt bt 淡黃色淡黃色 空白值高空白值高 質量好壞影響較大質量好壞影響較大l要求：要求：a.bta.bt的乙醇溶液極淡黃色，與乙醇比較的乙醇溶液極淡黃色，與乙醇比較l a=0.03a=0.030.06l b.用標準氫化可的松校正摩

33、爾吸光系數用標準氫化可的松校正摩爾吸光系數為：為：22000l c.臨用新配臨用新配（5 5） o o2 2與光線的影響與光線的影響反應過程反應過程反應產物反應產物怕光怕光 避光、暗處、快速避光、暗處、快速o o2 2影響影響顏色強顏色強度和穩度和穩定性定性隔絕空氣、隔絕空氣、 快速充快速充n n2 2（6 6） 溫度與時間溫度與時間tt甲瓚分解甲瓚分解%chp 25 4045bp 30 1hmax=465max=5151. 1. 原理原理 雌激素與硫酸乙醇反應呈色雌激素與硫酸乙醇反應呈色（三）（三）koberkober反應比色法反應比色法桃桃紅紅黃黃色色雌雌激激素素乙乙醇醇 ohsohl雙變

34、色，測定結果重現性不好雙變色，測定結果重現性不好l雜質干擾（賦型劑、穩定劑有干擾）雜質干擾（賦型劑、穩定劑有干擾）la a環是芳環，在環是芳環，在c c2 2或或c c3 3有含氧取代有含氧取代ld d環的環的c c1717有含氧取代（有含氧取代（oh,-c=ooh,-c=o）lc c1313必須有角甲基必須有角甲基解決方法l用該法測定雌激素類藥物制劑的用該法測定雌激素類藥物制劑的含量時比色測定前采用分離提取含量時比色測定前采用分離提取l嚴格控制反應條件嚴格控制反應條件l消除背景干擾消除背景干擾鐵酚試劑比色法l鐵酚試劑替代硫酸乙醇鐵酚試劑替代硫酸乙醇lfe fe 3+3+的作用：的作用：l促進

35、黃色的呈色速度和強度促進黃色的呈色速度和強度l促進黃色變成紅色促進黃色變成紅色l加強紅色的穩定性加強紅色的穩定性l苯酚的作用：苯酚的作用：l消除反應過程中產生的熒光消除反應過程中產生的熒光l加速紅色的生成加速紅色的生成參參 考考 習習 題題甾體激素類藥物的結構中能和甾體激素類藥物的結構中能和 四氮唑鹽發生顯色反應的基團四氮唑鹽發生顯色反應的基團 a. a. 酚羥基酚羥基 b. b. 活潑次甲基活潑次甲基 c. c. 甲酮基甲酮基 d. cd. c17 17 - - -醇酮基醇酮基 e. e. 酮基酮基 用異煙肼比色法測定甾體激素藥用異煙肼比色法測定甾體激素藥物含量時，其溶液的環境是物含量時，其溶液的環境是 a a強酸性強酸性 b b中性中性 c c強堿性強堿性 d d弱堿性弱堿性 e e以上都不對以上都不對 可用于氫化可的松鑒別的試劑有可用于氫化可的松鑒別的試劑有 a a氨制硝酸銀氨制硝酸銀 b b異煙肼異煙肼 c c紅四氮唑紅四氮唑