1、實驗二實驗二 毛細血管采血、微量吸管及改良牛毛細血管采血、微量吸管及改良牛鮑計數板使用及顯微鏡法紅細胞計鮑計數板使用及顯微鏡法紅細胞計數數 醫學檢驗技術教研室醫學檢驗技術教研室 13級檢驗用級檢驗用一、毛細血管采血法目的：掌握毛細血管采血方法。實驗器材：專用“采血針”、微量定量吸管、標本容器等。標本：末梢血。操作方法首先用手指按摩采血部位，使中指或無名指指尖自然充血，再用75%酒精棉球消毒皮膚，待酒精揮發干燥后，用左手拇指和食指固定采血部位，右手持消毒刺針，自指尖腹側迅速刺入2 mm3 mm，讓血液自然流出，用消毒棉球擦去第一滴血后，按需要依次采血，采血完畢，用消毒干棉球壓住傷口片刻即可。 注

2、意事項 所選擇的采血部位，不能有凍瘡、紫紺、水腫、炎所選擇的采血部位，不能有凍瘡、紫紺、水腫、炎癥等；皮膚消毒后，一定要乙醇揮發干燥后采血，否則流癥等；皮膚消毒后，一定要乙醇揮發干燥后采血，否則流出的血會四處擴散而不成滴；為避免交叉感染，采血針在出的血會四處擴散而不成滴；為避免交叉感染，采血針在使用前應進行高壓滅菌，并嚴格實行一人一針制；如穿刺使用前應進行高壓滅菌，并嚴格實行一人一針制；如穿刺后血液不易流出，可于傷口遠端稍加壓力，或重新穿刺。后血液不易流出，可于傷口遠端稍加壓力，或重新穿刺。切忌用力擠壓，以免混入大量組織液，使血液稀釋影響檢切忌用力擠壓，以免混入大量組織液，使血液稀釋影響檢驗結

3、果，且血液更易凝固；進行多項檢查時，采取標本的驗結果，且血液更易凝固；進行多項檢查時，采取標本的順序為血小板計數、紅細胞計數、血紅蛋白測定、白細胞順序為血小板計數、紅細胞計數、血紅蛋白測定、白細胞計數等；出血時間測定需另外刺一部位，凝血時間另行測計數等；出血時間測定需另外刺一部位，凝血時間另行測定。定。二、微量吸管使用1、目的：掌握微量吸管的實驗方法。2、原理：擠壓乳膠頭使微量吸管產生負壓而吸取液體。3、實驗用品：一次性微量吸管、帶孔乳膠吸頭、試管、2ml吸管、ns等。4、標本：新鮮抗凝血5、操作方法（1）準備吸管 將帶孔的乳膠吸頭套在微量吸管上，連接處應嚴密不漏氣。（2）加稀釋液 取試管1支

4、，加生理鹽水2ml.（3）持管吸血 右手拇指和中指夾住吸管及吸頭交接處，示指蓋住吸頭小孔，三個指頭輕微用力，排出適量的氣體使管內形成較小的負壓，將管尖插入抗凝血（或末梢血），三個指頭慢慢松勁，吸取抗凝血到所需刻度后，抬起示指，注意管尖始終不要離開液面，以免吸入氣泡，也不要過度用力將血液吸入乳膠吸頭。 （ 4）拭凈余血 用干棉球順微量吸管口拭凈余血。 （5）稀釋血液 將微量吸管插入含生理鹽水（或稀釋液）的試管底部，慢慢排出吸管內的血液，再用上清液沖洗管內余血2-3次。 （6）洗滌吸管 依次用蒸餾水洗凈，95%乙醇脫水。乙醚干燥。如為一次性微量吸管，可省略該步驟。6、注意事項（1）操作步驟3需反復

5、練習才能準確吸取血液到所需量。（2）一次吸取血液到所需的量，吸管內不能有空節也不能吸取血液過多，最好不要超過所需刻度的2mm.（3）稀釋血液前一定要拭凈管外余血，釋放血液時的動作不能太劇烈，避免破壞血液成分或不能利用上清液將管內血液洗凈。7、實驗評價 微量吸管使用是手工法血細胞分析的第一步，有很多因素影響檢驗結果的準確性和精確度，如一次性吸管的質量、操作者的技術熟練程度和責任心等。三、改良牛鮑計數板的使用（一）目的：掌握改良牛鮑計數板結構及使用方法。（二）原理：一定倍數稀釋的血液或體液混勻后滴入具有固定體積和精密劃分刻度的改良牛鮑計數板中，在顯微鏡下對所選擇的區域中的細胞進行計數，在乘以稀釋倍

6、數，即可換算成單位體積內的細胞數。（三）、實驗用品1、器材 改良牛鮑計數板、專用蓋玻片、光學顯微鏡、綢布、微量吸管、帶孔乳膠吸頭、刻度吸管、試管。2、試劑 紅細胞稀釋液（四）標本：抗凝血（五）操作1、稀釋血液 取試管1支，加紅細胞稀釋液2ml,加抗凝血10微升，立即混勻，制成紅細胞懸液。2、準備計數板 用綢布拭凈改良牛鮑計數板和專業蓋玻片，采用推式法從計數板下緣向前平推蓋玻片，將其蓋在計數池上。3、沖池 用完了吸管吸取制備好的再次混勻的紅細胞懸液，沿蓋玻片與計數板之間的縫隙沖入計數池。充液量以恰好充滿一側計數池為宜，不可過多、過少或有氣泡，否則需重新操作。附：牛鮑計數板基本結構 血球計數板是一

7、塊特制的厚型載玻片，載玻片上有四個槽構成三個平臺。中間的平臺較寬，其中間又被一短橫槽分隔成兩半，每個半邊上面各刻有一小方格網，每個方格網共分九個大方格，中央的一大方格作為計數用，稱為計數區。計數區的刻度有兩種：一種是計數區分為16個中方格（大方格用三線隔開），而每個中方格又分成25個小方格；另一種是一個計數區分成25個中方格（中方格之間用雙線分開），而每個中方格又分成16個小方格。但是不管計數區是哪一種構造，它們都有一個共同特點，即計數區都由400個小方格組成。 計數區邊長為1mm，則計數區的面積為lmm2，每個小方格的面積為1/400mm2。蓋上蓋玻片后，計數區的高度為0.1mm，所以每個計

8、數區的體積為0.1mm3，每個小方格的體積為1/4000mm3。四、顯微鏡法紅細胞計數 原理 用用等滲等滲稀釋液將血液稀釋一定的稀釋液將血液稀釋一定的倍數后，滴入計數板，在顯微鏡下計倍數后，滴入計數板，在顯微鏡下計數一定范圍內紅細胞數，經換算可求數一定范圍內紅細胞數，經換算可求得每升血液中的紅細胞數。得每升血液中的紅細胞數。紅細胞稀釋液 hayemhayem液（液（赫姆氏紅細胞稀釋液赫姆氏紅細胞稀釋液 ） 枸櫞酸鈉稀釋液枸櫞酸鈉稀釋液 普通生理鹽水或加普通生理鹽水或加1%1%甲醛的生理鹽水甲醛的生理鹽水 hayem液主要成分及作用：主要成分及作用：unaclnacl 調節滲透壓；調節滲透壓；u

9、nana2 2soso4 4 調節滲透壓，提高比重防止細胞調節滲透壓，提高比重防止細胞粘連；粘連；uhgclhgcl2 2 防腐；防腐；缺點：遇高球蛋白血癥患者，由于蛋白質沉缺點：遇高球蛋白血癥患者，由于蛋白質沉淀而使紅細胞易凝集。淀而使紅細胞易凝集。枸櫞酸鈉稀釋液主要成分及作用：主要成分及作用：naclnacl 調節滲透壓；調節滲透壓；枸櫞酸鈉枸櫞酸鈉 調節滲透壓，抗凝；調節滲透壓，抗凝；甲醛甲醛 防腐；防腐； 優點：配制簡單，可使紅細胞在稀釋后較長優點：配制簡單，可使紅細胞在稀釋后較長時間保持正常形態并且不凝集，故應用較時間保持正常形態并且不凝集，故應用較廣。廣。普通生理鹽水或加1%甲醛的

10、生理鹽水 急時用。急時用。【操作方法】【操作方法】 l、取紅細胞稀釋液、取紅細胞稀釋液1.99ml毫升，放入一小試毫升，放入一小試管內。管內。2、用微量吸管吸血至、用微量吸管吸血至l0ul處。處。3、擦去管尖外部余血將血液迅速輕輕吹入盛、擦去管尖外部余血將血液迅速輕輕吹入盛有紅細胞稀釋液的試管內，吸上清液嗽洗有紅細胞稀釋液的試管內，吸上清液嗽洗吸管吸管2-3次，立即搖勻。次，立即搖勻。4、用微量吸管或玻棒取混懸液少量，充入計、用微量吸管或玻棒取混懸液少量，充入計數池內。數池內。5、待、待23分鐘，讓紅細胞完全下沉后，將計分鐘，讓紅細胞完全下沉后，將計數板平放在顯微鏡臺上，用低倍鏡觀察，數板平放

11、在顯微鏡臺上，用低倍鏡觀察，如紅細胞分布均勻即可換高倍鏡進行計數。如紅細胞分布均勻即可換高倍鏡進行計數。 紅細胞計數的區域紅細胞計數的區域: 中心大方格中的中心大方格中的5個中方格個中方格(正中一正中一個和四角各一個個和四角各一個)。充液位置充液位置充液位置充液位置為紅細胞計數區為紅細胞計數區域域 計數原則計數原則: 數上不數下，數左不數右的計數原則數上不數下，數左不數右的計數原則 即凡壓在中方格邊線即凡壓在中方格邊線(雙線雙線)上的紅細胞，只上的紅細胞，只計上側與左側線上的細胞，而壓在下側與計上側與左側線上的細胞，而壓在下側與右側線上者不計入。右側線上者不計入。壓線細胞的計數原則壓線細胞的計

12、數原則：數左不數右數左不數右，數上不數下數上不數下 【計算】【計算】 紅細胞數紅細胞數/l=5個中方格內紅細胞數個中方格內紅細胞數510200106 /l=5個中方格內紅細胞數個中方格內紅細胞數1010 /l =5個中方格內rbc數/1001012 式中式中: 5: 5個中方格換算成個中方格換算成1個大方格個大方格 10: 1個大方格容積為個大方格容積為0.1ul，換算成，換算成 1.0 ul。 200： 血液的稀釋倍數血液的稀釋倍數 106 : 由由1ui換算成換算成1l例：例：紅細胞稀釋液紅細胞稀釋液1.99ml1.99ml，加血，加血10ul10ul，混勻。充液，靜置混勻。充液，靜置2

13、23min3min，計數中央大，計數中央大方格內四角和正中五個中方格內的紅細方格內四角和正中五個中方格內的紅細胞胞，共共600600個個，請計算紅細胞計數結果。請計算紅細胞計數結果。 rbc/lrbc/l600600 / / 5 52525 1010200200 10106 66.06.010101212報告方式：報告方式： rbc: x.xx l012/l七七. 參考值參考值男性：男性： (4.0(4.05.5)5.5)10101212l l 女性：女性： (3.5(3.55.0)5.0)10101212l l新生兒：新生兒：(6.0(6.07.0)7.0)10101212l l 400 4

14、00550550 萬萬/ul/ul 350 350500500 萬萬/ul/ul( rbc )【注意事項】【注意事項】 1、吸管、試管要注意清潔、干燥以防溶、吸管、試管要注意清潔、干燥以防溶血，操作迅速避免血液凝固，如有血凝塊應血，操作迅速避免血液凝固，如有血凝塊應重新采血。重新采血。 同時做血紅蛋白測定，白細胞計數和分類同時做血紅蛋白測定，白細胞計數和分類計數，在采血時應先做血膜再做紅細胞，然計數，在采血時應先做血膜再做紅細胞，然后做白細胞，血紅蛋白檢驗，避免紅細胞破后做白細胞，血紅蛋白檢驗，避免紅細胞破壞。壞。 2、充液：、充液： 充液前，紅細胞復液要充分搖勻，紅細充液前，紅細胞復液要充分搖勻，紅細胞懸液注入計數池內要求分布均勻，不可胞懸液注入計數池內要求分布均勻，不可有氣泡，亦不可有多余液體外溢。有氣泡，亦不可有多余液體外溢。 3、質量控制：、質量控制： 中方格內紅細