1、胡學軍胡學軍嘉善中醫醫院檢驗科梅毒的實驗室檢查梅毒的定義定義：梅毒是一種慢性傳染性疾定義：梅毒是一種慢性傳染性疾病。是由病。是由梅毒螺旋體梅毒螺旋體（蒼白螺旋（蒼白螺旋體）引起，患病后病程漫長，早體）引起，患病后病程漫長，早期侵犯生殖器和皮膚，期侵犯生殖器和皮膚， 晚期侵晚期侵犯全身各器官，并生多種多樣的犯全身各器官，并生多種多樣的癥狀和體征，病變幾乎能累及全癥狀和體征，病變幾乎能累及全身各個臟器。身各個臟器。 病原體為梅毒螺旋體，屬于密螺旋體屬，蒼白密螺旋體蒼白亞種(Treponema pallidum subspecies pallidum) 蒼白亞種 梅毒 蒼白螺旋體 地方亞種 地方性梅

2、毒 極細亞種 雅司病密螺旋體屬 品他螺旋體 品他病4 微生物形態 螺旋細密（、規則 一端/兩端鉤狀，菌體成8、S或C形 在暗視野顯微鏡下運動活潑 G-, Fontana鍍銀染色,染成棕褐色5 形態與 染色暗視野顯微鏡下觀察6HistopathologyHistopathology showingshowing Treponema pallidumTreponema pallidum spirochetes in spirochetes in testis of experimentally infected rabbit.testis of experimentally infected ra

3、bbit.Modified Steiner silver stain. Modified Steiner silver stain. CDC/Dr. Edwin P. Ewing, Jr. epe1CDC/Dr. Edwin P. Ewing, Jr. epe1cdccdc. .govgov 梅毒螺旋體梅毒螺旋體，梅毒螺旋體，FontanaFontana鍍銀染色鍍銀染色傳播途徑 梅毒患者的皮膚、粘膜中含梅毒螺旋體，未患病者在與梅毒患者的性接觸中， 皮膚或粘膜若有細微破損則可得病。 獲得性梅毒 （后天）早期梅毒病人是傳染源，95%是通過不潔性交傳染，少數通過接吻， 握手、輸血、接觸污染的內衣濕毛

4、巾、茶杯、煙斗、哺乳、尿布等傳染。 胎兒梅毒（先天 ）：孕婦體內螺旋體，一般在妊娠34月通過胎盤感染嬰兒。 免疫性 特異性抗體感染2 2周后產生特異性周后產生特異性IgMIgM抗體, 不能通過胎盤感染4 4周后出現特異性周后出現特異性IgGIgG抗體,可通過胎盤 非特異性抗體刺激機體產生抗心磷脂抗體/反應素RPR 和 TRUST等方法可檢出：57周或硬下疳后23周 完全治愈的早期梅毒可再感染梅毒的實驗室檢測方法 顯微鏡檢測法：顯微鏡檢測法： （1） 暗視野顯微鏡檢查 （2） 鍍銀染色檢查 血清學檢測法：血清學檢測法： 非梅毒螺旋體抗原血清試驗 （1）VDRL(性病研究實驗室試驗性病研究實驗室試

5、驗)：需滅活：需滅活 （2）USR（不加熱血清反應素試驗）（不加熱血清反應素試驗） （3）RPR(加速血漿反應素環狀卡片試驗加速血漿反應素環狀卡片試驗) （4）TRUST(甲苯胺紅不加熱血清試驗甲苯胺紅不加熱血清試驗) 梅毒螺旋體抗原血清試驗 （1）FTA-ABS （2）TPPA/ TPHA （3）TP-ELISA （4）發光法發光法 （5）膠體金法膠體金法 暗視野顯微鏡檢查 標本類型：梅毒硬下疳、扁平濕疣、黏膜斑等標本類型：梅毒硬下疳、扁平濕疣、黏膜斑等皮損的滲出液、淋巴結穿刺液皮損的滲出液、淋巴結穿刺液 方法：暗視野顯微鏡下查找梅毒螺旋體。方法：暗視野顯微鏡下查找梅毒螺旋體。 結果：典型的

6、梅毒螺旋體呈白色發光結果：典型的梅毒螺旋體呈白色發光, 其螺旋其螺旋較密而均勻。運動方式：較密而均勻。運動方式： 伸縮其螺旋間距離伸縮其螺旋間距離而移動（主要方式）而移動（主要方式）蛇行式蛇行式旋轉式旋轉式 評價：評價：. 簡單、可靠。簡單、可靠。. 早期：硬下疳（梅毒血清學試驗仍陰性）。早期：硬下疳（梅毒血清學試驗仍陰性）。. 陰性不能排出患梅毒的可能性陰性不能排出患梅毒的可能性 暗視野顯微鏡下的梅毒螺旋體螺旋體檢查是診斷早期現癥梅毒的最好方螺旋體檢查是診斷早期現癥梅毒的最好方 法，法，WHO指定其為性病實驗室必備項目之一指定其為性病實驗室必備項目之一鍍銀染色檢查 基本原理：梅毒螺旋體具有親

7、銀性，可被銀溶液染色，從而可以在鏡下觀察到梅毒螺旋體 結果：棕褐色的梅毒螺旋體 梅毒血清試驗梅毒血清試驗梅毒螺旋體侵入人體后產生：梅毒螺旋體侵入人體后產生： 抗心磷脂抗體：即非特異性抗體、反應素抗心磷脂抗體：即非特異性抗體、反應素 RPRRPR、TRUSTTRUST 抗梅毒螺旋體抗體：抗梅毒螺旋體抗體：IgGIgG、IgMIgM ELISAELISA、TPPATPPA兩種抗體兩種抗體1 1抗抗心磷脂抗體血清學心磷脂抗體血清學試驗（試驗（RPRRPR，TRUSTTRUST等）等） 目的：檢測血清中抗心磷脂抗體目的：檢測血清中抗心磷脂抗體 抗原：心磷脂抗原：心磷脂甲苯胺紅不加熱血清試驗(TRUST

8、): 原理： 抗原以膽固醇晶粒為載體，包被上心磷脂和卵磷脂，構成VDRL（抗類脂）抗原顆粒。再把抗原顆粒結合到甲基胺紅上，當抗原與血清中反應素以一定的比例相互作用時，出現凝集，凝集顆粒呈紅色。甲苯胺紅不加熱血清試驗(TRUST): 特點：敏感度高、特異性低，特點：敏感度高、特異性低，易出現易出現假陽性假陽性 用途用途 作為作為篩選篩選 定量定量檢測：觀察療效、復發檢測：觀察療效、復發和再感染和再感染2 2、梅毒螺旋體抗體血清學試驗：、梅毒螺旋體抗體血清學試驗：方法：方法：1 1、梅毒螺旋體抗體測定、梅毒螺旋體抗體測定(ELISA(ELISA法法) ) 2 2、TPPATPPA（明膠凝集實驗）等

9、（明膠凝集實驗）等梅毒螺旋體抗體測定梅毒螺旋體抗體測定(ELISA(ELISA法法) ) 特點：檢測總抗體特點：檢測總抗體 （1 1）用作）用作篩查和確認試驗篩查和確認試驗：敏感性、特異性高：敏感性、特異性高 （2 2）不用于觀察療效、復發和再感染：感染梅毒螺旋）不用于觀察療效、復發和再感染：感染梅毒螺旋 體后，體內產生的抗螺旋體抗體持續存在，甚至體后，體內產生的抗螺旋體抗體持續存在，甚至終生，即使經過足夠的抗梅治療，其血清反應仍終生，即使經過足夠的抗梅治療，其血清反應仍持續陽性持續陽性TPPATPPA（明膠凝集實驗）（明膠凝集實驗） 確證實驗確證實驗/確診實驗確診實驗 采用梅毒螺旋體天然抗原

10、作為診斷抗原特異性和靈敏度高，檢測的是IgM抗體抗體，可以檢測到潛伏梅毒，但操作繁瑣，費用高梅毒血清試驗梅毒血清試驗假陽性因素假陽性因素：技術性：技術性：l標本的污染標本的污染l溶血溶血l操作失誤操作失誤生物學假陽性：生物學假陽性：l某些疾病：結核、瘧疾、肝病、紅斑狼瘡、流感、肺炎、類風濕性某些疾病：結核、瘧疾、肝病、紅斑狼瘡、流感、肺炎、類風濕性關節炎、風濕性心臟病、風疹、系統性硬化癥等，疾病發展過程中關節炎、風濕性心臟病、風疹、系統性硬化癥等，疾病發展過程中釋放心磷脂，到血液中假陽性（多見于釋放心磷脂，到血液中假陽性（多見于TRUSTTRUST）l生理機能發生變化：少數孕婦也可發生生物學假陽性生理機能發生變化：少數孕婦也可發生生物學假陽性梅毒螺旋體抗體測定梅毒螺旋體抗體測定(ELISA(ELISA法法) )結果的解讀結果的解讀陰性對照OD0.1，陽性對照OD0.8時實驗正常，否則實驗無效。計算方法：cut-off(co)值=0.12+陰性對照平均OD值s/co值=病人OD值/ cut-off(co)值，s/co值大于或等于1判為陽性，s/co值小于1判為陰性 注s/co值在0.52.0之間的灰區樣本需復檢確認后報告梅毒檢測流程圖A1(E