1、病毒感染的檢查方法與防治原則(3)醫(yī)學(xué)微生物學(xué)醫(yī)學(xué)微生物學(xué)病毒感染的檢查方法與防治原則(3)病毒感染的檢查方法與防治原則病毒感染的檢查方法與防治原則(3)重點(diǎn)及難點(diǎn)重點(diǎn)及難點(diǎn)標(biāo)本的采集和送檢標(biāo)本的采集和送檢病毒分離培養(yǎng)方法病毒分離培養(yǎng)方法病毒感染的血清學(xué)診斷方法病毒感染的血清學(xué)診斷方法人工主動免疫和被動免疫及其常用制劑人工主動免疫和被動免疫及其常用制劑病毒感染的檢查方法與防治原則(3)第一節(jié)第一節(jié) 病毒感染的檢查方法病毒感染的檢查方法l標(biāo)本的采集與送檢標(biāo)本的采集與送檢l病毒的分離與鑒定病毒的分離與鑒定l病毒感染的診斷病毒感染的診斷病毒感染的檢查方法與防治原則(3)一、標(biāo)本的采集與送檢一、標(biāo)本的

2、采集與送檢采集急性期標(biāo)本采集急性期標(biāo)本使用抗生素使用抗生素冷藏保存，快速送檢冷藏保存，快速送檢采集雙份血清采集雙份血清病毒感染的檢查方法與防治原則(3)二、病毒的分離與鑒定二、病毒的分離與鑒定（一）病毒的分離培養(yǎng)（一）病毒的分離培養(yǎng)u動物接種動物接種u雞胚培養(yǎng)雞胚培養(yǎng)u細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng)病毒感染的檢查方法與防治原則(3)動物接種動物接種病毒感染的檢查方法與防治原則(3)p應(yīng)用：無敏感細(xì)胞培養(yǎng)的病毒應(yīng)用：無敏感細(xì)胞培養(yǎng)的病毒p優(yōu)點(diǎn)：結(jié)果易觀察，可建立動物模型優(yōu)點(diǎn)：結(jié)果易觀察，可建立動物模型p缺點(diǎn)：要有飼養(yǎng)條件，費(fèi)用高，有潛伏病毒，缺點(diǎn)：要有飼養(yǎng)條件，費(fèi)用高，有潛伏病毒，對許多人類病毒不敏感對許多人

3、類病毒不敏感動物接種動物接種病毒感染的檢查方法與防治原則(3)雞胚培養(yǎng)雞胚培養(yǎng)p優(yōu)點(diǎn)：對多種病毒敏感，條件易控制，操作優(yōu)點(diǎn)：對多種病毒敏感，條件易控制，操作 簡單，成本較低簡單，成本較低p缺點(diǎn)：無病毒增殖指標(biāo)；有些病毒可致雞胚缺點(diǎn)：無病毒增殖指標(biāo)；有些病毒可致雞胚死亡死亡病毒感染的檢查方法與防治原則(3)雞雞胚胚接接種種部部位位示示意意圖圖病毒感染的檢查方法與防治原則(3) 單層細(xì)胞單層細(xì)胞 懸浮細(xì)胞懸浮細(xì)胞根據(jù)細(xì)胞生根據(jù)細(xì)胞生長情況長情況 原代細(xì)胞原代細(xì)胞 二倍體細(xì)胞二倍體細(xì)胞 傳代細(xì)胞系傳代細(xì)胞系根據(jù)細(xì)胞來源、根據(jù)細(xì)胞來源、染色體特征及染色體特征及傳代次數(shù)傳代次數(shù)細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng)病毒感染的

4、檢查方法與防治原則(3)1. 原代細(xì)胞原代細(xì)胞 primary cells對多種病毒敏感對多種病毒敏感來源困難來源困難, 獲取成本高獲取成本高可攜帶潛伏病毒可攜帶潛伏病毒 病毒感染的檢查方法與防治原則(3)2. 二倍體細(xì)胞二倍體細(xì)胞 diploid cells對多種病毒敏感對多種病毒敏感不帶病毒，無致癌潛能不帶病毒，無致癌潛能用于病毒疫苗生產(chǎn)用于病毒疫苗生產(chǎn) 病毒感染的檢查方法與防治原則(3) 3. 傳代細(xì)胞傳代細(xì)胞 continuous cell對多種病毒敏感對多種病毒敏感繁殖能力高，傳代時間長繁殖能力高，傳代時間長不能用于病毒疫苗生產(chǎn)不能用于病毒疫苗生產(chǎn)病毒感染的檢查方法與防治原則(3)病

5、毒在培養(yǎng)細(xì)胞中的增殖指征病毒在培養(yǎng)細(xì)胞中的增殖指征: :p細(xì)胞病變細(xì)胞病變p紅細(xì)胞吸附紅細(xì)胞吸附p病毒干擾作用病毒干擾作用p細(xì)胞代謝的改變細(xì)胞代謝的改變病毒感染的檢查方法與防治原則(3)細(xì)胞病變效應(yīng)細(xì)胞病變效應(yīng) cytopathic effect, CPE 正常細(xì)胞正常細(xì)胞細(xì)胞病變早期細(xì)胞病變早期細(xì)胞病變晚期細(xì)胞病變晚期病毒感染的檢查方法與防治原則(3) 紅細(xì)胞吸附紅細(xì)胞吸附 hemadsorption 帶有血凝素的病毒感染細(xì)胞后，能與脊帶有血凝素的病毒感染細(xì)胞后，能與脊椎動物紅細(xì)胞結(jié)合椎動物紅細(xì)胞結(jié)合雞紅細(xì)胞吸附于流感病毒感染的細(xì)胞雞紅細(xì)胞吸附于流感病毒感染的細(xì)胞病毒感染的檢查方法與防治原則

6、(3) 風(fēng)疹病毒風(fēng)疹病毒 人胚腎細(xì)胞人胚腎細(xì)胞CPE()埃可病毒埃可病毒 人胚腎細(xì)胞人胚腎細(xì)胞CPE()人胚腎細(xì)胞人胚腎細(xì)胞埃可病毒埃可病毒CPE(-)CPE(+)待檢標(biāo)本待檢標(biāo)本風(fēng)疹病毒風(fēng)疹病毒(-)風(fēng)疹病毒風(fēng)疹病毒(+)病毒干擾作用病毒干擾作用 viral interference 某些病毒不引起某些病毒不引起CPE,但可干擾感染同一但可干擾感染同一細(xì)胞另一病毒增殖，抑制該病毒的細(xì)胞另一病毒增殖，抑制該病毒的CPE。病毒感染的檢查方法與防治原則(3)（二）病毒的鑒定（二）病毒的鑒定 形態(tài)學(xué)鑒定形態(tài)學(xué)鑒定 血清學(xué)鑒定血清學(xué)鑒定 分子生物學(xué)鑒定分子生物學(xué)鑒定病毒感染的檢查方法與防治原則(3)1

7、. .形態(tài)學(xué)鑒定形態(tài)學(xué)鑒定 光學(xué)顯微鏡光學(xué)顯微鏡 巨細(xì)胞病毒包涵體巨細(xì)胞病毒包涵體透射電鏡透射電鏡 SARS病毒病毒病毒感染的檢查方法與防治原則(3)Ab 方方法法包包括括Ag 2. .血清學(xué)鑒定血清學(xué)鑒定用已知特異性抗體對病毒進(jìn)行種用已知特異性抗體對病毒進(jìn)行種、型型和亞型的鑒定和亞型的鑒定ELISA中和試驗(yàn)中和試驗(yàn)血凝抑制試驗(yàn)血凝抑制試驗(yàn)補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)病毒感染的檢查方法與防治原則(3) 方方法法包包括括3. .分子生物學(xué)方法鑒定分子生物學(xué)方法鑒定 對病毒的蛋白抗原、核算進(jìn)行檢測對病毒的蛋白抗原、核算進(jìn)行檢測蛋白印跡技術(shù)蛋白印跡技術(shù)核酸擴(kuò)增核酸擴(kuò)增核酸雜交核酸雜交基因芯片基因芯片基因

8、測序基因測序病毒感染的檢查方法與防治原則(3)新病毒的鑒定新病毒的鑒定 l核酸類型的測定核酸類型的測定l理化性狀的檢測理化性狀的檢測l基因測序和生物對比基因測序和生物對比病毒感染的檢查方法與防治原則(3)（三）病毒數(shù)量與感染性測定（三）病毒數(shù)量與感染性測定u50%組織細(xì)胞感染量組織細(xì)胞感染量u紅細(xì)胞凝集實(shí)驗(yàn)紅細(xì)胞凝集實(shí)驗(yàn)u空斑形成試驗(yàn)空斑形成試驗(yàn)病毒感染的檢查方法與防治原則(3) 1. .50組織細(xì)胞感染量組織細(xì)胞感染量 50 tissue culture infectious dose, TCID50原理：測定原理：測定50%細(xì)胞出現(xiàn)細(xì)胞出現(xiàn)CPE的最小病的最小病毒量毒量以以CPE作指標(biāo)，判

9、斷病毒感染性和毒力作指標(biāo)，判斷病毒感染性和毒力測定活病毒數(shù)量測定活病毒數(shù)量病毒感染的檢查方法與防治原則(3) + + + + + + + -2. .紅細(xì)胞凝集實(shí)驗(yàn)紅細(xì)胞凝集實(shí)驗(yàn) red cell agglutination test 原理：測定使紅細(xì)胞發(fā)生凝集的最小原理：測定使紅細(xì)胞發(fā)生凝集的最小病毒量病毒量測定病毒總量（活病毒測定病毒總量（活病毒+ +死病毒）死病毒）凝集效價：能使紅細(xì)胞呈凝集效價：能使紅細(xì)胞呈+凝集的病毒最高稀釋凝集的病毒最高稀釋度為凝集效價，該稀釋度記為一個血凝單位度為凝集效價，該稀釋度記為一個血凝單位病毒感染的檢查方法與防治原則(3)3. .空斑形成試驗(yàn)空斑形成試驗(yàn) p

10、laque formation test原理：將適量病毒接種單層細(xì)胞，病毒增殖使原理：將適量病毒接種單層細(xì)胞，病毒增殖使感染的細(xì)胞脫落，形成肉眼可見的空斑感染的細(xì)胞脫落，形成肉眼可見的空斑空斑形成單位（空斑形成單位（plaque formatting unit，PFU）：由一個感染病毒增殖所致）：由一個感染病毒增殖所致測定活病毒數(shù)量測定活病毒數(shù)量病毒感染的檢查方法與防治原則(3)三、病毒感染的診斷三、病毒感染的診斷u形態(tài)學(xué)檢查形態(tài)學(xué)檢查u病毒成分檢測病毒成分檢測u血清學(xué)診斷血清學(xué)診斷病毒感染的檢查方法與防治原則(3)（一）形態(tài)學(xué)檢查（一）形態(tài)學(xué)檢查u電鏡和免疫電鏡檢查電鏡和免疫電鏡檢查u光學(xué)顯

11、微鏡檢查光學(xué)顯微鏡檢查病毒感染的檢查方法與防治原則(3)（二）病毒成分檢測（二）病毒成分檢測u病毒蛋白抗原檢測病毒蛋白抗原檢測 EIA、FIA、Wbu病毒核酸檢測病毒核酸檢測l核酸擴(kuò)增技術(shù)核酸擴(kuò)增技術(shù)l核酸雜交技術(shù)核酸雜交技術(shù)l基因芯片技術(shù)基因芯片技術(shù)l基因測序技術(shù)基因測序技術(shù)病毒感染的檢查方法與防治原則(3)（三）血清學(xué)診斷（三）血清學(xué)診斷u中和試驗(yàn)中和試驗(yàn)u血凝抑制試驗(yàn)血凝抑制試驗(yàn)u補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)u凝膠免疫擴(kuò)散試驗(yàn)?zāi)z免疫擴(kuò)散試驗(yàn)u特異性特異性IgM 抗體檢測抗體檢測病毒感染的檢查方法與防治原則(3)血清學(xué)診斷的用途血清學(xué)診斷的用途u分離病毒為時已晚分離病毒為時已晚u無法分離或難

12、以分離的病毒無法分離或難以分離的病毒u證實(shí)分離病毒的臨床意義證實(shí)分離病毒的臨床意義u血清流行病學(xué)調(diào)查血清流行病學(xué)調(diào)查病毒感染的檢查方法與防治原則(3)原理：原理：病毒中和抗體病毒中和抗體 病毒失去感染性病毒失去感染性1. .中和試驗(yàn)中和試驗(yàn) neutralizing testl檢測血清中抗體的水平檢測血清中抗體的水平l鑒定未知病毒鑒定未知病毒l對病毒進(jìn)行半定量對病毒進(jìn)行半定量l較少用于臨床診斷，用于人群較少用于臨床診斷，用于人群l免疫情況的調(diào)查免疫情況的調(diào)查病毒感染的檢查方法與防治原則(3)原理：病毒特異性抗體雞紅細(xì)胞原理：病毒特異性抗體雞紅細(xì)胞 不凝不凝集集l帶血凝素病毒感染輔助診斷帶血凝素

13、病毒感染輔助診斷l(xiāng)鑒定病毒型和亞型鑒定病毒型和亞型2. .血凝抑制試驗(yàn)血凝抑制試驗(yàn)Hemagglutination inhibition test 病毒感染的檢查方法與防治原則(3)353. .補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)Complement fixation test原理：用已知病毒可溶性補(bǔ)體抗原檢測病人原理：用已知病毒可溶性補(bǔ)體抗原檢測病人血清中相應(yīng)的補(bǔ)體抗體血清中相應(yīng)的補(bǔ)體抗體特異性低，抗體出現(xiàn)早，消失快近期感染指特異性低，抗體出現(xiàn)早，消失快近期感染指標(biāo)標(biāo)病毒感染的檢查方法與防治原則(3)第二節(jié)第二節(jié) 病毒感染的特異性預(yù)防病毒感染的特異性預(yù)防l人工主動免疫人工主動免疫l人工被動免疫人工被動免

14、疫病毒感染的檢查方法與防治原則(3)1. .人工主動免疫人工主動免疫l滅活疫苗滅活疫苗l減毒活疫苗減毒活疫苗l亞單位疫苗亞單位疫苗l基因工程疫苗基因工程疫苗l重組載體疫苗重組載體疫苗l核酸疫苗核酸疫苗病毒感染的檢查方法與防治原則(3)2. .人工被動免疫人工被動免疫l免疫球蛋白免疫球蛋白血清丙種球蛋白血清丙種球蛋白l細(xì)胞免疫制劑細(xì)胞免疫制劑細(xì)胞因子細(xì)胞因子病毒感染的檢查方法與防治原則(3)逆逆轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)錄錄病病毒毒復(fù)復(fù)制制示示意意圖圖第三節(jié)第三節(jié) 病毒感染的治療病毒感染的治療病毒感染的檢查方法與防治原則(3)第三節(jié)第三節(jié) 病毒感染的治療病毒感染的治療l抗病毒化制劑抗病毒化制劑l干擾素和干擾素誘生劑干

15、擾素和干擾素誘生劑l中草藥中草藥l新抗生素類新抗生素類l治療性疫苗治療性疫苗l治療性抗體治療性抗體l基因治療劑基因治療劑病毒感染的檢查方法與防治原則(3)抗病毒化學(xué)制劑抗病毒化學(xué)制劑l核苷類藥物核苷類藥物阿昔洛韋、利巴韋林、拉米夫定等阿昔洛韋、利巴韋林、拉米夫定等l非核苷類反轉(zhuǎn)錄酶抑制劑非核苷類反轉(zhuǎn)錄酶抑制劑奈韋拉平、吡啶酮、甲酸磷霉素奈韋拉平、吡啶酮、甲酸磷霉素l蛋白酶抑制劑蛋白酶抑制劑塞科納瓦、英迪納瓦、瑞托納瓦塞科納瓦、英迪納瓦、瑞托納瓦l其他抗病毒藥物其他抗病毒藥物金剛烷胺、甲酸磷霉素金剛烷胺、甲酸磷霉素病毒感染的檢查方法與防治原則(3)42干擾素和干擾素誘生劑干擾素和干擾素誘生劑l干

16、擾素干擾素l干擾素誘生劑干擾素誘生劑Poly I:C、甘草甜素、蕓芝多糖、甘草甜素、蕓芝多糖病毒感染的檢查方法與防治原則(3)43 以流感病毒為例，試述病毒分離培養(yǎng)的一般程序。以流感病毒為例，試述病毒分離培養(yǎng)的一般程序。 病毒感染血清學(xué)診斷常用的方法及原理？病毒感染血清學(xué)診斷常用的方法及原理？ 病毒感染早期的實(shí)驗(yàn)室快速診斷有哪些方法？病毒感染早期的實(shí)驗(yàn)室快速診斷有哪些方法？ 病毒分離培養(yǎng)時對臨床標(biāo)本的采集和送檢有哪些要病毒分離培養(yǎng)時對臨床標(biāo)本的采集和送檢有哪些要求？求？ 病毒檢測和細(xì)菌檢測有什么區(qū)別？病毒檢測和細(xì)菌檢測有什么區(qū)別？ 復(fù)習(xí)思考題復(fù)習(xí)思考題病毒感染的檢查方法與防治原則(3)中英文關(guān)鍵詞中英文關(guān)鍵詞紅細(xì)胞吸附紅細(xì)胞吸附 hemadsorption血清學(xué)檢測血清學(xué)檢測 serological diagnosis細(xì)胞病變效應(yīng)細(xì)胞病變效應(yīng) cytopathic effect, CPE 血凝抑制試驗(yàn)血凝抑制試驗(yàn) hemagglutination inhibition test50%組織細(xì)胞感染量組織細(xì)胞感染量 50%tissue culture infectious dose, TCID50 病毒感染的檢查方法與防治原則(3)1 Neal Nathanson. Viral Pathogenesis and Immunity. (second edition)，北京：北京：科