1、精品文檔實用厭氧菌分離鑒定及藥敏試驗方法臨床重要的厭氧菌 (主要是內源性 )主要是擬桿菌科（ G-b ）和厭氧球菌。血培養陽性厭氧菌主要有擬桿菌屬、梭桿菌屬、 、普雷沃菌屬、卟啉單胞菌屬、消化鏈球菌屬及其他厭氧菌。一、必需的設備? 厭氧罐、厭氧盒、厭氧袋（標本少）? 厭氧發生氣袋? 厭氧指示劑二、培養基的準備? 非選擇厭氧血平板布氏血平板腦心浸液瓊脂CDC 厭氧血瓊脂哥倫比亞血瓊脂新鮮配制或經24h 預還原（厭氧環境放置）！特殊成份（降低氧還電勢） : L- 半胱氨酸、氯化血紅素 (Hemin) 、 VitK1 選擇性厭氧血平板：自制、商商品化三、厭氧血培養瓶報警后步驟一：轉種轉種（四區劃線）

2、需氧厭氧血平板、巧克力平板，5 CO2還原后的厭氧血平板24h 檢查生長， G 染色，分離，鑒定48h 檢查原始平板是否有新菌落出現打開步驟二：耐氧試驗確認厭氧菌培養 48h 后可能有以下幾種情況需氧厭氧血平板巧克力平板處理方法厭氧血平板處理方法情況一+常規+耐氧試驗、 G染色情況二+可能流感桿菌+再培養 48h情況三+G 染色，厭氧菌情況一和二：耐氧試驗24-48h 再觀察結果，有確認厭氧菌的菌落按下邊鑒定步驟。耐氧試驗方法：選擇每種形態的單菌落，轉種一個厭氧血平皿和巧克力平皿，分別培養。情況三：相當于耐氧試驗，再結合菌落菌體形態，可以確認厭氧菌，用以下方法鑒定。四、厭氧菌鑒定方法（一）快速

3、商品鑒定系統（4h 報告結果）1 無須厭氧培養， 4h 培養后人工輸入結果，電腦軟件輔助報告結果：VITEK ANI卡精品文檔精品文檔Rap ID 32AMicroScan Anareobe PanelRap ID ANA II等2 厭氧環境培養 24-48h 觀察結果API 20A特點是快速， 可鑒定到種水平， 但有時不一定獲得滿意結果， 可同時進行以下操作提供臨床初步報告。（二）初步鑒定方法1 臨床重要的厭氧菌特殊菌落形態和菌體形態及特征（圖示） G-cb 有色素普雷沃菌、卟啉單胞菌 細 G-b，兩端變尖具核梭菌 多晶（空泡），染色著色淺 G-b 擬桿菌屬 非常小的 G-c 韋容球菌屬“咬

4、”瓊脂（凹陷）解尿擬桿菌群2 產色素、熒光 產黑色素擬桿菌卟啉單胞菌、普雷沃菌 磚紅色熒光中間普雷沃菌、洛氏普雷沃菌 黃綠色熒光梭桿菌屬3 特殊鑒定用抗生素紙片（ Oxoid, BBL,Diffico 等）萬古霉素5 g/ml卡那霉素1,00 g/ml多粘菌素10 g/ml聚茴香腦磺酸鈉(SPS)1,00 g/ml ：抑菌環直徑小于10mm（ R），大于 12mm（ S）于厭氧血平皿貼 1/4平皿（劃線第一區） ；如果需要硝酸鹽或SPS 紙片，則貼另 1/4 區菌群萬古卡那多粘菌素SPSG-RVVG+SVVB.frag 群RRR解尿擬桿菌群RSS梭桿菌屬RSS精品文檔精品文檔卟啉單胞菌屬SRR

5、普雷沃菌屬RRV韋榮氏球菌屬RSS厭氧消化鏈球菌SRsRS其他 G+cSSRR4 生化反應觸酶、吲哚、硝酸鹽五、厭氧菌藥敏1 經驗用藥99%厭氧菌對甲硝唑、克林霉素、氯霉素、亞胺培南敏感95 99% - 內酰胺酶 / - 內酰胺酶抑制劑復合抗生素類、革蘭陰性厭氧桿菌對頭孢菌素類抗生素敏感性不同，頭孢菌素類、 - 內酰胺酶、青霉素類等。2 常規做厭氧菌藥敏試驗指征 腦膿腫、心內膜炎、骨髓炎、關節感染、血管移植、輔助裝置、菌血癥從正常無菌部位來源的標本，除非確認是污染的。醫生是否要求做藥敏試驗是非常重要的當幾種菌混合感染確定哪個菌做藥敏，做什么抗生素很難判斷，一般來講， 具有高致病性的菌或不能預測

6、藥敏結果的常用抗生素，或兩者具備， 考慮做藥敏試驗，包括擬桿菌屬某些種，普雷沃菌屬、梭桿菌屬，梭菌，Bilophila , and Sutterella .不能用臨床標本直接做藥敏3 常規厭氧菌藥敏方法1） - 內酰胺酶除脆弱擬桿菌外的菌在做藥敏試驗前都應檢測內酰胺酶試驗。決大多數脆弱擬桿菌都產 內酰胺酶，應報告青霉素、阿莫西林和氨芐西林耐藥。2 ） E-test 方法重癥，血培養來源的厭氧菌適用。E-test 方法是瓊脂稀釋法的替代方法，注意判讀結果時盡量保守，否則容易出現 “非常主要錯誤”。E-test 方法是精確和實用的藥敏試驗方法。3）其他適合臨床使用的商品藥敏系統Dubreuil 等評價 ATB ANA(Version 96) 系統（生物梅里埃）與瓊脂稀釋法對200 株臨床分離厭氧菌對 9 種抗生素的結果后指出， ATB