1、病毒感染的檢查方法與防治原則,第24章,第一節(jié) 病毒感染的檢查方法,病毒感染的檢查,一般原則：特異、敏感、快速、簡便 方法 1根據(jù)流行病學(xué)和臨床特點(diǎn)初步判定可能感染的病毒。 2根據(jù)可疑病毒的生物學(xué)性狀，機(jī)體免疫應(yīng)答和臨床過程以及病人當(dāng)前所處的時機(jī)，確定實(shí)驗(yàn)診斷方法,病毒感染的檢查,檢測內(nèi)容,查病毒,查特異性抗體,病毒顆粒 病毒抗原 病毒核酸 病毒酶類：如逆轉(zhuǎn)錄酶,電鏡直接觀察 光鏡檢查包含體 分離培養(yǎng),一、標(biāo)本的采集與送檢,原則基本與細(xì)菌相似，但應(yīng)注意： 1.標(biāo)本用“雙抗”或兩性霉素B處理 2.低溫保存，盡快送檢 3.血清學(xué)診斷采雙份血清,二、病毒的分離與鑒定,一般程序,標(biāo)本,無菌處理,動物接

2、種 雞胚培養(yǎng) 細(xì)胞培養(yǎng),指標(biāo)陽性 指標(biāo)陰性,病毒鑒定,盲傳23代,指標(biāo)陰性,病毒陰性,一）病毒的分離培養(yǎng) 1.細(xì)胞培養(yǎng) 單層細(xì)胞培養(yǎng) 分類 懸浮細(xì)胞培養(yǎng) 原代細(xì)胞 細(xì)胞種類 二倍體細(xì)胞 傳代細(xì)胞系,病毒的細(xì)胞培養(yǎng),細(xì)胞培養(yǎng)瓶,單層細(xì)胞,2.雞胚培養(yǎng) 采用孵化914天的雞胚 絨毛尿囊膜（allantocherion） 痘苗病毒、人類皰疹病毒 尿囊腔（allantoic cavity） 接種部位 流感病毒、腮腺炎病毒 羊膜腔（amniotic cavity） 流感病毒的初次分離 卵黃囊（yolk sac） 嗜神經(jīng)病毒,2、雞胚培養(yǎng),優(yōu)點(diǎn)：易管理，不帶微生物，成本較低 缺點(diǎn)：操作程序復(fù)雜,3.動物接

3、種 應(yīng)用：尚無敏感細(xì)胞的病毒培養(yǎng) 動物：兔、鼠、黑猩猩、猴等 優(yōu)點(diǎn)：結(jié)果易觀察，可建立動物模型 缺點(diǎn)：有飼養(yǎng)條件要求，費(fèi)用高，動物 體內(nèi)常帶有潛伏病毒,1病毒增殖鑒定 (1)細(xì)胞病變效應(yīng)（cytopathic effect, CPE ） 細(xì)胞變圓、聚集、壞死、溶解或脫落等（多數(shù)病毒）； 形成多核巨細(xì)胞或稱融合細(xì)胞（麻疹病毒、巨細(xì)胞病毒、呼吸道合胞病毒等）； 在培養(yǎng)細(xì)胞中形成包涵體（狂犬病病毒、麻疹病毒等,二）病毒的鑒定,2.病毒形態(tài)學(xué)鑒定,電子顯微鏡：設(shè)備、操作復(fù)雜，應(yīng)用受限 光學(xué)顯微鏡：可見大病毒（痘類病毒）， 對一般病毒檢測意義不大,3.病毒血清學(xué)鑒定,鑒定病毒種、型、亞型 (1)血凝抑制

4、試驗(yàn)正粘病毒型與亞型鑒定 病毒雞紅細(xì)胞凝集（血凝試驗(yàn)） 病毒特異性抗體雞紅細(xì)胞不凝集 （血凝抑制試驗(yàn),2)免疫標(biāo)記法（FIA、EIA、RIA） 多種病毒鑒定 (3)凝膠免疫擴(kuò)散試驗(yàn) 多種病毒鑒定,4.病毒分子生物學(xué)鑒定,抗原變異病毒基因的鑒定 核酸擴(kuò)增 核酸雜交 基因芯片 基因測序,三）病毒數(shù)量與感染性測定,1.血凝試驗(yàn)：病毒總量（活病毒死病毒,2.蝕斑形成試驗(yàn) 3.50組織細(xì)胞感染量,感染性病毒量,四) 新病毒的鑒定,核酸類型的測定 理化性狀的檢測 形態(tài)學(xué)鑒定 血清學(xué)鑒定 基因測序和生物對比,四、病毒感染的快速診斷,數(shù)小時內(nèi)出結(jié)果 病毒顆粒 病毒成分（抗原或核酸） 早期抗體檢測（IgM,一）

5、形態(tài)學(xué)檢查,電鏡和免疫電鏡檢查 普通光學(xué)顯微鏡檢查 包涵體,二）病毒成分檢測,1.病毒蛋白抗原檢測 免疫標(biāo)記技術(shù) 2.病毒核酸檢測 核酸擴(kuò)增技術(shù) 核酸雜交技術(shù) 基因芯片技術(shù) 基因測序,三）病毒感染的血清學(xué)診斷,應(yīng)用： 采取標(biāo)本分離病毒為時已晚 目前尚無分離此病毒的方法或難以分離的病毒 為證實(shí)所分離的病毒的臨床意義 進(jìn)行血清流行病學(xué)調(diào)查等,1.中和試驗(yàn)（neutralizing test,病毒中和抗體 病毒失去感染性 特點(diǎn)：特異性高，抗體維持時間長 應(yīng)用：人群免疫情況的調(diào)查 臨床診斷少用,2.補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn),用已知病毒可溶性補(bǔ)體抗原檢測病人血清中相應(yīng)的補(bǔ)體抗體 特點(diǎn)：特異性低，抗體出現(xiàn)早，消失快

6、應(yīng)用：近期感染指標(biāo),3.血凝抑制試驗(yàn) 流感疫苗接種后效果觀察及流感流行病學(xué)調(diào)查,4、早期抗體檢測,可診斷急性感染 特異性IgM抗體：孕婦感染風(fēng)疹病毒 EBV早期抗原抗體 EAV核心抗原抗體 早期抗原的抗體 EAV衣殼抗原抗體,第二節(jié) 病毒感染的特異性預(yù)防,微生物及其代謝產(chǎn)物 生物制品 動物免疫血清 免疫細(xì)胞 細(xì)胞因子 防治和診斷感染性疾病,疫苗: 死疫苗(killed vaccine)如白百破、傷寒、流腦、乙腦、流感、鉤端螺旋體等。可激發(fā)HI，安全、方便；但抗原性改變，效果差，需多次注射；反應(yīng)重）。 活疫苗（living vaccine）如BCG、鼠疫、炭疽、脊髓灰質(zhì)炎和麻疹疫苗等。可激發(fā)HI

7、、CMI； 多由減毒病原菌制成；偶可發(fā)生回復(fù)突變，毒力回升，接種后發(fā)病。聯(lián)合疫苗在試用中。 基因工程疫苗：目的基因 原核或真核細(xì)胞 基因產(chǎn)物 （如乙肝疫苗,導(dǎo)入,人工培養(yǎng),一、人工主動免疫常用生物制品,重組載體疫苗： 蛋白質(zhì)抗原基因 減毒的病毒或細(xì)菌 基因整合 基因產(chǎn)物 疫苗 合成疫苗： 根據(jù)病原體抗原的氨基酸序列，合成的多肽可作為疫苗。如流感病毒和乙肝病毒的多肽疫苗。 缺點(diǎn)是免疫原性弱、只激發(fā)B細(xì)胞引起HI，因?yàn)榭共《疽蕾嘋MI,轉(zhuǎn)入,培養(yǎng),表達(dá),亞單位疫苗： 除去病原體的核酸，提取其表面抗原制備的疫苗。如腦膜炎球菌和流感桿菌表面的特異性多糖+ 吸附劑制成疫苗（不含類脂、無毒） 、流感疫苗、

8、乙肝疫苗等，這種疫苗防止減毒活疫苗回復(fù)突變和腫瘤病毒潛在的致癌作用。 DNA疫苗： 即基因疫苗或核酸疫苗（第三代疫苗），這種核酸既是載體又能在真核細(xì)胞中表達(dá)抗原，誘導(dǎo)產(chǎn)生細(xì)胞毒殺傷功能的T細(xì)胞，有效預(yù)防病毒、胞內(nèi)寄生菌及寄生蟲引起的傳染,轉(zhuǎn)基因植物疫苗： 將編碼某一病原體保護(hù)性抗原的基因轉(zhuǎn)入植物并在植物中表達(dá)，人們食用植物時，就完成了預(yù)防接種。如食用西紅柿，獲得乙肝疫苗的接種。 治療疫苗： 葡萄球菌的自身疫苗治療葡萄球菌的感染、乙肝疫苗治療乙肝帶毒者。可能的機(jī)制是前者是脫敏作用，后者是打破免疫耐受。 類毒素： 細(xì)菌外毒素+0.3%0.4%甲醛 類毒素(毒性消失,保留抗原性).如白百破疫苗,二、人工被動免疫常用生物制品,免疫球蛋白 血清丙種球蛋白 細(xì)胞免疫制劑 IFN-、 細(xì)胞因子 IL-2、IL-6、IL-12 TNF 、CSF 淋巴因子激活的殺傷細(xì)胞 LAK細(xì)胞,第三節(jié) 病毒感染的治療,核苷類藥物 非核苷類反轉(zhuǎn)錄酶抑制劑 蛋白酶抑制劑 其他抗病毒藥物 干擾素和干擾素誘生