細胞化學染色、滄州醫(yī)學專業(yè)醫(yī)學技術系侯振江、細胞化學染色是一種基于形態(tài)，利用化學或生化技術對血細胞內(nèi)各種化學成分進行定位、定性和半定量分析的方法。 為研究血細胞生理、病理、化學結構的臨床診斷、鑒別診斷、療效觀察、預后監(jiān)測和發(fā)病機制探討提供重要依據(jù)。血細胞化學染色的基本要求是在原位顯示細胞成分和結構，反應產(chǎn)物是有色沉淀物，具有一定的穩(wěn)定性。 血球化學染色顯示糖原、脂質(zhì)、酶、蛋白質(zhì)等。物理法和化學法固定，(1)物理法固定，物理法固定干燥和火焰，化學法最常用甲醛、乙醇、丙酮和醋酸等。 血細胞化學染色工藝利用人工合成的酶基質(zhì)，在酶的作用下產(chǎn)生降解產(chǎn)物，與重氮鹽結合產(chǎn)生偶氮偶聯(lián)，形成不溶性偶氮色素，證明酶的存在。 2、聯(lián)苯胺法：粒細胞和單核細胞中的過氧化物酶作用于過氧化氫，釋放出新的生態(tài)氧，使無色聯(lián)苯胺發(fā)生藍色沉淀。3、普魯士藍法：細胞內(nèi)、外鐵與酸性亞鐵氰化鉀作用，形成藍色亞鐵氰化鐵沉淀。 4、舍爾反應：高碘酸氧化細胞內(nèi)糖類中的乙二醇基形成乙醛基，醛基和舍爾試劑作用，使無色品紅色沉淀。 5、金屬沉積法以外還有物理學方法，如脂溶性染料染色(顯示脂質(zhì))、熒光顯示、放射自顯像及體外活體染色也常用于臨床血細胞學診斷。(三)細胞化學定量粗略估計，根據(jù)染色反應的強弱、顏色濃淡，人為區(qū)別陰性和各種程度的陽性。 百分比法只能反映細胞的陽性率，不能反映顏色的強弱。 積分法是常用的半定量法，結合等級的估算和百分率，反映細胞陽性率的高低和細胞顏色的強弱。以下常用的細胞化學染色方法介紹方法學對白血病鑒別診斷具有重要意義。 一、過氧化物酶染色(POX )、(一)四甲基聯(lián)苯胺法(TMB )【原理】顆粒和單核細胞細胞內(nèi)的髓過氧化物酶(POXorMPO )分解過氧化氫，釋放出新的生態(tài)氧，將白聯(lián)苯胺氧化為藍色聯(lián)苯胺，后者又變成茶色化合物沉積在細胞質(zhì)內(nèi)、POX、新生態(tài)氧o111222卡卡卡卡卡卡卡卡卡卡卡卡卡卡卡卡卡卡卡卡卡卡【試劑】取1%TMB亞硝基鐵氰化鈉飽和溶液1%過氧化氫溶液稀過氧化氫溶液瑞氏染色液、【操作】0.1%TMB乙醇溶液lml，取硝基2 .在新鮮干燥的血液片中，加入混合溶液0.5ml，放置lmin后，加入過氧化氫溶液0.7ml，染色6min。 3 .瑞氏染液重染1520min。 4 .油鏡檢查。【結果】細胞質(zhì)內(nèi)存在藍黑色粒子者為陽性。 (-)顆粒無沉積()顆粒小，分布稀疏()顆粒粗，局灶分布()顆粒粗大，分布密集，占細胞質(zhì)1/22/3 ()顆粒粗大，呈團塊分布()的所有細胞質(zhì)均可充滿顆粒，復蓋核。 (1)粒系： POX主要分布于粒細胞和單核細胞內(nèi)，隨著粒細胞成熟度的增加而增強，中性分葉核細胞呈強陽性。 嗜酸性粒細胞陽性度最強，其陽性粒子比嗜酸性粒細胞粗大，折射。 堿性粒細胞陰性。(2)單核細胞：原始單核細胞呈陰性反應，幼稚單核細胞和成熟單核細胞呈弱陽性反應，顆粒細膩、分散分布。(3)其他細胞淋巴細胞、漿細胞、幼紅細胞、組織細胞、巨核細胞均呈陰性反應。(4)血小板過氧化物酶主要定位于幼稚型巨核細胞的核膜，作為原巨核細胞的一個標志物，有助于FABM7的識別。 過氧化物酶染色主要用于急性白血病類型鑒別，急性骨髓細胞白血病多呈陽性反應，以M3和M2型最強，以MI和M5型最弱，有助于區(qū)別M3和M5型。 急性淋巴細胞白血病表現(xiàn)為POX陰性反應，是急性骨髓細胞和淋巴細胞白血病鑒別的重要指標。注意事項、TMB制備在85%88%的乙醇溶液中染色效果好，不使用90%95%的乙醇，細胞表面的蛋白質(zhì)會立即凝固，妨礙試劑滲透到細胞內(nèi)，減弱或消失顯色反應。 雙氧水需要新鮮配制，其濃度和添加量不能隨意改變。 涂膜中粒細胞未見陽性顆粒，紅細胞呈棕色或綠色，表明過氧化氫過濃。 過氧化氫在血片上不產(chǎn)生氣泡的話，表示無效。 染色液的適當pH為5.5，pH為10個鐵粒子。 正常范圍： 30%90%，平均60%，I型較多，無少見的ii型、iii、iv型。細胞內(nèi)鐵、(3)環(huán)狀鐵粒子紅血球：有6個鐵粒子，其中2/3以上的鐵粒子在核周圍排列成完全的環(huán)狀或不完全的環(huán)狀。 正常或有色顆粒幼細貧血無環(huán)狀鐵顆粒幼細胞、鐵顆粒幼細貧血中環(huán)狀鐵顆粒幼細胞為6%。環(huán)鐵粒幼細胞、【臨床意義】1 .缺鐵性貧血時，骨髓細胞外鐵明顯減少，“一”“士”，細胞內(nèi)鐵平均為5.9%，僅為I型。 經(jīng)過有效的鐵劑治療，外鐵增加了。 因此，骨髓鐵染色是診斷缺鐵性貧血、指導缺鐵劑治療的重要方法。2.鐵粒幼細胞性貧血時，外鐵“2”和“3”為內(nèi)鐵平均70%，鐵粒粗大，以iiiv型為主，出現(xiàn)很多環(huán)狀鐵粒幼細胞。 因此，本實驗是診斷鐵粒幼細胞貧血的有效方法。 MDS還出現(xiàn)環(huán)狀鐵粒幼細胞。3.缺鐵性貧血如