液相色譜在生物中的應用_第1頁
液相色譜在生物中的應用_第2頁
液相色譜在生物中的應用_第3頁
液相色譜在生物中的應用_第4頁
液相色譜在生物中的應用_第5頁
已閱讀5頁，還剩13頁未讀， 繼續免費閱讀

下載本文檔

版權說明：本文檔由用戶提供并上傳，收益歸屬內容提供方，若內容存在侵權，請進行舉報或認領

文檔簡介

DHPLC變性高效液相色譜在突變基因中的應用,1.神馬是液相色譜,液相色譜：以液體作為流動相的色譜分離方法適用于高沸點、大分子、強極性和熱穩定性差的化合物的分析流動相具有運載樣品分子和選擇性分離的雙重作用,神馬是高效液相色譜,高效液相色譜法(HighperformanceLiquidChromatography，HPLC)是在經典液相色譜法的基礎上，填料顆粒小而均勻，小顆粒具有高柱效，但會引起高阻力，需用高壓輸送流動相。,液相色譜法原理,分離原理是：溶于流動相中的各組分經過固定相時，由于與固定相發生作用（吸附、分配、離子吸引、排阻、親和）的大小、強弱不同，在固定相中滯留時間不同，從而先后從固定相中流出。,HPLC的極性分離類型,液液色譜法按固定相和流動相的極性不同可分為正相色譜法(NPC)和反相色譜法(RPC)。正相色譜(NP-HPLC)采用極性固定相，流動相為相對非極性的疏水性溶劑常用于分離中等極性和極性較強的化合物(如酚類、胺類、羰基類及氨基酸類等）。反相色譜(RP-HPLC)重點采用非極性固定相（如C18、C8）；流動相為水或緩沖液，常加入甲醇、乙腈、異丙醇、丙酮、四氫呋喃等與水互溶的有機溶劑以調節保留時間。適用于分離非極性和極性較弱的化合物。比如高通量篩選DNA序列變異。,反向液相色譜流篩選基因變異流程程圖,輸液泵,進樣器,色譜柱,柱溫箱,檢測器,溶劑,數據處理,溶劑,DNA:非極性物質色譜柱:非極性溶劑:極性水/甲醇/乙腈,柱塞往復泵,手動進樣器,獨特的DNA色譜柱DNASep柱,當DNA片段遇見PS-DVB和TEAA,雜合子個體的DNA經擴增產生雜合二倍體,它與純合子個體的DNA擴增產物完全匹配的純合二倍體的解鏈特征不同,在部分加熱變性的條件下,通過雜合與純合二倍體于柱中的保留時間差異,而發現DNA的突變。當柱溫升高使DNA片段開始變性,則部分變性的DNA可被較低濃度的乙腈洗脫下來。由于異源雙鏈(錯配的)DNA與同源雙鏈DNA的解鏈特征不同,在相同的部分變性條件下,異源雙鏈因有錯配區的存在而更易變性,被色譜柱保留時間短于同源雙鏈,故先被洗脫下來,從而在色譜圖中表現為雙峰或多峰的洗脫曲線。,同源DNA于異源DNA,DHPLC系統和瓊脂糖凝膠電泳對Hae3酶切質粒pUC18分析圖譜比較,紫外光檢測器,DHPLC在檢測突變基因的主要技術特點,檢測的準確性高,對未知突變大于96%,已知突變大于99%。檢測靈敏度高,能檢測低水平的突變,可靠檢測樣品中少至5%的基因型。可分析異質性樣本,可進行混合樣品的分離檢測。操作容易,自動化分析。結果重復性高,速度快。,DHPLC在微生物領域的應用,DHPLC

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明，都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等，如果需要附件，請聯系上傳者。文件的所有權益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙，網頁內容里面會有圖紙預覽，若沒有圖紙預覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經權益所有人同意不得將文件中的內容挪作商業或盈利用途。
  • 5. 人人文庫網僅提供信息存儲空間，僅對用戶上傳內容的表現方式做保護處理，對用戶上傳分享的文檔內容本身不做任何修改或編輯，并不能對任何下載內容負責。
  • 6. 下載文件中如有侵權或不適當內容，請與我們聯系，我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

評論

0/150

提交評論