1. 體內藥物分析定義。P1研究藥物及其代謝物在生物體內數量和質量變化規律的方法學科,獲得藥物在體內吸收、分布、代謝排泄等各種動力參數，藥物與大分子的相互作用，代謝產物、代謝途徑等信息，對藥物評價，為臨床合理用藥、研發新藥等提供科學依據。2. 影響血藥濃度的因素（理解）。P3-5（1） 機體因素：包括生理、病理、遺傳因素（2） 藥物因素：包括劑型因素、藥物相互作用（3） （3）其他因素：大氣污染、食品、煙、酒、茶等藥物進入體內后，血液循環為藥物體內轉運的樞紐。大多數藥物只有達到作用部位和受體部位，并達到一定的濃度后，才產生一定的藥理作用。多數藥物的血藥濃度與藥理效應呈平行關系，部分藥物的血藥濃度與藥效無明顯相關關系。3. 體內藥物分析的生物樣本及分析對象。P8生物樣本：凡是體液所到之處，如血液、尿液、唾液、毛發、各種器官、組織、呼出氣體等都是取樣對象，還包括細胞懸液，微粒體孵育液、器官灌流液等體外試驗中的各種生物介質。分析對象：母體藥物、代謝產物、必要的內源性物質或與之相關的其他藥物。4. 體內藥物分析的特點（1） 干擾雜質多（2） 被測濃度低（3） 供試樣品量少（4） 待測物的易變性（5） 要求較快提供結果（6） 要有一定的儀器設備（7） 工作量大5. 生物樣品選擇的基本原則。常用的生物樣品及其應用特點。P19選擇原則：（1） 必須能反映濃度與藥效的關系（2） 易于獲得（3） 便于處理（4） 根據不同目的要求選取常用生物樣品及應用特點：血液 優點：較好體現藥物濃度與治療的關系 缺點：（1）損傷性取樣，取樣量有限制 （2）需要專業人員操作尿液 優點：（1）非損傷性取樣 （2）藥物濃度高 （3）收集方便 缺點：（1）濃度變化大，與血藥濃度相關性差 （2）：不易采集，保存 （3）：腎功能不全、嬰兒不宜用此法唾液 優點：（1）非損傷性取樣 （2）含蛋白濃度低，易處理 （3）CS/CP較恒定時，可代替血樣進行TDM及藥物動力學研究 缺點：（1）適用藥少 （2）取樣量變化大毛發 優點：（1）取樣方便，可重復取樣 （2）通過測某特定代謝物區別濫用藥、臨床藥 （3）可獲得長期用藥信息 缺點：（1）預處理繁雜，干擾多 （2）分析對象含量低，需精密儀器6. 血液樣品的采集和制備.P21采集：通常用一次性針頭插入靜脈血管內抽取，取下針頭，轉移到相應容器，不能用力推壓以免血細胞破裂制備：（1）血漿：多以肝素作抗凝劑，取適量于離心管，旋轉使均勻分布于管壁，傾去多余液體， 干燥試管；然后加入血樣，離心后取上層黃色液體即可，其量約為全血的50%（2）血清：等血樣中血塊凝結，在室溫25下凝結速度較慢，可在37水浴加快血清析出，離心后取上清液即可，其量約為全血的40%（3）全血：在血樣中加入含有抗凝劑的試管，輕輕混勻即可。6. 生物樣品的儲存。P23-24（1） 冷凍儲存（2） 加穩定劑（酶抑制劑、抗氧劑）（3） 加防腐劑或調節pH8. 去除蛋白的方法及原理，各種常用的蛋白沉淀劑及其效果。P27-28蛋白質沉淀法：（1） 生成不溶性鹽沉淀，低于蛋白質等電點的pH時，酸根與帶正電荷的蛋白質形成不溶性鹽沉淀；高于蛋白質等電點pH時，金屬離子與蛋白質中帶負電荷的羧基形成不溶性鹽沉淀。（2） 鹽析和脫水：與水混溶的有機溶劑可以與蛋白質爭奪水化膜，并使水的介電常數減少，從而影響蛋白質的解離程度及所帶電荷數量，增加蛋白質顆粒間的引力使蛋白質沉淀。組織的酶消化法：蛋白水解酶可在溫和條件下有效水解生物蛋白，將與蛋白質結合的藥物釋放出來9. 常用的綴合物水解方法有哪些？P28（1） 酸水解（2） 酶水解（3） 溶劑解10. 什么樣品需要進行有機破壞處理？P29微量元素多數以結合的形式存在于有機物中，在分析和測定這些元素時，需將這些元素從有機物中游離出來，或者將有機物破壞后測定，根據被測的性質，選則合適的有機物破壞法，使樣品中絕大部分有機物破壞。某些元素在破壞有機物的過程中無絲毫損失，又能在破壞有機物后測定是何物干擾。11. 游離藥物與結合藥物分析的方法有哪些？其原理是什么？P29-30平衡透析法、超濾法、超離心法、凝膠過濾法前兩法原理：利用半透膜只允許小分子藥物通過，而不允許大分子藥物通過的原理使游離性與結合性藥物分離12. 液液提取法的原理、影響因素及提取技術。P30-33原理：藥物與干擾成分在互不相容的兩相溶劑中的分配系數不同，選擇性地提取生物基質中的藥物影響因素：水相pH。提取溶劑種類、離子強度提取技術：通常在戴塞的試管中進行，多半進行一次提取，用酸堿回提時也只是一次，不考慮提取盡藥物13. 液固提取法的原理，固相萃取的主要步驟，及固相萃取的影響因素。P33-35原理：將樣品液通過合適的固相小柱，利用藥物與雜質對固相小柱親和力的差別，用適當溶劑沖洗、洗脫，使藥物得到凈化步驟：（1）固相柱選擇（2）固相柱處理（3）樣品液上樣（4）分離凈化（5）待測物洗脫提取率、選擇性的影響因素：（1）流速（2）樣品裝載量（3）固相柱使用要求（4）樣品上柱前的處理14. 提取溶劑的蒸發方法。P36抽真空揮發或直接通入氣體使溶劑揮發15. 柱切換技術的原理。見PPT是一種在線固相分離技術：選用一個35cm長的短柱，用低溶劑強度的預處理流動相使生物樣品凈化，富集切換閥后，分析流動相將組分帶入分析柱分離測定測定結束后儀器自動恢復開始狀態，準備下次進樣 16. 微透析技術的定義。P45（MD）是一種膜分離技術，利用膜透析原理，對細胞液進行流動性連續采樣，在不破壞生物體內環境的情況下，直接插到生物活體內采樣進行原位測定。17. 基本概念P51-52生物介質：指一種生物來源的物質，能夠以可重復方式采集和處理。標準物質：用于制備標準樣品和QC樣品的待測物的參比標準，結構上可以是物質本身、其游離堿、酸、鹽、酯。標準樣品：在空白介質中家人已知量待測物標準物質制成的樣品，用于建立標準曲線，計算質控樣品和未知樣品中待測物濃度。質控樣品：在空白生物介質中加入已知量待測物標準物質制成的樣品，監測生物分析方法的重復性和評價每一分析批中未知樣品分析結果的完整性和正確性。介質效應：樣品中存在除待測物以外的其他干擾物質，對待測物響應值造成直接或間接影響分析批：包括待測樣品、適當數目的標準樣品和QC樣品的完整系列。18. 特異性的定義及考察方法。P52定義：指樣品中存在干擾成分的情況下分析方法能準確、專一測定分析物的能力?？疾旆椒ǎ褐辽偃×鶄€不同個體空白樣品，采用擬定的方法進行測定，所得結果接近于定量限濃度的模擬樣品和用藥后的實際生物樣品比較，以證明內源性物質、相應的代謝物、降解產物及其他共服藥物不干擾樣品測定19. 標準曲線與線性范圍，結合實驗進行復習。P52-5420. 定量下限的定義、考察方法及要求。定義：指符合準確度、精密度要求的生物樣品中藥物的最低定量濃度，其反映了方法的靈敏度?？疾旆椒ǎ喊礃藴是€項下方法制備樣品，至少制備5個標準樣品，按照擬定方法進行測定，考察精密度與準確度。要求：LLOQ的準確度應在真實濃度的80120范圍內；精密度的RSD應小于20；LLOQ限度要求：至少能滿足測定35個半衰期后生物樣品中的藥物濃度（或能檢測出Cmax的1/101/20時的藥物濃度），信噪比（S/N）一般大于5。21 精密度準確度的定義、表示方法、考察方法和要求。準確度：指用該方法測得的生物樣品中待測藥物濃度與其真實濃度的接近程度。表示方法：相對回收率（RR）或相對誤差（RE）要求：RR 85115（LLOQ附近80120） RE 15（LLOQ附近20）精密度：每次測定結果與多次測定的平均值的偏離程度。表示該分析方法的可重復性，可反映分析方法的可操作性。表示方法：相對標準偏差（RSD）要求： RSD一般應小于15 LOQ附近RSD應小于20。22. 需要進行哪些穩定性試驗？（1） 短期室溫穩定性（2） 長期儲存穩定性（3） 凍融穩定性（4） 儲備液穩定性（5） 待測溶液穩定性（6） 樣品處理過程穩定性23. 提取回收率的定義、評價指標和限度要求。指從生物樣本基質中回收得到分析物質的響應值與標準物質產生的響應值的百分比，用于評價樣品預處理方法。取待測藥物對準品加入空白基質中，制備高、中、低3個濃度QC樣品，每個濃度5個樣品按樣品處理方法處理，測定。 另取等量相同濃度的標準溶液，不經提取處理，直接測定。 內標（1個濃度5個QC樣品）也需進行提取回收率試驗。提取回收率限度要求：一般應50且恒定；高、中濃度的RSD應15%；低濃度的RSD應20。 內標的提取回收率應與被測物一致或相近，一般相差不超過10%24. 分析方法的質量控制方法及限度要求。每個分析批生物樣品測定時應建立新的標準曲線，并隨行測定高、中、低3個濃度的QC樣品，每個濃度至少雙樣品，QC樣品數不得少于未知樣品數的5%，且不得少于6個，并均勻分布在未知樣品測試順序中。限度要求：偏差一般應小于15%，低濃度點小于20%，最多允許33%的質控樣品結果超限，且不得均在同一濃度25. 血漿蛋白結合率的定義，測定常用的5種方法，平衡透析法原理。（第一組）定義：藥物血漿蛋白結合率是藥物與血漿蛋白結合的量占藥物總濃度的百分率，是藥物代謝動力學的重要參數常用方法：（1）平衡透析法（2）超濾法）（3）超速離心法（4）光譜法（5）色譜法平衡透析法原理：半透膜與蛋白質易產生體積遷移效應，對于帶電的蛋白質可能產生Gibbs-Donna 效應和以非特異性的透析設備表面的藥物吸附效應26. 在鹽酸哌甲酯穩定性考察實驗中，采取的提高穩定性的方法有哪些？分別從什么方面起到提高穩定性的作用？（第三組）28. 基質效應的定義，來源，評定方法及消除方法。（第四組）基質效應：來源于生物樣品中的內源組分和樣品處理后引入的雜質，常對樣品的測定有顯著的干擾，并影響測定結果的穩定性，這些影響和干擾被稱為基質效應。來源：內源性雜質指生物樣品中存在的有機和無機成分，經前處理后仍存在于提取液中。外源性雜質外源性組分在生物樣品中不存在，但同樣會帶來基質效應，由樣品前處理各步驟引入。評定方法：（1）柱后灌注法（2）提取后添加法消除方法：（1）樣品前處理（2）同位素內標（3）色譜分離（4）質譜分離29. 手性高效液相色譜法的分類。P151（第五組）（1）手性衍生化試劑法（2）手性流動相添加法（3）手性固定相法30. Caco-2細胞模型用于什么類型的研究，花旗松素和落新婦苷在細胞中的轉運情況如何？（第七組）是一種人克隆結腸腺癌細胞，結構和功能類似于分化的小腸上皮細胞，具有微絨毛等結構，并含有與小腸刷狀緣上皮相關的酶系。Caco-2細胞與人小腸上皮細胞在形態學上相似，具有相同的細胞極性和緊密連接?？梢杂脕磉M行模擬體內腸轉運的實驗。31.免疫分析法的原理。P178-181,當標記抗原與未標記抗原同置于含有一定抗體的反應體系中，標記抗原（Ag）與抗體（Ab）發生競爭結合反應32. 免疫反應的基本條件，什么是抗原，藥物屬于什么類型抗原。特異抗體的制備和鑒定?；緱l件：特異性抗體、標記抗原、未標記抗原（標準品）抗原：指在機體中引起特異性免疫應答反應的物質藥物大多為小分子物質，認為是半抗原，與蛋白質等載體物質結合后成為完全抗原特異抗體的制備：抗原+福氏佐劑混合形成穩定的油包水乳劑；注射部位：多采用腳掌、腹股溝淋巴結、大腿肌肉、皮下及靜脈等；時間：間隔一定時間注射一次，數月后可得滿意的抗血清。當抗體達一定量時，及時采血，分取血清（抗體），經純化分離后對抗體進行鑒定。鑒定：（1） 滴度滴度（titer）即效價，以抗血清的稀釋度表示，稀釋倍數越大，滴度越高，效價也越高（2） 特異性特異性（specificity）即免疫反應的專屬性，用交叉反應率來表示（3）活度活度（activity）指抗體與相應抗原的親和力，即抗原抗體結合的牢固度。33. 免疫分析法的分類P187，游離與結合標記藥物的分離方法。P189-190分類：按標記物不同 ，分為：放射免疫分析法（RIA）酶免疫分析法（EIA） 熒光免疫分析法（FIA）化學發光免疫分析法（CLIA）根據抗原抗體結合反應平衡后，是否將結合物（B）與游離物（F）分離，分為：均相免疫非均相免疫分離方法：層析法、沉淀法、吸附法、微孔濾膜法、固相法、雙抗體法34. 藥代動力學的定義P233。臨床藥代動力學研究的對象有哪些？各自屬于哪個臨床試驗階段？目的分別是什么？（第二組）定義：藥物代謝動力學（ADME）是研究藥物在生物體內吸收、分布、代謝和排泄過程及規律的一門學科。應用動力學原理與數學處理方法，定量描述體內藥物及代謝物濃度隨時間變化的動態規律，探討藥物在體內的代謝途徑。臨床研究對象：（1）健康志愿者的藥代動力學研究【1期】 探討藥物在體內吸收、分布和消除的動態變化特點（2）目標適應癥患者的藥代動力學研究【2、3期】 當目標適應癥患者的疾病狀態對藥物的藥代動力學產生重要影響時應進行此試驗（3）特殊人群的藥代動力學研究【3、4期】肝腎功能損害患者、老年和兒童患者可能影響藥物代謝、排泄，因此進行研究，指導合理用藥，保證安全有效（4）群體藥代動力學【】關于目標患者個體之間藥物濃度變異來源與相關性的研究35. 生物利用度和生物等效性試驗均是評價制劑質量的重要指標，但兩者的目的各有側重，且在藥品研發的不同階段發揮不同作用。P233整段話（第二組）生物利用度和生物等效性均是評價制劑質量的重要指標，前者反映藥物活性成分吸收進入體內的程度和速度，是新藥研究過程中選擇合適給藥途徑和確定用藥方案的重要依據之一。后者重點在以預先確定的等效標準和限度進行的比較，是保證含同一藥物活性成分的不同制劑體內行為一致性的依據，是判斷研發產品是否可替換已上市藥品使用依據。兩者在不同研發階段有不同作用。36. 治