章末整合提升 第一部分微生物的利用 梳理知識構建綱要 整合重點提升技能 內容索引 梳理知識構建綱要 整合重點提升技能 突破1劃線分離法和涂布分離法的比較 兩種分離法的易錯點撥 1 在稀釋涂布平板操作中 每個步驟都要注意無菌操作 以防培養基被污染 影響實驗效果 2 每一稀釋倍數菌液都至少要涂布三個平板 作為實驗重復 求平均值 若其中有菌落數與其他實驗差距懸殊者 應舍棄該實驗數據 不進行統計 計算 3 平板冷凝后 皿蓋上會凝結成水珠 凝固后的培養基表面的濕度也比較高 將平板倒置 既可以使培養基表面的水分更好地揮發 又可以防止皿蓋上的水珠落入培養基中造成污染 1 微生物的分離和培養是現代生物工程應用中的重要環節 下圖甲 乙 丙是大腸桿菌分離和培養過程中部分操作和實驗結果示意圖 請據圖回答有關問題 1 下圖甲所示的是制備固體培養基時的實驗操作步驟之一 它稱為 2 培養大腸桿菌時 在接種前需要檢測培養基是否被污染 對于固體培養基應采用的檢測方法是 答案 倒平板 將未接種的培養基在適宜的溫度下放置適宜的時間 觀察培養基上是否有菌落產生 3 下圖乙是平板劃線法接種操作示意圖 正確的操作順序是a b 用字母和箭頭表示 找出圖乙中兩處錯誤的操作 用字母表示 答案 g f e c d h cd 4 下圖丙是某同學用平板劃線法接種后的培養基培養12h后的實驗結果 如果培養基上 則說明無菌操作基本符合要求 答案 生長的菌落顏色 形狀 大小基本一致 并符合大腸桿菌菌 落的特點 突破2培養基的配制和無菌技術 1 培養基的制備 以lb固體培養基為例 計算 稱量 融化 滅菌 倒平板 2 無菌技術 1 實驗室常用的滅菌方法有灼燒滅菌 干熱滅菌 高壓蒸汽滅菌等 常用的消毒方法有煮沸消毒法 巴氏消毒法 化學藥劑消毒法等 對不同的對象需采用不同的消毒或滅菌方法 2 微生物培養時獲得純凈培養物的關鍵是防止外來雜菌的入侵 無菌技術圍繞著如何避免雜菌的污染展開 主要包括以下內容 對實驗操作的空間 操作者的衣著和手進行清潔和消毒 將用于微生物培養的器皿 接種用具和培養基等進行滅菌 為避免周圍環境中微生物污染 實驗操作應在酒精燈火焰附近進行 實驗操作時應避免已經滅菌處理的材料 用具與周圍的物品相接觸 3 倒平板操作待培養基冷卻至60 左右時 在酒精燈火焰附近倒平板 嚴格遵循教材上的操作步驟 4 劃線分離法劃線分離法通過接種環在瓊脂固體培養基表面連續劃線的操作 將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養基的表面 5 涂布分離法先將菌液進行系列稀釋 然后涂布平板 在稀釋度足夠高的菌液里 聚集在一起的微生物將被分解成單個細胞 從而在培養基表面形成單個菌落 2 下圖甲 乙是微生物接種常用的兩種方法 請回答下列相關問題 1 圖甲是利用法進行微生物接種 圖乙是利用法進行微生物接種 這兩種方法所用的接種工具分別是和 對這兩種接種工具進行滅菌和消毒的方法依次是和酒精消毒 答案 解析 劃線分離 涂布分離 接種環 玻璃刮刀 灼燒滅菌 解析圖甲和圖乙分別是劃線分離法和涂布分離法 這兩種方法所用的接種工具分別是接種環和玻璃刮刀 由于在酒精燈火焰附近存在著無菌區域 因此接種常在火焰附近進行 在微生物培養過程中會產生水 對微生物的生長造成影響 故需要倒置培養 2 接種操作為什么一定要在酒精燈火焰附近進行 3 接種后 在固體培養基上培養細菌時為什么進行倒置培養 答案 火焰附近存在著無菌區域 避免培養過程產生的水分影響微生物的生長 答案 4 如圖是采用上述接種方法接種后培養的效果圖解 其接種方法是 填 圖甲 或 圖乙 圖乙 突破3微生物的分離技術 1 微生物的代謝類型 1 根據能否將co2合成有機物可分為 自養型微生物與異養型微生物 2 劃分依據 自養型微生物與異養型微生物類型劃分的主要依據是能否以無機碳作為生長的主要或唯一碳源 而與氮源無關 自養型微生物以co2或碳酸鹽為主要或唯一碳源進行代謝生長 異養型微生物必須以現成有機物作為碳源進行代謝生長 2 選擇培養基在微生物培養中的應用 1 在微生物學中 將允許特定種類的微生物生長 同時抑制或阻止其他種類微生物生長的培養基 稱為選擇培養基 在配制選擇培養基時 往往要在培養基中加入某種化學物質 例如 當需要酵母菌和霉菌時 可以在培養基中加入青霉素 以抑制細菌和放線菌的生長 從而分離出酵母菌和霉菌 在培養基中加入高濃度的食鹽溶液可以抑制多種細菌的生長 但不影響金黃色葡萄球菌的生長 可以將金黃色葡萄球菌分離出來 2 分離某種目的菌株 應根據它對營養和環境的特殊要求 設計合理的選擇培養基 3 在農業生產中發現一種廣泛使用的除草劑 含氮有機化合物 在土壤中不易降解 長期使用可污染土壤 為修復被該除草劑污染的土壤 可按下面程序選育能降解該除草劑的細菌 已知該除草劑在水中溶解度低 含一定量該除草劑的培養基不透明 1 制備土壤浸出液時 為避免菌體濃度過高 需將浸出液進行處理 答案 稀釋 2 要在長期使用該除草劑的土壤中分離目的菌 從物理性質 用途方面來看 上述培養皿中培養基的特點是 3 在劃線培養時 只有很少菌落出現 大部分細菌在此培養基上不能生長的主要原因是或有氧條件抑制了這些細菌的生長 4 在固體培養基上形成的菌落中 無透明帶菌落利用的氮源主要是 有透明帶菌落利用的氮源主要是 據此可篩選目的菌 答案 在無氮固體培養基中添加了該除草劑 培養基中缺少這些細菌可利用的氮源 氮氣 該除草劑 5 科研人員用放射線處理該細菌獲得兩個突變株a和b 然后對突變株a和b進行實驗 結果如下表所示 答案