成人脂肪來源間充質干細胞的分離培養(yǎng)與鑒定作者：李戰(zhàn)強,黃友章,彭勤建,汪立川,解永學,廖麗【關鍵詞】脂肪【關鍵詞】成人；脂肪；干細胞；分離；培養(yǎng)1實驗資料試劑均購自Sigma公司，熒光標記單抗購自BD公司，DMEM購自Gibco公司.成年女性48歲行吸脂術時用無菌針管從臀上方吸取深層脂肪組織20mL.在1h內(nèi)將其移至離心管內(nèi)，加入等量PBS緩沖液，充分振蕩后低速離心800r/min10min.反復沖洗3次后加入等量15g/LI型膠原酶.37水浴中充分振蕩30min，再加入等量胎牛血清（FBS）中止.低速離心10min后棄去上清.將下層細胞用PBS懸浮后加入16mmol/LNH4Cl37水浴中10min以裂解紅細胞.低速離心10min后再用PBS沖洗3次.最后將瞎胞用含100mL/LFBS+10g/L青霉素的DMEM懸浮后移入培養(yǎng)瓶中，37，50mL/LCO2培養(yǎng)箱中孵育，48h后首次換液，棄去懸浮細胞.隨后每3d換液，1wk后傳代.將第3代細胞用于流式細胞儀檢測.濃集細胞到109/L后按文獻所述方法進行流式細胞儀檢測.細胞傳至第3代時將其以2107/L的細胞數(shù)分別轉入各定向培養(yǎng)基（表1）中進行培養(yǎng).誘導培養(yǎng)2wk后，對成脂誘導組進行油紅脂肪顆粒染色，對成骨誘導組進行堿性磷酸酶組化染色，對成軟骨誘導組進行II型膠原染色，對成肌誘導組進行肌漿球蛋白組化染色.結果：觀察2d細胞貼壁.倒置顯微鏡下見細胞為大而扁平的單層細胞.有的細胞體細長，似成纖維細胞.流式細胞儀圖上為單一群體細胞.免疫表型：CD1069.8%,CD1399.2%,CD2991.0%,CD5581.6%,CD5998.6%,CD10598.0%,CD16632.1%,CD140%,CD450%,CD3485.7%,HLADR0%,與國外文獻一致.油紅染色、堿性磷酸酶染色、II型膠原染色陽性、肌漿球蛋白染色分別呈陽性.表1含10g/L青霉素的定向誘導培養(yǎng)基DMEM成份（略）2討論脂肪來源的干細胞（adiposetissuederivedstemcells）雖然具備干細胞的一些特性，但還不能將其稱為脂肪干細胞，因為其中可能含有不同分化階段的脂肪前體細胞（preadipocyte）.從這個意義上講，將其稱為脂肪基質細胞（adiposetissuederivedstromalcells）更為適合1-3.目前在干細胞研究領域均公認，間充質干細胞沒有特異的表面標志.免疫組化染色和流式細胞儀檢測等免疫表型的結果對確認干細胞有輔助作用.而鑒定干細胞的最好方法是進行多系定向誘導，并進行相應檢測以確定誘導成功.而在一些文獻中以偏概全，通過少數(shù)幾個CD分子的免疫組化染色的陽性結果而下結論說所分離出的細胞是干細胞是不可取的4-5.本研究參照Zuk等1的方法進行細胞分離培養(yǎng)，并通過免疫表型和功能誘導2個方向的實驗，取得了與文獻相一致的結果，一方面說明此種方法具備穩(wěn)定的可操作性，另一方面也充分說明所分離培養(yǎng)的脂肪基質細胞中確實含有多向分化潛能的間充質干細胞.【參考文獻】1陳希哲，林云鋒，喬鞠，等.人體脂肪基質細胞分離培養(yǎng)及其成骨潛能J.實用口腔醫(yī)學雜志，2004,20(1):12-15.2余方圓，盧世璧，袁枚，等.兔脂肪干細胞的分離培養(yǎng)及定向誘導為軟骨細胞的實驗觀察J.中國臨床康復，2004,8(11):2042-2043.3劉桂英，楊立業(yè)，鄭佳坤，等.來源于脂肪組織的基質細胞向成骨細胞分化J.實用口腔醫(yī)學雜志，2003,19(6):554-557.4鞠曉東，婁思權，田華，等.脂肪間充質干細胞的基本生物學特性及向成骨細胞誘導分化的實驗研究J.中華實驗外科雜志，2004,